ԳՈՐԾՈՒՆԵՈՒԹՅՈՒՆ #4

ԹԵՄԱ:ՄԻԿՐՈՕՐԳԱՆԻԶՄՆԵՐԻ ՖԻԶԻՈԼՈԳԻԱ. ԲԱԿՏԵՐԱԲԱՆԱԿԱՆ (ՄՇԱԿՈՒԹԱՅԻՆ) ՀԵՏԱԶՈՏՈՒԹՅԱՆ ՄԵԹՈԴ. ՄԻԿՐՈՕՐԳԱՆԻԶՄՆԵՐԻ ԿԵՆՍԱՔԻՄԻԱԿԱՆ ՀԱՏԿՈՒԹՅՈՒՆՆԵՐԸ.

ՍՏՈՒԳԻ ՑԱՆԿ

Բակտերիաների սնուցում. Սնուցիչները ածխածնի և ազոտի աղբյուրներն են: Բակտերիաների դասակարգումն ըստ սնուցման տեսակների՝ Ավտոտրոֆներ և քիմոօրգանոտրոֆներ

Աճի գործոնները և դրանց աղբյուրները: Հանքային տարրերի աղբյուրները.

Թաղանթով սննդանյութերի փոխանցման ուղիներն ու մեխանիզմները.

Բակտերիաների էներգիայի պահանջները. Ավտոտրոֆներում էներգիայի ստացման ուղիները (ֆոտոսինթեզ, քիմոսինթեզ)։ Քիմիօրգանոտրոֆներում էներգիա ստանալու աղբյուրները և ուղիները.

Բակտերիաներում կենսաբանական օքսիդացման աերոբ և անաէրոբ տեսակները. Աերոբ, անաէրոբ, ֆակուլտատիվ անաէրոբ և միկրոաերոֆիլ բակտերիաներ: Անաէրոբ պայմաններ ստեղծելու ուղիներ.

Մանրէաբանական (մշակութային) հետազոտության մեթոդի առաջադրանքները, փուլերը, առավելություններն ու թերությունները.

Միկրոօրգանիզմների աճ և վերարտադրություն: Վերարտադրման մեթոդներ. Երկուական (պարզ) տրոհում, մեխանիզմ։ Բակտերիալ պոպուլյացիաների վերարտադրություն:

Բակտերիաների աճեցման սկզբունքներն ու մեթոդները. Մանրէների սննդային կարիքները.

Սնուցող միջավայր բակտերիաների աճեցման համար: սննդանյութերի պահանջներ. Սննդային միջավայրերի դասակարգում.

Բակտերիաների մշակման պայմաններ և տեխնիկա. Սնուցող միջավայրի վրա ցանելու տեխնիկա. Խիտ և հեղուկ սննդանյութերի վրա բակտերիաների աճի կանոններն ու բնույթը:

Աերոբ և անաէրոբ բակտերիաների մաքուր կուլտուրաների մեկուսացման մեթոդներ.

Հատկություններ, որոնք օգտագործվում են մեկուսացված մշակույթները բացահայտելու համար:

ԱՆԿԱԽ ԵՎ ԼԱԲՈՐԱՏՈՐԱԿԱՆ ԱՇԽԱՏԱՆՔ

Մանրէաբանական մեթոդ(փուլեր):

1 1-ին փուլԱերոբ բակտերիաների մաքուր մշակույթի մեկուսացում. Ա) պաթոլոգիական նյութի մանրադիտակ.

Պաթոլոգիական նյութից քսուքների գրամ գունավորում: Թմրամիջոցների ուրվագիծ.

Բ) Ուսուցչի ղեկավարությամբ յուրացնել ախտաբանական նյութը մանրէաբանական օղակով և սպաթուլայի ցանելու տեխնիկան ափսեի սննդարար միջավայրի վրա.

