Մանրէաբանական ուսումնասիրությունը ուսումնասիրություն է, որը նախատեսված է մեկուսացնել և ուսումնասիրել դրանց հատկությունները՝ մանրէաբանական ախտորոշում կատարելու համար:

Փորձարկման նյութը պետք է վերցվի ասեպտիկ պայմաններում ստերիլ սպասքի մեջ և հնարավորինս շուտ հանձնվի լաբորատորիա: Անհրաժեշտության դեպքում նմուշները պետք է պահվեն սառնարանում: Նմուշառման տեխնիկան կախված է օբյեկտից, հիվանդության բնույթից և միկրոօրգանիզմի հատկություններից: Մանրէաբանական հետազոտության ամենատարածված մեթոդներից մեկը բակտերիոսկոպիան է:

Չֆիքսված բակտերիաների ուսումնասիրության համար օգտագործվում է երկու մեթոդ՝ մանրացված (սլայդի և ծածկույթի միջև) կաթիլ և. Պետք է հիշել, որ չֆիքսված բակտերիաների պատրաստուկները վարակիչ են։

Ֆիքսված պատրաստուկների բակտերիոսկոպիայի համար օգտագործվում են քսուքներ։ Դրանք պատրաստելու համար փորձարկման հեղուկի մի կաթիլը տարածվում է ապակե սլայդի մակերեսի վրա, ապա չորանում: Դեղամիջոցի ամրագրման ամենատարածված մեթոդը գազի այրիչի բոցի միջով անցկացնելն է: Որոշ դեպքերում օգտագործվում են ամրացնող միացություններ: Ֆիքսված պատրաստուկները սովորաբար ներկվում են (տես Միկրոօրգանիզմների ներկում)։ Համարին էական տարրերՄանրէաբանական ուսումնասիրությունները ներառում են պատվաստումներ և ենթամշակույթներ, որոնք արտադրվում են բակտերիալ օղակի կամ Պաստերի պիպետտի միջոցով: Օղակը մանրէազերծվում է բոցով բովելու միջոցով, այնուհետև սառչում են՝ դիպչելով չպատվաստված ագարի տարածքին կամ ողողելով ստերիլ հեղուկով: Pasteur pipette-ն օգտագործելիս դրա ծայրը պինցետով կտրվում է, պիպետը մի քանի անգամ տեղափոխվում է այրիչի բոցի միջով և թողնում, որ սառչի: Ցանելու ժամանակ օգտագործվում են հեղուկ և պինդ սննդային միջավայրեր։ Թեք ագարի վրա ցանելիս բակտերիաների կուլտուրան օղակով քսում են ագարի մակերեսին։ Ագարի կամ ժելատինային սյունակի հաստությամբ ցանելիս սննդարար միջավայրը օղակով կամ հատուկ ասեղով ծակվում է փորձանոթի հատակին: Հեղուկ միջավայրում ցանելու ժամանակ անհրաժեշտ է ապահովել, որ հեղուկը դուրս չթափվի և չթրջի փորձանոթների և խցանների եզրերը։ Պատվաստումները և ենթամշակույթները պետք է իրականացվեն գազայրիչի բոցի մոտ, փորձանոթները երկար ժամանակ բաց չմնան, մշակույթով օղակը կամ Պաստերի պիպետտը չպետք է որևէ բանի դիպչի. Նախքան խողովակը փակելը, դրա ծայրերը պետք է այրվեն: Պատվաստված խողովակները պետք է անմիջապես մակնշվեն:

Մանրէաբանական հետազոտության ամենակարևոր քայլը նույնականացումն է՝ մաքուր կուլտուրայի տեսքով ստացված բակտերիաների տեսակների կամ տեսակի որոշում: Բակտերիաների հայտնաբերման ժամանակ ուսումնասիրվում են դրանց ֆիզիոլոգիական և կենսաքիմիական հատկությունները, տոքսինների ձևավորումը: Լայնորեն կիրառվում են բակտերիաների հայտնաբերման շճաբանական մեթոդները (ռեակցիաներ և)։ Շատ դեպքերում միկրոօրգանիզմների նույնականացման կենսաբանական մեթոդը արդյունավետ է, որը հիմնված է լաբորատոր կենդանիների վարակման փորձարկման նյութով կամ բակտերիաների բակտերիաների կուլտուրայից առաջացած վարակի և կենդանիների բնորոշ պաթոլոգիական փոփոխությունների բացահայտման վրա:

Մաքուր մշակույթները մեկուսացնելու համար օգտագործվում են մեխանիկական և կենսաբանական մեթոդներ: Մեխանիկական մեթոդի օրինակ. փորձարկման նյութի մի կաթիլը քսվում է նույն ստերիլ սպաթուլայով կամ բակտերիալ օղակով խիտ մակերեսի վրա: աճի միջավայր, հաջորդաբար առաջին, երկրորդ և երրորդում: Մաքուր մշակույթի մեկուսացումը կատարվում է աճեցված առանձին գաղութներից և բաղկացած է թարմ սննդային միջավայրի վրա դրանց ուսումնասիրությունից և զննումից: Մաքուր կուլտուրաների մեկուսացման կենսաբանական մեթոդները հիմնված են մեկուսացված միկրոբի այս կամ այն ​​հատկության հաշվի վրա, որը տարբերում է այն ուսումնասիրվող նյութում առկա այլ մանրէներից:

Կենսաբանական մեթոդում օգտագործվում են այս տեսակի սննդարար միջավայրեր, որոնցում ստեղծվում են պայմաններ, որոնք բարենպաստ են որոշակի տեսակի մանրէների զարգացման համար։ Կենսաբանական մեթոդները ներառում են նաև լաբորատոր կենդանիների վարակումը, որոնք զգայուն են բակտերիաների մեկուսացված տեսակի նկատմամբ:

Մանրէաբանական հետազոտությունը հիվանդի, կրիչի կամ շրջակա միջավայրի օբյեկտների վրա պաթոգեն միկրոօրգանիզմների հայտնաբերման մեթոդների մի շարք է: Մանրէաբանական ուսումնասիրություններԴրանք նաև օգտագործվում են արտաքին միջավայրի աղտոտվածության աստիճանը բնութագրող պայմանականորեն պաթոգեն և սանիտարական ինդիկատիվ մանրէներ հայտնաբերելու, որոշակի միջավայրի (օբյեկտի) մանրէաբանական լանդշաֆտը ուսումնասիրելու համար։ Մանրէաբանական հետազոտությունները կարող են օգտագործվել վարակիչ հիվանդությունների ախտորոշման, կանխարգելման, մարդուն շրջապատող միջավայրի սանիտարահիգիենիկ բնութագրերի, գիտական ​​հետազոտությունների համար:

Մանրէաբանական հետազոտության նյութը և մեթոդը կախված են վերլուծության նպատակից, շրջակա միջավայրի պայմաններից, պաթոգենեզից և հիվանդության ընթացքից: Բակտերեմիայի առկայության դեպքում միկրոբը հայտնաբերվում է արյան կուլտուրայով: Տեղական ծանր վնասվածքների դեպքում հարուցիչը պետք է փնտրել ախտահարված օրգանի արտանետումների կամ սեկրեցների մեջ (դիֆթերիա, դիզենտերիա, գոնորիա և այլն): Ի վերջո, բարդ ընթացք ունեցող հիվանդությունների դեպքում, երբ (ինչպես, օրինակ, որովայնային տիֆի դեպքում) բակտերեմիան փոխարինվում է բարակ աղիների ախտահարումներով, յուրաքանչյուր փուլում կիրառվում է հետազոտության համապատասխան մեթոդ. հիվանդություն, իսկ սերոլոգիական թեստավորումն առավել հուսալի է երկրորդում, երրորդ շաբաթից սկսած կղանք ցանելիս դրական արդյունք է ստացվում. Վերջին մեթոդը կիրառվում է նաև որպես հսկողական հետազոտություն՝ ապաքինվողների շրջանում բակտերիաների կրիչների հայտնաբերման և դրանց մոնիտորինգի համար:

Այս առաջադրանքներից որևէ մեկի իրականացումն իրականացվում է միկրոօրգանիզմների մեկուսացման և նույնականացման համար նախատեսված մեթոդների կիրառմամբ: Կախված միկրոբի առանձնահատկություններից, օգտագործվում են մեթոդների ամբողջ համալիրը կամ դրա մասերը:

Բակտերիոսկոպիան ամենահասանելի տեխնիկան է, որը հիմնված է նյութի մանրադիտակային հետազոտության վրա: Թարմ պատրաստուկների միկրոսկոպիայի ժամանակ կարելի է օգտագործել որոշ միկրոքիմիական ռեակցիաներ (օրինակ՝ յոդոֆիլ բակտերիաների ներկում Լուգոլի լուծույթով) կամ բակտերիաների տարբեր կառուցվածքային մասերի ընտրովի ներկում։

Բակտերիաները կարելի է ավելի հստակ ճանաչել ներկված պատրաստուկում: Փորձարկման նյութը կիրառվում է ապակե սլայդի վրա հնարավորինս բարակ և հավասարաչափ շերտով: Թույլ տվեք, որ պատրաստուկը չորանա օդում և ամրացրեք այն ընդհանուր ընդունված մեթոդներից մեկով, բայց ամենից հաճախ՝ բոցավառելով, այսինքն՝ երկու կամ երեք անգամ արագ պահելով պատրաստուկը այրիչի կրակի վրա, որպեսզի ապակին տաք լինի, բայց ոչ տաք: Ֆիքսվելուց հետո սառեցված պատրաստուկը ներկվում է պարզ կամ դիֆերենցիալ ներկով (տես Միկրոօրգանիզմների ներկում)։ Լյումինեսցենտային մանրադիտակում օգտագործվում են ինչպես բնիկ, այնպես էլ չոր պատրաստուկներ: Այս դեպքում որոշակի ներկանյութերով բուժումը հանգեցնում է նրան, որ մանրէաբանական մարմնի կամ ամբողջ միկրոբի կառուցվածքները փայլում են ուլտրամանուշակագույն կամ կարճ կապույտ ճառագայթներով: Մեկ այլ փոփոխության դեպքում մանրէները մշակվում են հատուկ շիճուկներով, որոնք պիտակավորված են ֆլուորեսցենտներով (ներկանյութերով): Շիճուկին համապատասխան բակտերիաները կփայլեն, երբ պիտակավորված շիճուկը կուտակվի դրանց վրա: Հետերոլոգ բակտերիաները չեն փայլի:

Բակտերիոսկոպիայի մեթոդը լայնորեն կիրառվում է որոշ վարակիչ հիվանդությունների մանրէաբանական ախտորոշման համար (գոնորիա, տուբերկուլյոզ, ռեցիդիվ ջերմություն), ինչպես նաև օրգանի (նուշագեղձեր, հեշտոց), արտադրանքի կամ այլ առարկայի միկրոֆլորայի ամբողջ համալիրի ուսումնասիրության համար:

Սերմնավորման մեթոդը, այսինքն՝ ցանկալի միկրոօրգանիզմի մաքուր մշակույթի մեկուսացումը, մանրէաբանական ախտորոշման ավելի ճշգրիտ և հուսալի մեթոդ է, քան բակտերիոսկոպիան: Թարմ նյութը քսվում է Պետրիի ափսեների մեջ լցված խիտ սննդարար միջավայրի մակերեսին: Առաջնային պատվաստումն իրականացվում է տվյալ միկրոբի համար բարենպաստ սովորական միջավայրերի, դիֆերենցիալ կամ ընտրովի միջավայրերի վրա: Սնուցող միջավայրի ընտրությունը (տես), ինչպես նաև ցանքի համար թարմ նյութի նախնական մշակման եղանակը կախված է ուղեկցող օտար միկրոֆլորայով դրա աղտոտման աստիճանից։ 24-48 ժամ հետո: Թերմոստատի պարունակությունը տվյալ միկրոբի համար օպտիմալ ջերմաստիճանում, բաժակները հետազոտվում են, և կասկածելի գաղութները պատվաստվում են կրիչների վրա, որոնք նպաստում են այս հարուցչի վերարտադրությանը: Այսպիսով, ստացվում է միատարր բակտերիաների մշակույթ, որը պետք է նույնականացվի:

Մանրէների նույնականացումը սկսվում է ներկված պատրաստուկում և մանրացված կաթիլում նրա մորֆոլոգիայի ուսումնասիրությամբ (տես) մանրէների ձևի և նրանց շարժունակության սահմանման համար: Հաջորդ քայլը բակտերիաների ֆերմենտային կարողության ուսումնասիրությունն է՝ ածխաջրերը, ամինաթթուները և միզանյութը տարրալուծելու յուրաքանչյուր տեսակի համար հատուկ համակցություններով: Բակտերիաներն ունեն ամենաշատ ուսումնասիրված շաքարավազը և պրոտեոլիտիկ ֆերմենտները:

Մանրէների նույնականացումը պետք է լրացվի միկրոօրգանիզմների յուրաքանչյուր սեռին և տեսակին բնորոշ այլ հատկությունների ուսումնասիրությամբ: Այս հատկությունները ներառում են տարբեր կենդանիների էրիթրոցիտները ընտրողաբար լուծելու (հեմոլիզ), արյան պլազմայի մակարդման (պլազմայի կոագուլյացիա), ֆիբրինային թրոմբը լուծելու (ֆիբրինոլիզ) կարողությունը:

Որոշ տեսակների մանրէների, հիմնականում աղիքային ընտանիքի պաթոգեն բակտերիաների վերջնական նույնականացումը ներառում է սերոլոգիական նույնականացում (տես Մանրէաբանական նույնականացում): Սովորաբար դրա համար սահմանվում է ագլյուտինացիոն ռեակցիա, այսինքն՝ բակտերիաների կուտակումը հայտնաբերվում է նույնանուն իմունային շիճուկի ազդեցության տակ։ Շիճուկում մանրէների ագլյուտինացիան որոշակի տեսակի նկատմամբ վկայում է այդ տեսակին պատկանելու մասին: Սովորաբար, ագլյուտինացման ռեակցիան տեղադրվում է մոտավորապես ապակու վրա և վերջնական որոշման համար շիճուկային նոսրացումներով փորձանոթներում:

Մի շարք մանրէներ չեն կարող ամբողջությամբ որոշվել նկարագրված ձևով: Այնուհետև նույնականացումը պետք է լրացվի լաբորատոր կենդանիների վարակմամբ, քանի որ որոշ բակտերիաներ բնութագրվում են ախտածինությամբ կամ թունավորությամբ, ինչը բացահայտվում է կենդանիների վարակման ժամանակ: Որոշ դեպքերում կենդանիների վարակը ծառայում է նաև որպես ախտածին մանրէների կուտակման մեթոդ։

Միայն մորֆոլոգիայի, կենսաքիմիական, սերոլոգիական և, անհրաժեշտության դեպքում, կենսաբանական հատկությունների ուսումնասիրության ընթացքում հավաքված մշակույթի բոլոր բնութագրերի համեմատությունը կարող է նույնականացման հիմքեր տալ: Հետազոտության դրական արդյունքով պատասխանը դժվար չէ, եթե առանձնացված միկրոբը բնորոշ է։ Այս դեպքում նշվում են բակտերիաների սեռը, տեսակը և որոշվելու դեպքում՝ տեսակը։ Որոշ հատկություններով տիպիկ հատկանիշից շեղվող միկրոբը առանձնացնելիս տրվում է պատասխան, որը ցույց է տալիս շեղման հատկանիշը: Այս դեպքում օգտակար է կրկնել ուսումնասիրությունը, եթե հիվանդության ընթացքը կամ նյութերի հավաքման պայմանները թույլ են տալիս։ Օգտակար է նաև ատիպիկ մանրէների կուլտուրան լրացուցիչ ուսումնասիրության ենթարկել այլ, ավելի բարդ մեթոդներով։

Մանրէաբանական հետազոտության բացասական արդյունքները հարաբերական նշանակություն ունեն և միայն ցույց են տալիս, որ նյութի ուսումնասիրված հատվածը չի պարունակում ցանկալի մանրէներ կամ կենսունակ չէ: Այնուամենայնիվ, դրանք կարող են առկա լինել այլ հատվածում: Ուստի, օրինակ, բացիլ կրողների (որովայնային տիֆ, դիզենտերիա, դիֆթերիա) հետազոտման ժամանակ պահանջվում են կրկնակի հետազոտություններ։

Դրանցում որոշակի բակտերիաների առկայության անալիզներն ուսումնասիրելու համար օգտագործվում են տարբեր ախտորոշիչ մեթոդներ, այդ թվում՝ բակտերիոսկոպիկ մեթոդ։ Այս մեթոդի առանձնահատկությունները, ինչպես նաև մանրէաբանական հետազոտության մեթոդը կքննարկվեն այս հոդվածում:

Բակտերիոսկոպիկ ախտորոշման մեթոդի էությունը

Նմուշի հետազոտման բակտերիոսկոպիկ մեթոդը նախատեսված է փորձարկվող նյութում միկրոօրգանիզմների հայտնաբերման, ինչպես նաև այդ միկրոօրգանիզմների հատկությունների մանրամասն ուսումնասիրման, դրանց քանակի և վարքի պարզաբանման համար: Վերլուծությունների ուսումնասիրման այս մեթոդի առավելություններն են պարզությունը, արագությունը և մատչելիությունը: Այն կարող է իրականացվել գրեթե ցանկացած լաբորատորիայում՝ օգտագործելով նվազագույն թվով գործիքներ և քիմիական նյութեր: Դրա թերությունները ներառում են մանրէների վարքագծի ամբողջական պատկերացում ստանալու անհնարինությունը:

Հետազոտության համար անհրաժեշտ նյութեր

Անալիզները բակտերիոսկոպիկ մեթոդով ուսումնասիրելու համար անհրաժեշտ են հետևյալ գործիքները.

1. Մետաղական հանգույց.
2. Սլայդ. Այս տարրը պետք է մաքուր լինի, քանի որ ցանկացած աղտոտվածություն կարող է ազդել նմուշի վիճակի վրա:
3. Պինցետներ.
4. Զտիչ թուղթ.

Նոր սլայդները մաքրվում են 1% սոդայի լուծույթով։ Նման լուծույթում եռալուց հետո բաժակը լվանում են թորած ջրով, թույլ լուծույթով աղաթթվիիսկ հետո նորից թորած ջրով։ Օգտագործված բաժակները մաքրվում են մի քանի փուլով՝ նախ 60-120 րոպե տեղադրում են ծծմբաթթվի լուծույթի մեջ, ապա եռացնում են սոդայի լուծույթի մեջ, որից հետո բաժակը լվանում են ջրով։ Դրանից հետո ապակին թաթախում են բժշկական սպիրտի մեջ։

Գործիքների ակնոցները պահեք կամ սպիրտի մեջ կամ ամուր փակ տարաներում: Իսկ վերջին դեպքում ապակին պետք է չոր լինի։

Այս ուսումնասիրության համար ձեզ անհրաժեշտ կլինեն նաև հետևյալ քիմիական ռեակտիվները.