Պաթոլոգիական նյութի պատվաստում մանրէաբանական օղակով շերտավոր միս-պեպտոն ագարի (MPA) վրա՝ մեկուսացված գաղութներ ստանալու համար:

Մշակութային լրատվամիջոցների դասակարգում(նշեք կիրառման ոլորտները)

1. Ըստ հետևողականության.հեղուկ (միս-պեպտոն արգանակ, մաղձ, շաքարի արգանակ), խիտ (2-3% ագար) և կիսահեղուկ (0,15-0,7% ագար) միջավայր:

2. Ըստ ծագման.բնական - կաթից, մսից։ ձու, կարտոֆիլ, մարդու արյան շիճուկ, կենդանական և այլ ապրանքներ; արհեստական ​​- 1) Սննդանյութերի բնական հավասարակշռված խառնուրդներ միկրոօրգանիզմների աճի և վերարտադրության համար անհրաժեշտ կոնցենտրացիաներով և համակցություններով, ազոտի և ածխածնի համընդհանուր աղբյուր՝ պեպտոններ՝ սպիտակուցների թերի քայքայման արտադրանք՝ օգտագործելով պեպսին կամ տարբեր հիդրոլիզատներ (ձուկ, կազեին, խմորիչ և այլն): 2) սինթետիկ գճշգրիտ քիմիական բաղադրությունըՍոտոն միկոբակտերիաների համար, 199 բջիջների համար:

3. Կազմով. պարզ մշակութային լրատվամիջոցներ (միս-պեպտոն արգանակ-ՄՊԲ, միս-պեպտոն ագար-ՄՊԱ) և հետ կեղծ (KA = MPA + կենդանական արյան 5-10%)

4. Ըստ նշանակման.

ԲԱՅՑ) հիմնական նպատակ, գլխավոր նպատակ - ունիվերսալ, նախատեսված ցանկացած միկրոօրգանիզմների մշակման համար (MPA, KA)

Բ ) Հատուկմիկրոօրգանիզմների աճեցման համար, որոնք չեն աճում ունիվերսալ միջավայրում, տեսակների տարբերակում և որոշ տեսակի միկրոօրգանիզմների ընտրովի մեկուսացում.

ընտրովի (ընտրովի) մեկուսացնել որոշակի տեսակի միկրոօրգանիզմներ և ճնշել դրանց աճը (աղի ագար ստաֆիլոկոկի համար):

դիֆերենցիալ ախտորոշում (DDS)-միջավայրեր, որոնք հնարավորություն են տալիս տարբերակել բակտերիաների տեսակները ֆերմենտային ակտիվությամբ. Նրանք հետ տիրապետում են՝ 1) ունիվերսալ սննդային միջավայր (MPA, KA); 2) տարբերակիչ գործոն՝ քիմիական ենթաշերտ (օրինակ՝ ածխաջրածին), որի հետ այլ հարաբերությունը տվյալ միկրոբի համար ախտորոշիչ հատկանիշ է, 3) ցուցիչ, որի գույնի փոփոխությունը վկայում է կենսաքիմիական ռեակցիայի մասին. (Էնդոյի, Պլոսկիրևի, Գիսի և այլ միջավայրեր)։

դիֆերենցիալ ընտրողական (DS) - միջավայրեր, որոնք թույլ են տալիս հատկացնել որոշակի տեսակի բակտերիաները՝ ըստ իրենց ֆիզիոլոգիական բնութագրերի և տարբերվում են այլ տեսակներից՝ ըստ ֆերմենտային ակտիվություն Դրանք պարունակում են՝ 1) MPA 2) ընտրովի քիմիական ենթաշերտ, որը խանգարում է այլ տեսակի բակտերիաների աճին . 3) տարբերակիչ գործոն. ենթաշերտը, որին այս միկրոբի ախտորոշիչ հատկանիշն է;) 4.) Ցուցանիշ, որի գույնի փոփոխությունը վկայում է կենսաքիմիական ռեակցիայի մասին: (Չորեքշաբթի օրը ստաֆիլոկոկի համար, ICA սալմոնելլայի համար, Պլոսկիրևը շիգելայի և սալմոնելլայի համար):

Բ) հարստացում Կլինիկական նյութում որոշակի տեսակի բակտերիաների վերարտադրության և կուտակման միջավայր (արյուն 20% լեղու արգանակում = սալմոնելլա, կոկորդից արտահոսք 10% շիճուկում + 2% տելուրիտ = կորինեբակտերիաներ):

Դ) տրանսպորտ կլինիկական նյութի հավաքման և առաքման (պահպանման) միջավայր = 48 ժամ (Amies medium - կիսահեղուկ ագար + ակտիվացված փայտածուխ):

Սնուցող կրիչներ(օրինակներ):