• Ալկոհոլը;
• Լուգոլի լուծում;
• Ներկանյութեր.

Առավել հաճախ օգտագործվող ներկանյութերն են Ziehl magenta, methylene blue և carbolic gentian violet: Վերջին ներկը սովորական ֆուքսինի լուծույթ է հինգ տոկոս կարբոլիկ ջրի մեջ:

Հետազոտության առաջընթաց

Դուք կարող եք ուսումնասիրել մշակույթը ինչպես իր սկզբնական, այնպես էլ ներկված տեսքով: Վերջին դեպքում ինչպես միկրոօրգանիզմների, այնպես էլ առանձին բակտերիաների գաղութները կմահանան, ինչը հնարավորություն է տալիս ավելի լավ ծանոթանալ այս պարզ օրգանիզմների կառուցվածքին: Դեղամիջոցն իր սկզբնական տեսքով ուսումնասիրելիս, իր հերթին, լաբորանտը ավելի շատ տեղեկություններ է ստանում մանրէների գործունեության մասին։ Երկու դեպքում էլ դեղը հետազոտվում է մանրադիտակի միջոցով:

Միջավայրի ներկումը կատարվում է երկու փուլով, նախ պատրաստում են պրոցեդուրաների համար նախապատրաստումը և միայն դրանից հետո ներկվում։ Նմուշի պատրաստումն ընթանում է հետևյալ կերպ.

1. Հետազոտության համար նախատեսված նմուշը հավասարաչափ բաշխվում է գործիքի ապակու վրա շրջանագծի կամ օվալի տեսքով: Եթե ​​նյութի մեջ կան օտար կեղտեր (օրինակ՝ թարախ), ապա փորձանմուշը ավելացնելուց առաջ ապակու վրա 1-2 կաթիլ ջուր են լցնում։
2. Դրանից հետո ստացված քսուքը պետք է չորացնել։
3. Հենց որ քսուքը չորանա, այն պետք է ամրացվի այրիչի բոցով։

Այս կերպ ամրացնելու համար գործիքի ապակին երեք անգամ պահում են կրակի վրա: Եթե ​​քսուքը բավականաչափ ամուր ամրացվի, ապա փորձն անցկացնող լաբորանտը մատների մեջ այրվող սենսացիա կզգա։

Այս ընթացակարգի վերջում նմուշը ներկվում է:

Նմուշի ներկման մեթոդներ

Գունավորումը կարող է լինել պարզ՝ օգտագործելով մեկ ներկ: Եվ բարդ, որի մեջ բակտերիալ բջիջները ճշգրիտ տարբերակելու համար ըստ դրանցից մեկի կամ մյուսի բնութագրերըմի քանի տարբեր ներկող քիմիական նյութեր հաջորդաբար կիրառվում են նմուշի վրա: Համալիր ներկման օրինակ են Gram և Ziehl-Neelsen մեթոդները:

Գրամ մեթոդ

Գրամ մեթոդը թույլ է տալիս որոշել քիմիական բաղադրությունըԲջջային թաղանթ. Այս մեթոդի շնորհիվ ներկայացվեց բակտերիաների դասակարգումը ըստ Գրամի. գրամ դրական բակտերիաները (որոնք ներառում են բազմաթիվ հիվանդությունների հարուցիչներ) ներկելուց հետո ձեռք են բերում մուգ մանուշակագույն երանգ, իսկ գրամ-բացասական բակտերիաները ձեռք են բերում բնորոշ կարմիր երանգ: Գրամ մեթոդը բաղկացած է հետևյալ քայլերից.

1. Նախ, դեղը մեկ րոպեի ընթացքում բուժվում է Լուգոլի լուծույթով:
2. Լուգոլի հետ բուժումից հետո նմուշը գունազերծվում է սպիրտով:
3. Այնուհետև պատրաստուկը լվանում են թորած ջրով և լրացուցիչ ներկվում ֆուքսինով։

Ziehl-Neelsen մեթոդը

Ziehl-Nielsen մեթոդը օգտագործվում է թթվային զգայուն բակտերիաների որոշման համար, որոնց բջջային թաղանթները պարունակում են մեծ քանակությամբ լիպիդներ, օրինակ՝ տուբերկուլյոզի հարուցիչներ։ Այս մեթոդի վրա աշխատանքն իրականացվում է հինգ փուլով.

1. Ապակե սլայդի վրա դրվում է զտիչ թուղթ, որի վրա այնուհետև կիրառվում է Ziel's fuchsin-ի փոքր քանակություն:
2. Ապակու սլայդն այնուհետև տաքացվում է, մինչև հայտնվի բնորոշ գոլորշի: Գոլորշի հայտնվելուց հետո ապակին թույլ է տալիս սառչել։ Այս պրոցեդուրան կրկնում են եւս երկու անգամ, որից հետո թողնում են ապակին կրկին սառչի։
3. Դրանից հետո ֆուկսինը գործիքի ապակուց լվանում են թորած ջրով, թուղթը հանելուց հետո։
4. Այնուհետև ապակին դրվում է աղաթթվի կամ ծծմբաթթվի լուծույթի մեջ, մինչև նմուշի գույնը ամբողջությամբ կորչի։
5. Ի վերջո, գունաթափված պատրաստուկի վրա կիրառվում է մեթիլեն կապույտի լուծույթ, ապակին լվանում են թորած ջրով և թողնում են չորանա՝ ստացված պատրաստուկը մանրադիտակի տակ հետագա հետազոտման համար:

Լեֆլերի մեթոդ

Գունավորման պարզ մեթոդներից է Լեֆլերի մեթոդը։ Դրանով ձեռք են բերում բոլոր բակտերիաները Կապույտ գույն. Այս մեթոդն աշխատում է երկու քայլով.

1. Քսվածքի վրա դրվում է զտիչ թուղթ, որի վրա կիրառվում է մեթիլեն կապույտ Լեֆլերի լուծույթ։ Այս վիճակում դեղը թողնում են 3-5 րոպե։
2. Նշված ժամանակահատվածից հետո պատրաստուկը լվանում են ջրով և չորացնում, որից հետո այն կարելի է հետազոտել մանրադիտակի տակ։

Բակտերիոսկոպիկ մեթոդով ներկվում են առնվազն երկու պատրաստուկներ, որոնցից մեկը ներկվում է. պարզ մեթոդիսկ մեկը բարդ է:

Մանրէաբանական մեթոդ

Հաճախ անալիզները ուսումնասիրելիս անհրաժեշտ է դառնում որոշել պաթոգենի զգայունությունը որոշակի դեղամիջոցի նկատմամբ: Այս դեպքում նմուշը հետազոտվում է մանրէաբանական մեթոդով։ Այս մեթոդըբաղկացած է հետևյալ քայլերից.

• Նախ, դուք պետք է մաքրեք մշակույթը, որպեսզի հայտնաբերեք մանրէների որոշակի տեսակներ: Դա անելու համար նմուշը պետք է տեղադրվի այնպիսի միջավայրում, որտեղ ամենայն հավանականությամբ հայտնաբերվող բակտերիաների զարգացումն է: Հնարավոր է նաև մեխանիկորեն առանձնացնել կենսանյութը դրա պատվաստման ժամանակ։
• Մաքուր մշակույթ ստանալուց հետո դրանից վերցված նմուշները հետազոտվում են բակտերիոսկոպիկ մեթոդով։

Ստորև բերված են միկրոօրգանիզմների հայտնաբերման համար օգտագործվող կրիչների օրինակներ.

• Էլշնիգի միջավայրը, որը բաղկացած է ձիու շիճուկի մեկ երրորդից և արգանակի երկու երրորդից:
• Լոֆլերի շիճուկ, որն օգտագործվում է դիֆթերիայի հարուցիչների հայտնաբերման համար։ Այս միջավայրը բաղկացած է 3/4 ձիու կամ տավարի շիճուկից և 1/4 1% գլյուկոզայի արգանակից:
• Արյան ագարը օգտագործվում է streptococci-ի հայտնաբերման և հակաբակտերիալ դեղամիջոցների ազդեցության նկատմամբ նրանց զգայունությունը ստուգելու համար: Այս միջավայրը բաղկացած է 5-10% կենդանական շիճուկից և ագարից:

Բակտերիոսկոպիկ անալիզների տեսակները

Աթոռի թեստերի բակտերիոսկոպիա

Կղանքի անալիզի բակտերիոսկոպիկ հետազոտության համար անհրաժեշտ է հիվանդի անալիզների նմուշ: Եթե ​​անհրաժեշտ է վերլուծել աղիքային միկրոֆլորան, խախտումները, որոնցում վկայում են դիսբակտերիոզի կամ մարսողական համակարգի վարակիչ հիվանդությունների առկայությունը, նմուշը վերցվում է օղակի միջոցով, որը մտցվում է անուսի մեջ մոտ 10 սանտիմետր խորությամբ:

Աթոռի նմուշը հետազոտելիս կարելի է հայտնաբերել հետևյալ վտանգավոր միկրոօրգանիզմները.

• Ստաֆիլոկոկներ.
• Կլեբսիելլա, որի առկայությունը վկայում է հաստ աղիքի վնասման մասին։
• Pseudomonas aeruginosa-ն արտազատում է տոքսիններ, որոնք չափազանց վտանգավոր են մարդկանց համար:

Pseudomonas aeruginosa-ի առկայությունը մարդու օրգանիզմում կարող է հանգեցնել արյան թունավորման և մենինգիտի՝ հիվանդությունների, որոնք կարող են մահացու լինել:

մեզի թեստերի բակտերիոսկոպիա

Բակտերիոսկոպիկ հետազոտության համար մեզի թեստ է տրվում, եթե կասկածվում է միզուղիների համակարգի բորբոքում և այնպիսի հիվանդությունների առկայություն, ինչպիսիք են պիելոնեֆրիտը և ցիստիտը, որոնց հարուցիչները համապատասխանաբար Escherichia coli-ն և սեռական ճանապարհով փոխանցվող հիվանդությունների որոշ հարուցիչներ են: Նման հետազոտության համար անհրաժեշտ է 50-ից 100 մլ մեզ, իսկ մեզը պետք է պահել ստերիլ տարայի մեջ: Անալիզի անցնելուց առաջ անհրաժեշտ է լավ լվանալ, որպեսզի մեզի մեջ երրորդ կողմի կեղտերը քիչ լինեն։ Խորհուրդ չի տրվում միզել դաշտանի ժամանակ։

Նորածինների մոտ միզուղիների համակարգի հիվանդությունների հայտնաբերման համար մեզի բակտերիոսկոպիկ անալիզը անփոխարինելի է: Այս դեպքում մեզը հավաքվում է կաթետերի միջոցով ստերիլ տարայի մեջ: Մեզի նմուշի ուսումնասիրությունը պետք է իրականացվի որքան հնարավոր է շուտ, հակառակ դեպքում ախտածինների հայտնաբերումը դժվար կլինի:

Թոքի բակտերիոսկոպիա

Թոքը վերլուծելիս հետազոտվում է երկու քսուք։ Դրանցից մեկն ուսումնասիրվում է Կոխի բացիլների՝ տուբերկուլյոզի հարուցիչների առկայության համար։ Երկրորդ հետազոտության արդյունքների հիման վրա եզրակացություններ են արվում խորխում այլ միկրոբների առկայության մասին։

Թոքը տուբերկուլյոզի համար վերլուծելու համար նմուշը ներկվում է Ziehl-Neelsen մեթոդով:

Այլ մանրէների առկայությունը վերլուծելու համար նմուշը ներկվում է Gram մեթոդով: Գրամ ներկման միջոցով բակտերիոսկոպիկ մեթոդի օգնությամբ հնարավոր է բացահայտել թոքաբորբը առաջացնող բակտերիա՝ թոքաբորբը: Նաև այս սխեմայի համաձայն նմուշի հետ աշխատելիս հնարավոր է հայտնաբերել streptococci-ի առկայությունը խորխի մեջ՝ անգինայի հարուցիչները, ինչպես նաև Staphylococcus aureus-ը: Վերջին միկրոօրգանիզմը հատուկ վտանգ է ներկայացնում մարդու առողջության համար։ Այն հրահրում է թարախային պրոցեսներ և թարախակույտերի առաջացում, այդ թվում՝ վրա ներքին օրգաններ.

Ամփոփելով

Բակտերիոսկոպիկ ախտորոշման մեթոդը մանրէաբանության հիմնական հետազոտական ​​մեթոդներից է։ Չնայած իր թերություններին, այս մեթոդը լայնորեն կիրառվում է ժամանակակից բժշկությունհիվանդությունների լայն տեսականի ախտորոշելու համար, որոնցից մի քանիսը, օրինակ՝ տուբերկուլյոզը, հատուկ վտանգ են ներկայացնում մարդկանց համար։

Մանրէաբանական հետազոտության մեթոդ (BLMI)- մեթոդ, որը հիմնված է բակտերիաների մաքուր կուլտուրաների մեկուսացման վրա՝ սնուցող միջավայրում մշակման և տեսակների հետ դրանց նույնականացման վրա՝ հիմնված միկրոօրգանիզմների մորֆոլոգիական, մշակութային, կենսաքիմիական, գենետիկական, սերոլոգիական, կենսաբանական, էկոլոգիական բնութագրերի ուսումնասիրության վրա։

Ինֆեկցիաների մանրէաբանական ախտորոշումն իրականացվում է Առողջապահության նախարարության կողմից հաստատված ստանդարտ ախտորոշիչ սխեմաների միջոցով:

Մաքուր մշակույթ -սնուցող միջավայրի վրա աճեցված նույն տեսակի բակտերիաներ, որոնց հատկությունները ուսումնասիրման փուլում են։

Լարում- նույն տեսակի միկրոօրգանիզմների բացահայտված մաքուր մշակույթ, որը մեկուսացված է որոշակի աղբյուրից որոշակի ժամանակ: Նույն տեսակի շտամները կարող են աննշանորեն տարբերվել կենսաքիմիական, գենետիկական, սերոլոգիական, կենսաբանական և այլ հատկություններով, ինչպես նաև մեկուսացման վայրով և ժամանակով։

BLMI-ի նպատակները.

1. Էթիոլոգիական ախտորոշում. միկրոօրգանիզմների մաքուր մշակույթի մեկուսացում և դրա նույնականացում:

2. Լրացուցիչ հատկությունների որոշում, օրինակ՝ միկրոօրգանիզմի զգայունությունը հակաբիոտիկների և բակտերիոֆագների նկատմամբ։

3. Միկրոօրգանիզմների քանակի որոշում (կարևոր է UPM-ով առաջացած վարակների ախտորոշման մեջ):

4. Միկրոօրգանիզմների տիպավորում, այսինքն՝ ուսումնասիրության հիման վրա ներտեսակային տարբերությունների որոշում գենետիկև համաճարակաբանական(ֆագովարներ և սերովարներ) մարկերներ.Սա օգտագործվում է համաճարակաբանական նպատակներով, քանի որ այն թույլ է տալիս հաստատել տարբեր հիվանդներից և արտաքին միջավայրի տարբեր օբյեկտներից, տարբեր հիվանդանոցներում, աշխարհագրական շրջաններում մեկուսացված միկրոօրգանիզմների ընդհանրությունը:

BLMI-ն ներառում է մի քանի փուլ.տարբեր են աերոբների, ֆակուլտատիվ անաէրոբների և պարտադիր անաէրոբների համար:

I. BLMI-ի փուլերը աերոբների և ֆակուլտատիվ անաէրոբների մաքուր մշակույթի մեկուսացման մեջ:

Բեմ.

Ա. Նյութի հավաքում, տեղափոխում, պահպանում, նախնական մշակում:Երբեմն ցանքից առաջ կատարվում է նյութի ընտրովի մշակում՝ հաշվի առնելով մեկուսացված միկրոօրգանիզմի հատկությունները։ Օրինակ, նախքան թուքը կամ այլ նյութը թթվակայուն Mycobacterium tuberculosis-ի առկայությունը հետազոտելը, նյութը մշակվում է թթվային կամ ալկալային լուծույթներով:

Բ. Սերմնացան հարստացման միջավայրում(անհրաժեշտության դեպքում) Այն իրականացվում է, եթե փորձարկման նյութը պարունակում է փոքր քանակությամբ բակտերիաներ, օրինակ՝ արյան կուլտուրան մեկուսացնելիս: Դրա համար ջերմության բարձրության վրա մեծ ծավալով (8-10 մլ մեծահասակների մոտ, 4-5 մլ երեխաների մոտ) վերցված արյունը 1:10 հարաբերակցությամբ պատվաստվում է միջավայրի մեջ (արյան բակտերիասպան գործողությունը հաղթահարելու համար): գործոններ); ցանքը ինկուբացվում է 37 0 C ջերմաստիճանում 18-24 ժամ։

Բ. Փորձարկման նյութի մանրադիտակ:Փորձարկման նյութից պատրաստվում է քսուք, որը ներկվում է գրամով կամ այլ եղանակով և մանրադիտակով: Գնահատեք առկա միկրոֆլորան, դրա քանակը: Հետագա հետազոտության ընթացքում առաջնային քսուքում առկա միկրոօրգանիզմները պետք է մեկուսացվեն:

Գ. Սննդային միջավայրերի վրա ցանքս՝ մեկուսացված գաղութներ ստանալու նպատակով:Նյութը պատվաստվում է օղակով կամ սպաթուլայի միջոցով՝ մեխանիկական բաժանման միջոցով դիֆերենցիալ ախտորոշիչ կամ ընտրովի միջավայրով ափսեի վրա՝ մեկուսացված գաղութներ ստանալու համար: Ցանքից հետո կերակրատեսակը տակնուվրա են անում (գաղութները խտացնող հեղուկի կաթիլներով քսելուց խուսափելու համար), ստորագրում և 18-24 ժամ 37 0 C ջերմաստիճանի թերմոստատի մեջ դնում։

Պետք է հիշել, որ մանրէաբանական կուլտուրաներ ցանելու և ցանելու ժամանակ աշխատողի ուշադրությունը պետք է հրավիրվի ասեպսիսի կանոնների պահպանման վրա՝ կանխելու սննդանյութերի աղտոտումը և կանխելու ուրիշների վարակումը և ինքնավարակումը:

Օպորտունիստական ​​միկրոօրգանիզմներով առաջացած վարակների դեպքում, որտեղ կարևոր է պաթոլոգիական նյութում առկա միկրոօրգանիզմների քանակը, կատարվում է նյութի քանակական պատվաստում, որի համար պատրաստվում է նյութի 100 անգամ նոսրացումների շարք (սովորաբար 3 նոսրացում): նատրիումի քլորիդի ստերիլ իզոտոնիկ լուծույթում փորձանոթներում: Դրանից հետո յուրաքանչյուր նոսրացումից 50 մկլ ցանվում է Պետրիի կերակրատեսակների սննդարար միջավայրերի վրա։

Բեմ.

Ա. Գաղութների մորֆոտիպերի ուսումնասիրություն կրիչների վրա, դրանց մանրադիտակը:Նրանք նայում են ճաշատեսակների միջով և նշում օպտիմալ սննդային միջավայրը, աճի արագությունը և միկրոօրգանիզմների աճի բնույթը: Ընտրեք սովորել մեկուսացված գաղութներ, որոնք տեղակայված են ինսուլտի երկայնքով, կենտրոնին ավելի մոտ:Եթե ​​աճում են մի քանի տեսակի գաղութներ, ապա յուրաքանչյուրն առանձին հետազոտվում է: Գնահատեք գաղութների նշանները (աղյուսակ. 7): Անհրաժեշտության դեպքում մշակաբույսերով սպասքը դիտվում է խոշորացույցով կամ փոքր խոշորացման ոսպնյակով և նեղացված բացվածքով մանրադիտակի միջոցով: Նրանք ուսումնասիրում են գաղութների տարբեր մորֆոտիպերի թուրմային հատկությունները, դրա համար պատրաստվում է ուսումնասիրվող գաղութի մի մասը. քսել,ներկված գրամով կամ այլ մեթոդներով, մանրադիտակով և որոշվում է կուլտուրայի մաքրության մորֆոլոգիան, անհրաժեշտության դեպքում դնել ցուցիչ ՀՀ ապակու վրաբազմավալենտ շիճուկներով։

Բ. Մաքուր մշակույթի կուտակում.Մաքուր կուլտուրա կուտակելու համար բոլոր մորֆոտիպերի մեկուսացված գաղութները ենթամշակվում են առանձին փորձանոթների մեջ թեք ագարով կամ որևէ այլ սննդարար միջավայրով և ինկուբացվում +37 0 C ջերմաստիճանում (այս ջերմաստիճանը օպտիմալ է միկրոօրգանիզմների մեծ մասի համար, բայց այն կարող է տարբեր լինել. օրինակ, համար Campylobacterium spp.- +42 0 C, Candida spp. և Yersinia pestis- +25 0 C):

Kligler-ի միջավայրը սովորաբար օգտագործվում է որպես էնտերոբակտերիաների կուտակման միջավայր:

Kligler միջավայրի կազմը. MPA, 0,1% գլյուկոզա, 1% լակտոզա, ջրածնի սուլֆիդի ռեագենտ (երկաթի սուլֆատ + նատրիումի թիոսուլֆատ + նատրիումի սուլֆիտ), ֆենոլի կարմիր ցուցիչ: Միջավայրի սկզբնական գույնը ազնվամորու-կարմիր է, միջավայրը «թեքված» է փորձանոթներում. ունի սյուն (2/3) և թեքված մակերես (1/3):

Կլիգլերի միջավայրում ցանքը կատարվում է մակերեսի վրա հարվածի և սյունակի մեջ ներարկման միջոցով։

Բեմ.

Ա. Կուտակային միջավայրի վրա աճի հաշվառում, մշակույթի մաքրության գնահատումԳրամի քսուքի մեջ: աճի օրինաչափություններմեկուսացված մաքուր մշակույթ. Տեսողական մաքուր մշակույթը բնութագրվում է միատեսակ աճով: ժամը մանրադիտակային հետազոտություննման կուլտուրայից պատրաստված ներկված քսուք, նրանում տարբեր տեսադաշտերում հայտնաբերվում են մորֆոլոգիական և երանգային միատարր բջիջներ։ Այնուամենայնիվ, բակտերիաների որոշ տեսակներին բնորոշ ընդգծված պլեմորֆիզմի դեպքում, տարբեր մորֆոլոգիա ունեցող բջիջները կարող են միաժամանակ հայտնվել մաքուր կուլտուրայից ստացված քսուքներում:

Եթե ​​որպես կուտակման միջավայր օգտագործվել է Kligler ցուցիչ միջավայրը, ապա գնահատվում են դրա գունային փոփոխությունները սյունակում և թեքված հատվածում, ըստ որի որոշվում են կենսաքիմիական հատկությունները՝ գլյուկոզայի, կաթնաշաքարի խմորում և ջրածնի սուլֆիդի արտադրություն։ Երբ կաթնաշաքարը քայքայվում է, միջավայրի թեք հատվածը դառնում է դեղին, երբ գլյուկոզան քայքայվում է, սյունը դառնում է դեղին: Շաքարների տարրալուծման ժամանակ CO 2-ի առաջացմամբ առաջանում են գազի պղպջակներ կամ սյունակի ընդմիջում։ Ջրածնի սուլֆիդի արտադրության դեպքում ներարկման երկայնքով նկատվում է սևացում՝ երկաթի սուլֆատի վերածման պատճառով:

Kligler միջավայրի գույնի փոփոխության բնույթը (նկ. 23) բացատրվում է միկրոօրգանիզմների կողմից ազոտային նյութերի քայքայման անհավասար ինտենսիվությամբ և ալկալային արտադրանքների ձևավորմամբ՝ աերոբ (թեք մակերևույթի վրա) և անաէրոբ (մի սյունակ) պայմանները:

Աերոբիկ պայմաններում թեք մակերեսի վրա առաջանում է ավելի ինտենսիվ ալկալիների առաջացում, քան միջին սյունակում։ Հետևաբար, միջավայրում փոքր քանակությամբ առկա գլյուկոզայի տարրալուծման ժամանակ փորված մակերեսի վրա ձևավորված թթուն արագորեն չեզոքացվում է: Միևնույն ժամանակ, կաթնաշաքարի տարրալուծման ժամանակ, որը առկա է բարձր կոնցենտրացիայի միջավայրում, ալկալային արտադրանքները չեն կարողանում չեզոքացնել թթուն:

Անաէրոբ պայմաններում սյունակում ալկալային արտադրանքները ձևավորվում են աննշան քանակությամբ, ուստի այստեղ հայտնաբերվում է գլյուկոզայի խմորում:

Բրինձ. 23. Kligler ցուցանիշի միջին:

1 - սկզբնական,

2 - աճով E. coli

3- աճով S. paratyphi B,

4 - աճով S. typhi

E. coliքայքայվում է գլյուկոզան և կաթնաշաքարը գազերի ձևավորմամբ, չեն արտադրում ջրածնի սուլֆիդ: Դրանք առաջացնում են սյունակի և թեք հատվածի դեղնացում՝ մեդիա ընդմիջումներով:

S. paratyphiքայքայել գլյուկոզա գազի ձևավորման հետ, լակտոզա-բացասական: Դրանք ընդմիջումներով սյունակի դեղնացում են առաջացնում, թեք հատվածը չի փոխում գույնը և մնում է ազնվամորու։ Որտեղ S. paratyphi Bարտադրում է ջրածնի սուլֆիդ (ներարկման ժամանակ սև գույն է հայտնվում), S. paratyphi Աջրածնի սուլֆիդ չի արտադրվում:

S. typhiքայքայել գլյուկոզա առանց գազի առաջացման, լակտոզա-բացասական, արտադրել ջրածնի սուլֆիդ: Դրանց պատճառով սյունը դեղնում է առանց ընդմիջումների, թեքված հատվածը չի փոխում գույնը և մնում է ազնվամորու, ներարկման ժամանակ առաջանում է սև գույն։

Shigella spp.գլյուկոզա-դրական, լակտոզա-բացասական, չեն արտադրում ջրածնի սուլֆիդ: Նրանք առաջացնում են սյունակի դեղնացում (կախված սերովարից կամ առանց ընդմիջումներով), թեքված հատվածը չի փոխում գույնը և մնում է բոսորագույն։

Բ. Մաքուր մշակույթի վերջնական նույնականացում(մեկուսացված միկրոօրգանիզմի համակարգված դիրքի որոշում տեսակների կամ տարբերակի մակարդակին) և հակաբիոտիկների նկատմամբ մեկուսացված մշակույթի զգայունության սպեկտրի որոշում:

Այս փուլում մաքուր մշակույթը բացահայտելու համար ուսումնասիրվում են կենսաքիմիական, գենետիկական, սերոլոգիական և կենսաբանական բնութագրերը (Աղյուսակ 8):

Սովորական լաբորատոր պրակտիկայում նույնականացման ընթացքում բոլոր հատկությունները ուսումնասիրելու կարիք չկա: Օգտագործեք տեղեկատվական, մատչելի, պարզ թեստեր, բավարար է մեկուսացված միկրոօրգանիզմի տեսակային (տարբերակային) պատկանելությունը որոշելու համար։

5. Բակտերիաների հիմնական ձեւերը

6. Վարակիչ հիվանդությունների ախտորոշման մանրադիտակային մեթոդ

7. Գունավորման պարզ և բարդ մեթոդներ

8. Gram և Ziehl-Neelsen բծերի մեխանիզմները

III. Գործնական աշխատանքային պլան

IV. Իրավիճակային առաջադրանքների օրինակներ

Թեմա 2. Գունավորման հատուկ մեթոդներ. Կենսաբանական մանրադիտակի սարք. Տեսակներ

I. Հարցեր ինքնուրույն ուսումնասիրության համար.

II. հիմնական տեքստը

1. Առանձին բակտերիաների կառուցվածքները բացահայտելու հատուկ գունազարդման մեթոդներ

2. Գունավորման մեթոդներ պրո- և էուկարիոտների առանձին խմբերի համար

3. Միկրոօրգանիզմների շարժունակության ուսումնասիրություն

4. Մանրադիտակի տեսակները

5. Կենսաբանական մանրադիտակի սարքը

6. Սուզման մանրադիտակի ընթացակարգը

III. Գործնական աշխատանքային պլան

IV. Իրավիճակային առաջադրանքների օրինակներ

Թեմա 3. Միկրոօրգանիզմների առանձին խմբերի մորֆոլոգիա և ուլտրակառուցվածք՝ ռիկեցիաներ, քլամիդիա, միկոպլազմաներ, ակտինոմիցետներ, սպիրոխետներ, սնկեր, նախակենդանիներ.

I. Հարցեր ինքնուրույն ուսումնասիրության համար.

II. հիմնական տեքստը

III. Գործնական աշխատանքային պլան

IV. Իրավիճակային առաջադրանքների օրինակներ

Գիտելիքի սահմանային հսկողության տեսական հարցեր

Գործնական հմտությունների ցանկ

Մոդուլ ιι «Միկրոօրգանիզմների ֆիզիոլոգիա»

I. Հարցեր ինքնուրույն ուսումնասիրության համար.

II. հիմնական տեքստը

1. Կազմը և պահանջները սննդանյութերի միջավայրին

2. Սննդային միջավայրերի դասակարգում

3. Ասեպսիս և հակասեպսիս հասկացությունները

4. Ախտահանման հայեցակարգը, ախտահանման մեթոդները և ախտահանման արդյունավետության վերահսկումը

5. Ստերիլիզացման հայեցակարգը, մեթոդները, սարքավորումները և ստերիլիզացման եղանակները

6. Ստերիլիզացման արդյունավետության որոշման մեթոդներ

7. Տեսակի, շտամի, գաղութի, միկրոօրգանիզմների մաքուր կուլտուրա հասկացությունը

8. Միկրոօրգանիզմների մաքուր կուլտուրաների մեկուսացման մեթոդներ

9. Վարակիչ հիվանդությունների ախտորոշման մանրէաբանական մեթոդ

10. Միկրոօրգանիզմների պատվաստման տեխնիկա

11. Անաէրոբ բակտերիաների աճեցման առանձնահատկությունները

III. Գործնական աշխատանքային պլան

IV. Իրավիճակային առաջադրանքների օրինակներ

Վարակիչ հիվանդությունների ախտորոշում.

բեմադրում եմ.

II փուլ. Նպատակը` մաքուր մշակույթի կուտակում

III փուլ. Նպատակը` ուսումնասիրված մշակույթի նույնականացում

IV փուլ.

Թեմա 2. Բակտերիաների ֆիզիոլոգիա. Բակտերիաների սնուցում, շնչառություն, վերարտադրություն, նյութափոխանակություն և ֆերմենտային համակարգեր: Վարակիչ հիվանդությունների ախտորոշման մանրէաբանական մեթոդ (2-րդ օր).

I. Հարցեր ինքնուրույն ուսումնասիրության համար.

II. հիմնական տեքստը

1. Միկրոօրգանիզմների նյութափոխանակություն

2. Միկրոօրգանիզմների ֆերմենտային համակարգեր

4. Բակտերիաների սնուցման մեխանիզմները

6. Բակտերիաների դասակարգումն ըստ շնչառության տեսակի՝ կենսաբանական օքսիդացում։

7. Խմորումը և դրա տեսակները

8. Բակտերիաների աճեցման պայմաններ

9. Բակտերիաների աճ և բազմացում։ Բակտերիաների վերարտադրության փուլերը

10. Մանրէաբանական հետազոտության մեթոդ. Աերոբների մեկուսացման մանրէաբանական մեթոդի 2-րդ փուլի իրականացում. Բակտերիաների մշակութային հատկությունները.

III. Գործնական աշխատանքային պլան

4. Լրացրե՛ք «Միկրոօրգանիզմների դասակարգումն ըստ շնչառության տեսակների» աղյուսակը.

IV. Իրավիճակային առաջադրանքների օրինակներ

Թեմա 3. Մաքուր մշակույթների նույնականացում. Բակտերիաների կենսաքիմիական ակտիվությունը. Վարակիչ հիվանդությունների ախտորոշման մանրէաբանական մեթոդ (3 օր).

1. Միկրոօրգանիզմների մաքուր կուլտուրաների մեկուսացման մանրէաբանական մեթոդի III փուլի իրականացում. Միկրոօրգանիզմների նույնականացման սխեմա

2. Մեկուսացված մշակույթի մաքրության որոշում

3. Օգտագործելով բակտերիաների ֆերմենտային ակտիվությունը միկրոօրգանիզմների նույնականացման համար

4. Միկրոօրգանիզմների գլիկոլիտիկ ակտիվության որոշման մեթոդներ

5. Բակտերիաների պրոտեոլիտիկ ակտիվության որոշման մեթոդներ

6. Բակտերիալ ռեդոքս ֆերմենտների որոշում

7. Բակտերիաների կենսաքիմիական նույնականացման համակարգեր

III. Գործնական աշխատանքային պլան

IV. Իրավիճակային առաջադրանքների օրինակներ

Մոդուլ III «Հակաբակտերիալ քիմիաթերապիայի հիմունքներ»

2. Միկրոօրգանիզմների վրա հակաբիոտիկների գործողության մեխանիզմները

3. Հակաբիոտիկների կողմնակի ազդեցությունները

4. Միկրոօրգանիզմների հակաբիոտիկ դիմադրության մեխանիզմները

5. Հակաբիոտիկների նկատմամբ միկրոօրգանիզմների զգայունության որոշման մեթոդներ

III. Գործնական աշխատանքային պլան

IV. Իրավիճակային առաջադրանքների օրինակներ

III մոդուլ «Վարակ և վարակիչ գործընթաց»

Թեմա 2. Վարակիչ պրոցես. Բակտերիաների պաթոգենության գործոնները. Վարակիչ հիվանդությունների ախտորոշման կենսաբանական մեթոդ

հիմնական տեքստը

1. Վարակման ուսմունքը. «վարակ» և «վարակիչ հիվանդություն» հասկացությունները.

3. Վարակիչ հիվանդությունների և վարակների ձևերի դասակարգում

4. Վարակիչ հիվանդության ժամանակաշրջաններն ու արդյունքները

5. Պաթոգենություն և վիրուլենտություն, վիրուլենտության միավորներ

6. Միկրոօրգանիզմների պաթոգենության հիմնական գործոնները

7. Մանրէաբանական տոքսիններ

8. Վարակիչ հիվանդությունների ախտորոշման կենսաբանական մեթոդ

III. Գործնական աշխատանքային պլան

IV. Իրավիճակային առաջադրանքների օրինակներ

III մոդուլ «Միկրոօրգանիզմների էկոլոգիա. Սանիտարական մանրէաբանության հիմունքներ»

Թեմա 3. Մարդու մարմնի միկրոֆլորան. Ջրի, օդի, հողի սանիտարական և մանրէաբանական հետազոտություն

I. Հարցեր ինքնուրույն ուսումնասիրության համար.

II.Հիմնական տեքստ

2. Մարդու մարմնի նորմալ միկրոֆլորայի գործառույթները

3. Մարդու մարմնի միկրոֆլորայի որոշման մեթոդներ

4. Դիսբակտերիոզ հասկացության սահմանումը և դրա առաջացման պատճառները

5. Դիսբակտերիոզի ախտորոշման և բուժման սկզբունքները

6. Սանիտարական մանրէաբանության առարկան և սանիտարական ինդիկատիվ միկրոօրգանիզմներին ներկայացվող պահանջները

7. Ջրի, օդի և հողի միկրոֆլորան

8. Ջրի, օդի և հողի սանիտարական ինդիկատիվ միկրոօրգանիզմների որոշման մեթոդներ.

III. Գործնական աշխատանքային պլան

IV. Իրավիճակային առաջադրանքների օրինակներ

Գիտելիքի սահմանային հսկողության տեսական հարցեր

Գործնական հմտությունների ցանկ

գրականություն

9. Վարակիչ հիվանդությունների ախտորոշման մանրէաբանական մեթոդ

Մանրէաբանական ախտորոշման հիմնական մեթոդը և մանրէաբանության «ոսկե ստանդարտը» մանրէաբանական մեթոդն է։

Մանրէաբանական մեթոդի նպատակըբաղկացած է փորձարկման նյութից պաթոգենի մաքուր կուլտուրան մեկուսացնելուց, մաքուր կուլտուրա կուտակելուց և այս մշակույթը մի շարք հատկություններով ճանաչելուց՝ մորֆոլոգիական, երանգային, մշակութային, կենսաքիմիական, հակագենիկ, պաթոգենության, թունավորության գործոնների առկայությամբ և դրա զգայունության որոշմամբ։ հակամանրէային դեղամիջոցների և բակտերիոֆագների նկատմամբ:

Մանրէաբանական հետազոտության մեթոդը ներառում է.

1. փորձարկման նյութի պատվաստում սննդարար միջավայրում

2. մաքուր մշակույթի մեկուսացում

3. միկրոօրգանիզմների նույնականացում (տեսակին պատկանելիության որոշում).

Աերոբ և անաէրոբ բակտերիաների մաքուր կուլտուրաների մեկուսացումը և նույնականացումը ներառում է հետևյալ ուսումնասիրությունները.

I փուլ (աշխատանք հայրենի նյութի հետ)

Նպատակը` մեկուսացված գաղութների ձեռքբերում

1. Նախնական մանրադիտակը մոտավոր պատկերացում է տալիս միկրոֆլորայի մասին

2. Հետազոտության համար նյութի պատրաստում

3. Սերմնացան խիտ սննդարար միջավայրերի վրա՝ մեկուսացված գաղութներ ստանալու համար

4. Ինկուբացիա օպտիմալ ջերմաստիճանում, առավել հաճախ 37°C, 18-24 ժամ

II փուլ

Նպատակը` մաքուր մշակույթ ձեռք բերել

1. Գաղութների մակրոսկոպիկ ուսումնասիրություն հաղորդվող և արտացոլված լույսի մեջ (գաղութների չափի, ձևի, գույնի, թափանցիկության, հետևողականության, կառուցվածքի, ուրվագծի, մակերեսի բնութագրում):

2. Մեկուսացված գաղութների մանրադիտակային հետազոտություն

3. Աերոտոլերանտության ստուգում (փորձարկման նյութում խիստ անաէրոբների առկայությունը հաստատելու համար):

4. Որոշ տեսակներին բնորոշ գաղութներ ցանել մաքուր կուլտուրայի կուտակման միջավայրում կամ ընտրովի միջավայրում և ինկուբացիա օպտիմալ պայմաններում:

III փուլ

Նպատակը. Մեկուսացված մաքուր մշակույթի նույնականացում

1. Մեկուսացված մշակույթը կենսաբանական հատկությունների համալիրով նույնականացնելու համար ուսումնասիրվում է.

մորֆոլոգիա և երանգային հատկություններ

մշակութային հատկություններ (սննդանյութերի վրա աճի բնույթը)

կենսաքիմիական հատկություններ (միկրոօրգանիզմների ֆերմենտային ակտիվություն)

սերոլոգիական հատկություններ (հակագին)

վիրուսային հատկություններ (պաթոգենության գործոններ՝ տոքսիններ, ֆերմենտներ, պաշտպանական և ագրեսիվ գործոններ առաջացնելու ունակություն)

պաթոգենություն կենդանիների համար

ֆագերի լիզելիություն (զգայունություն ախտորոշիչ բակտերիոֆագների նկատմամբ)

զգայունություն հակաբիոտիկների նկատմամբ

այլ անհատական ​​հատկություններ

IV փուլ (եզրակացություն)

Ըստ ուսումնասիրված հատկությունների՝ եզրակացություն է արվում մեկուսացված մշակույթի մասին

Հետազոտության առաջին փուլը.Պաթոլոգիական նյութի ուսումնասիրությունը սկսվում է մանրադիտակով: Ներկված բնածին նյութի մանրադիտակը հնարավորություն է տալիս մոտավորապես որոշել ուսումնասիրվող օբյեկտի մանրէաբանական լանդշաֆտի կազմը, միկրոօրգանիզմների որոշ մորֆոլոգիական առանձնահատկությունները: Բնական նյութի մանրադիտակի արդյունքները մեծապես որոշում են հետագա հետազոտության ընթացքը, և հետագայում դրանք համեմատվում են սննդարար միջավայրերի պատվաստման ժամանակ ստացված տվյալների հետ:

Նմուշում պաթոգեն միկրոօրգանիզմների բավարար պարունակությամբ սերմնացանն իրականացվում է խիտ սննդարար միջավայրի վրա (մեկուսացված գաղութներ ստանալու համար): Եթե ​​փորձարկման նյութում քիչ բակտերիաներ կան, ապա պատվաստումն իրականացվում է հեղուկ սննդանյութերի հարստացման միջավայրի վրա: Սնուցող միջավայրերը ընտրվում են միկրոօրգանիզմների պահանջներին համապատասխան:

Միկրոօրգանիզմների աճեցումը հնարավոր է միայն նրանց կենսագործունեության համար օպտիմալ պայմաններ ստեղծելու և փորձարկման նյութի աղտոտումը (պատահական աղտոտումը օտար մանրէներով) բացառող կանոնների պահպանման դեպքում: Արհեստական ​​պայմաններ, որոնք կբացառեն այլ տեսակների կողմից կուլտուրաների աղտոտումը, կարող են ստեղծվել փորձանոթում, կոլբայի կամ Պետրի ափսեի մեջ: Բոլոր սպասքները և սննդանյութերը պետք է լինեն ստերիլ և մանրէաբանական նյութի պատվաստումից հետո պաշտպանված լինեն արտաքին աղտոտումից, ինչը ձեռք է բերվում խցանների կամ մետաղական գլխարկների և կափարիչների միջոցով: Փորձարկման նյութի հետ մանիպուլյացիաները պետք է իրականացվեն սպիրտային լամպի բոցավառման գոտում՝ արտաքին միջավայրից նյութի աղտոտումը բացառելու, ինչպես նաև անվտանգության կանոններին համապատասխանելու համար:

Սնուցող միջավայրերի վրա նյութի պատվաստումը պետք է կատարվի դրանց հավաքման պահից ոչ ուշ, քան 2 ժամ:

Հետազոտության երկրորդ փուլը.Գաղութների ուսումնասիրություն և մաքուր մշակույթների մեկուսացում: Մեկ օր ինկուբացիայից հետո թիթեղների վրա աճում են գաղութներ, իսկ առաջին հարվածի ժամանակ աճը շարունակական է, իսկ հաջորդում՝ մեկուսացված գաղութներ։ Գաղութը նույն տեսակի մանրէների հավաքածու է, որն աճել է մեկ բջջից։ Քանի որ նյութը ամենից հաճախ մանրէների խառնուրդ է, աճում են մի քանի տեսակի գաղութներ։ Մատիտով նշվում են տարբեր գաղութներ՝ ներքևի կողքից շրջանագիծով ուրվագծելով և ուսումնասիրելով (Աղյուսակ 11): Առաջին հերթին ուսումնասիրեք գաղութները անզեն աչքով՝ մակրոսկոպիկ նշաններ. Բաժակը դիտվում է (առանց բացելու) ներքևից՝ փոխանցվող լույսի ներքո, նշվում է գաղութների թափանցիկությունը (թափանցիկ, եթե այն չի փակում լույսը, կիսաթափանցիկ, եթե այն մասամբ փակում է լույսը, անթափանց, եթե լույսը չի անցնում գաղութով), չափել (մմ) գաղութների չափը։ Այնուհետև կափարիչի կողքից ուսումնասիրում են գաղութները, նշում ձևը (կանոնավոր կլոր, անկանոն, հարթ, ուռուցիկ), մակերեսի բնույթը (հարթ, փայլուն, ձանձրալի, կոպիտ, կնճռոտ, թաց, չոր, լորձաթաղանթ), գույնը։ (անգույն, գունավոր):

Աղյուսակ 11. Գաղութների ուսումնասիրության սխեմա

		Գաղութների հնարավոր բնութագրերը
		Հարթ, ուռուցիկ, գմբեթաձև, ընկճված, կլոր, վարդաձև, աստղաձև
	Չափը, մմ	Մեծ (4-5 մմ), միջին (2-4 մմ), փոքր (1-2 մմ), գաճաճ (< 1 мм)
	Մակերեւութային բնույթ	Հարթ (S-ձև), կոպիտ (R-ձև), ցեխոտ (M-աձև), գծավոր, խորդուբորդ, փայլատ, փայլուն
		Անգույն, ներկված
	Թափանցիկություն	Թափանցիկ, անթափանց, կիսաթափանցիկ
	Ծայրերի բնույթը	Հարթ, ատամնավոր, ծոպերով, թելքավոր, փաթաթված
	Ներքին կառուցվածքը	Միատարր, հատիկավոր, տարասեռ
	Հետևողականություն	Մածուցիկ, ցեխոտ, փխրուն
	Էմուլգացիա մի կաթիլ ջրի մեջ	Լավ Վատ

Նշում. Մանրադիտակի ցածր խոշորացմամբ ուսումնասիրվում է 5-7 կետ:

Դուք կարող եք ավելի լավ տեսնել գաղութների միջև եղած տարբերությունը, երբ մեծացնում եք դրանք: Դա անելու համար օբյեկտի սեղանի վրա գլխիվայր դրվում է փակ աման, կոնդենսատորը մի փոքր իջեցվում է, օգտագործվում է փոքր օբյեկտիվ խոշորացում (x8), աման տեղափոխելը, գաղութներում ուսումնասիրվում են մանրադիտակային նշաններ. եզրի բնույթը ( հարթ, ալիքաձև, ատամնավոր, փաթաթված), կառուցվածքը (միատարր, հատիկավոր, մանրաթելային, համասեռ կամ տարբեր կենտրոնում և ծայրամասի երկայնքով):

Հաջորդիվ ուսումնասիրվում է գաղութներից մանրէաբանական բջիջների մորֆոլոգիան։ Դրա համար քսուքներ են պատրաստում նշված գաղութներից յուրաքանչյուրի մի մասից՝ ներկված ըստ Գրամի։ Գաղութներ ընդունելիս ուշադրություն դարձրեք հետևողականությանը (չոր, եթե գաղութը քանդվում է և դժվարությամբ է վերցվում; փափուկ, եթե այն հեշտությամբ վերցվում է օղակի վրա; լպրծուն, եթե գաղութը հասնում է հանգույցին; կոշտ, եթե գաղութի մի մասը չի վերցվում օղակի կողմից, միայն ամբողջ գաղութը կարող է հեռացվել):

Քսուքները դիտելիս պարզվում է, որ գաղութը ներկայացված է մեկ տեսակի միկրոբով, հետևաբար, կարելի է առանձնացնել բակտերիաների մաքուր կուլտուրաները։ Դրա համար ուսումնասիրված գաղթօջախներից վերացանում են կատարվում թեք ագարի վրա։ Գաղութներից սերմնացան կատարելիս պետք է ուշադրություն դարձնել, որպեսզի վերցնեն հենց նախատեսված գաղութները՝ առանց մոտակա գաղութների օղակին դիպչելու: Խողովակները կնքվում են և 24 ժամ ինկուբացվում են 37°C ջերմաստիճանում թերմոստատում:

Հետազոտության երրորդ փուլ.Մեկուսացված մշակույթի նույնականացում: Մանրէների նույնականացում - նյութից մեկուսացված մշակույթի համակարգված դիրքի որոշում դեպի տեսակ և տարբերակ: Նույնականացման հուսալիության առաջին պայմանը մշակույթի անվերապահ մաքրությունն է: Մանրէների հայտնաբերման համար օգտագործվում են մի շարք նշաններ՝ ձևաբանական (ձև, չափ, դրոշակի առկայություն, պարկուճներ, սպորներ, հարաբերական դիրքը քսուքի մեջ), երանգավորող (կապը գրամ ներկի կամ այլ մեթոդների հետ), քիմիական (գուանին + ցիտոզին հարաբերակցությունը): ԴՆԹ-ի մոլեկուլ), մշակութային (սննդանյութերի պահանջներ, մշակման պայմաններ, աճի արագություն և բնույթ տարբեր սննդանյութերի միջավայրում), ֆերմենտային (բաժանում տարբեր նյութերմիջանկյալ ու վերջնական արտադրանք), շճաբանական (հակագենային կառուցվածք, առանձնահատկություն), կենսաբանական (կենդանիների համար վիրուլենտություն, թունավորություն, ալերգենիկություն, հակաբիոտիկների ազդեցություն և այլն):

Կենսաքիմիական տարբերակման համար բակտերիաների կարողությունը խմորելու ածխաջրերը միջանկյալ և միջանկյալ ձևավորմամբ. վերջնական արտադրանքները, սպիտակուցները և պեպտոնները քայքայելու և ռեդոքս ֆերմենտները ուսումնասիրելու ունակությունը:

Սախարոլիտիկ ֆերմենտները ուսումնասիրելու համար մեկուսացված մշակույթները պատվաստվում են փորձանոթների մեջ կիսահեղուկ միջավայրով, որը պարունակում է կաթնաշաքար, գլյուկոզա և այլ ածխաջրեր և պոլիհիդրիկ սպիրտներ. Կիսահեղուկ միջավայրերի վրա պատվաստումը կատարվում է միջավայրի խորքում ներարկման միջոցով: Ներարկման եղանակով ցանելու ժամանակ փորձանոթը միջավայրի հետ պահում են անկյան տակ, խցանը հանում են, և փորձանոթի եզրն այրվում։ Նյութը վերցվում է ստերիլ օղակով և դրանով գրեթե մինչև ներքև ծակվում է սննդային միջավայրի սյունակ:

Պրոտեոլիտիկ ֆերմենտները որոշելու համար մեկուսացված մշակույթը պատվաստվում է պեպտոն ջրի կամ MPB-ի վրա: Դա անելու համար նրանք վերցնում են փորձանոթ՝ պատվաստումով ավելի մոտ իրենց, իսկ միջակով փորձանոթը՝ իրենցից ավելի հեռու: Երկու փորձանոթները բացվում են միաժամանակ՝ փոքրիկ մատով և ափի եզրով փակելով իրենց խցանները, խողովակների եզրերն այրվում են, մի փոքր կուլտուրա վերցվում է կալցինացված սառեցված օղակով և տեղափոխվում երկրորդ փորձանոթ, տրորված է հեղուկ միջավայրում փորձանոթի պատին և լվացվում է միջավայրով:

Ցանելու և ցանելու ժամանակ պետք է ուշադրություն դարձնել ստերիլության կանոններին համապատասխանությանը, որպեսզի ձեր բերքը չաղտոտվի օտար միկրոֆլորայով, ինչպես նաև չաղտոտվի: միջավայրը. Խողովակները պիտակավորված են և տեղադրվում են թերմոստատի մեջ ինկուբացիայի համար մեկ օր 37°C ջերմաստիճանում:

Եզրակացություն

Արդյունքների հաշվառում: Հետազոտության եզրակացություն. Նույնականացման արդյունքները հաշվի են առնվում և, ելնելով ստացված տվյալների ամբողջականությունից, ձեռնարկում նկարագրված տիպային շտամների դասակարգման և բնութագրերի հիման վրա (Բերգիի ուղեցույց, 1994-1996 թթ.) որոշվում է մեկուսացված կուլտուրաների տեսակը:

Մանրէաբանական հետազոտության մեթոդ. Աերոբ բակտերիաների մաքուր մշակույթի մեկուսացում (1-2 փուլ)

1. Մանրէաբանական մեթոդի էությունը

3. Մեկուսացված գաղութների ստացման մեթոդներ

4. Մաքուր մշակույթ ստանալու մեթոդներ

1. Իրականացնել առաջնային ցանքս Կոխ և Դրիգալսկի մեթոդով

2. Մեկուսացնել մաքուր մշակույթը

Աշխատանքային պլան.

1. Մանրէաբանական հետազոտության մեթոդ

2. Մանրէաբանական մեթոդի փուլերը

3. Հայեցակարգ՝ մաքուր մշակույթ, շտամ, գաղութ

4. Մեկուսացված գաղութների ստացման մեթոդներ

5. Աերոբ բակտերիաների մաքուր կուլտուրա ստանալու մեթոդներ

Վարակիչ հիվանդությունների լաբորատոր ախտորոշման հիմնական մեթոդը մանրէաբանական մեթոդն է։ Մանրէաբանական մեթոդի էությունը ուսումնասիրվող նյութից հարուցիչների մեկուսացումն է և դրա նույնականացումը (սեռի, տեսակների, սորտերի սահմանումը):

Մանրէաբանական մեթոդը թույլ է տալիս որոշել.

1. Պաթոգենի տեսակը և հիվանդության ախտորոշումը

2. Հակաբիոտիկներ, որոնք սպանում են հարուցիչը և նշանակում համապատասխան բուժում

3. վարակի աղբյուրը բացահայտելու համար հարուցիչի ֆագովարները և սերովարները

Առաջին փուլը փորձարկման նյութի առաջնային պատվաստումն է՝ մեկուսացված գաղութներ ստանալու համար: Առաջնային ցանքն իրականացվում է պահեստային կրիչների և DDS-ի (բաժակի կրիչներ) վրա։

Երկրորդ փուլը մեկուսացված գաղութների բնութագրումն է և դրանցից մաքուր կուլտուրա ստանալը հիմնական միջավայրի թեք սյունակի վրա սերմնավորման միջոցով:

Երրորդ փուլը մաքուր մշակույթի նույնականացումն է՝ հարուցիչի սեռի, տեսակների, սորտերի որոշում, հակաբիոտիկների զգայունության որոշում, ֆագովարների որոշում։

Միկրոօրգանիզմների մշակույթը բակտերիաներ են, որոնք աճեցվում են սննդանյութերի վրա: Մաքուր մշակույթը բակտերիաների տեսակներից մեկն է, որն աճեցվում է սննդարար միջավայրում: Տեսակի ներսում կան սորտեր, որոնք տարբերվում են մեկ հատկանիշով.

1. Մորֆովարներ - տարբերվում են մորֆոլոգիայով

2. Քիմովարներ - տարբերվում են կենսաքիմիական հատկություններով

3. Serovars - տարբերվում են հակագենային հատկություններով

4. Ֆագովարներ - տարբերվում են ֆագերի նկատմամբ զգայունությամբ

Մաքուր մշակույթը անհրաժեշտ է նույնականացման, սերովարների, ֆագովարների որոշման, հակաբիոտիկների նկատմամբ զգայունության համար: Շտամը բակտերիաների մեկ տեսակ է, որը մեկուսացված է կոնկրետ աղբյուրից (Վոլգա գետ, հիվանդ Իվանով և այլն): Գաղութ - նույն տեսակի բակտերիաների տեսանելի կուտակում, որը ձևավորվել է մեկ բակտերիալ բջջի վերարտադրության ժամանակ խիտ սննդարար միջավայրի վրա:

Ուսումնասիրության առաջին փուլը փորձարկման նյութի առաջնային պատվաստումն է՝ մեկուսացված գաղութներ ստանալու համար: Նախքան նախնական պատվաստումը կատարվում է փորձարկման նյութի մանրադիտակ: Փորձարկման նյութը սովորաբար պարունակում է տարբեր բակտերիաների, ներառյալ պաթոգենների խառնուրդ: Հարթածինը մեկուսացնելու համար անհրաժեշտ է ձեռք բերել մեկուսացված գաղութներ (նույն տեսակի բակտերիաներ)՝ ընտրելով սնուցող միջավայր և կիրառելով ցանման հատուկ մեթոդներ։

Մեկուսացված գաղութներ ստանալու երկու եղանակ կա.

1. Դրիգալսկու մեթոդ