Չորեքշաբթի Էնդո Միջին տեսակ էնտերոբակտերիաների դիֆերենցիալ ախտորոշում Սննդային բազա MPA տարբերակիչ գործոն կաթնաշաքար 1% Ցուցանիշ հիմնական ֆուքսինը գունազերծված նատրիումի սուլֆիտով: Է.ս օլի քայքայել կաթնաշաքարը թթվի - գաղութները կարմիր են մետաղական փայլով, պաթոգեն անգույն;

Աղի ագար Միջին տեսակ ընտրովի է ստաֆիլոկոկի մեկուսացման համար Սննդային բազա MPA ընտրովի գործոն նատրիումի քլորիդ 10%

Չորեքշաբթի Պլոսկիրև Միջին տեսակ դիֆերենցիալ ընտրովիէնտերոբակտերիաների համար

Սննդային բազա MPA ընտրովի գործոն լեղու աղեր տարբերակիչ գործոն կաթնաշաքար

Ցուցանիշ չեզոք կարմիր

Դեղնուց-աղ ագար Միջին տեսակ դիֆերենցիալ ընտրովի համար Ս . aureus _

Սննդային բազա MPAընտրովի գործոն նատրիումի քլորիդ 10%

տարբերակիչ գործոն դեղնուց

Ցուցանիշ Ոչ

2 Փուլ 2մանրէաբանական հետազոտության մեթոդ (մաքուր մշակույթի մեկուսացում).

Ա) մեկուսացված գաղութների (էշերիխիա, ստաֆիլոկոկ) ուսումնասիրություն շերտավոր ՄՊԱ-ի վրա.

Ուսումնասիրել է մշակութային արժեքները	1 տեսակի գաղութներ	2 տեսակի գաղութներ
գաղութի ձևը	Կանոնավոր ձև, կլոր	Ճիշտ ձև
Հետևողականություն	միատարր	միատարր
Գաղութի չափը	միջին (չափը 2-4 մմ)
Ծայրամասի բնույթը	հարթ եզրերով	հարթ եզրերով
Մակերեւութային բնույթ	ուռուցիկ

Բ) Ընտրված գաղութներից քսուքների պատրաստում (Գրամի բիծ):

Գ) Մեկուսացված գաղութների տեղափոխում թեք ՄՊԱ՝ մաքուր մշակույթի կուտակման համար:

3 Անաէրոբ բակտերիաների մաքուր կուլտուրայի մեկուսացում. հողային կախույթի պատվաստում Kitta-Tarozzi միջավայրի վրա՝ պաթոգեն կլոստրիդիաները մեկուսացնելու համար

Kitt-Tarozzi միջավայրը բաղկացած է սննդարար արգանակից, 0,5% գլյուկոզայից և լյարդի կամ աղացած մսի կտորներից՝ միջավայրից թթվածինը կլանելու համար: Ցանքից առաջ միջավայրը 20-30 րոպե տաքացնում են եռացող ջրային բաղնիքում՝ միջավայրից օդը հեռացնելու համար։ Ցանքից հետո սնուցող միջավայրը անմիջապես լցվում է շերտով պարաֆին

Անաէրոբիոզ ստեղծելու մեթոդներ.

1.Ֆիզիկական- օդը մղելով՝ ներմուծելով թթվածնազուրկ հատուկ գազային խառնուրդ (սովորաբար Ն 2 - 85% CO 2 - 10%, Հ 2 - 5%), սննդարար միջավայրի նախնական եռացում, ագարի խորը սյունակում պատվաստում, թթվածնի հասանելիությունը նվազեցնելու համար միջավայրը վազելինի յուղով լցնում, հերմետիկ փակ սրվակների և փորձանոթների, ներարկիչների և լաբորատոր ապակյա իրերի օգտագործումը իներտ գազով սերտորեն փակ չորացուցիչների օգտագործումը վառվող մոմով

2. Քիմիական- օգտագործվում են քիմիական թթվածնի մաքրիչներ:

3. Կենսաբանական - խիստ աերոբների և անաէրոբների համատեղ մշակում (աերոբները կլանում են թթվածինը և պայմաններ են ստեղծում անաէրոբների վերարտադրության համար - Fortner մեթոդ):

Չորեքշաբթի Kitt - Tarozzi բաղկացած է սննդարար արգանակից, 0,5% գլյուկոզայից և լյարդի կամ աղացած մսի կտորներից՝ շրջակա միջավայրից թթվածինը կլանելու համար: Ցանքից առաջ միջավայրը 20-30 րոպե տաքացնում են եռացող ջրային բաղնիքում՝ միջավայրից օդը հեռացնելու համար։ Ցանքից հետո սնուցող միջավայրը անմիջապես լցվում է շերտովպարաֆին կամ վազելինի յուղ՝ թթվածնի հասանելիությունից մեկուսացման համար:

4. Խառը - օգտագործել մի քանի տարբեր մոտեցումներ:

Անաէրոբ պայմաններ ստեղծելու համար օգտագործվում են հատուկ սարքեր՝ անաէրոստատներ։ Ներկայումս անաէրոբ և միկրոաէրոֆիլ պայմաններ ստեղծելու ամենապարզ և ամենաարդյունավետ սարքավորումը քիմիական մեթոդ է հատուկ պարկերով, որոնք գործում են հերմետիկ փակ տարաներում մթնոլորտային թթվածնի կլանման սկզբունքով .

Վիլսոն-Բլեր միջին (խողովակներ, բաժակներ):

Սննդային բազա MPA Շնչառական սուբստրատ գլյուկոզա

Նվազեցնող գործոն նատրիումի սուլֆիտ և երկաթի քլորիդ նատրիումի սուլֆիտՆա 2 ԱՅՍՊԵՍ 3 → Նա 2 Ս

Վիլսոն-Բլերի միջավայրի համար հիմքն է ագար հավելումով գլյուկոզա , Կլոստրիդիա ձևավորել այս միջավայրում գաղութներ սև գույնը վերականգնման պատճառով սուլֆիտ նախքան սուլֆիդ - անիոն , որը կապված է կատիոններ գեղձ (II) տալիս է սև աղ: Այս կրթական միջավայրում սովորաբար սև է գաղութներ , հայտնվում են ագարի սյունակի խորքում .

Թիոգլիկոլ միջավայր (ստերիլության վերահսկման միջավայր). (խողովակներ):

Սննդային բազա BCH Շնչառական սուբստրատ գլյուկոզա Նվազեցնող գործոն նատրիումի թիոգլիկոլատ

Ցուցանիշ ռեզազուրին

Zeissler արյան գլյուկոզայի ագար. (բաժակներ): Սննդային բազա MPA, արյուն

Շնչառական սուբստրատ գլյուկոզա Նվազեցնող գործոն հեմոգլոբին

Ներդրվեց «անաէրոբ» տերմինըԼուի Պաստերով հայտնաբերել է 1861 թբակտերիաներկարագի խմորում.

ԲԱՅՑԴասախոսություն 3 Միկրոօրգանիզմների ֆիզիոլոգիա. Բակտերիաների նյութափոխանակություն .

Միկրոօրգանիզմների ֆիզիոլոգիան ներառում է :

սննդի տեսակները;

շնչառության տեսակները;

մշակություն (պայմաններ, միջավայրեր, բնավորություն և աճի տեմպ);

կենսաքիմիական գործունեություն;

փոփոխականություն;

կենսաբանորեն ակտիվ նյութերի, տոքսինների և պաթոգենության այլ գործոնների արտազատում.

զգայունություն հակաբիոտիկների, բակտերիոֆագների, բակտերիոցինների նկատմամբ;

այլ կենսաբանական հատկություններ:

Բակտերիաների նյութափոխանակություն - ֆիզիկաքիմիական գործընթացների (քիմիական փոխակերպումներ և ռեակցիաներ) մի շարք, որոնք ուղղված են կառուցվածքների վերարտադրմանը և մանրէաբանական բջջի կենսական գործառույթների ապահովմանը, ինչպիսիք են.

աճ և վերարտադրություն;

պահուստային սննդամթերքի նստեցում;

սննդանյութերի տեղափոխում մանրէաբանական բջիջ;

նյութափոխանակության արտադրանքի (տոքսիններ, ֆերմենտներ, հակաբիոտիկներ և այլ կենսաբանական ակտիվ նյութեր) ազատում.

երթեւեկություն;

սպորի ձևավորում;

կպչունություն հյուրընկալող բջիջների զգայուն ընկալիչների վրա և ներթափանցում դրանց մեջ.

տարբեր հարմարվողական արձագանքներ արտաքին միջավայրի փոփոխություններին:

Անաբոլիզմ- կենսաքիմիական ռեակցիաների մի շարք, որոնք իրականացնում են բջջային բաղադրիչների սինթեզը:

կատաբոլիզմ- մի շարք ռեակցիաներ, որոնք ապահովում են բջիջը էներգիայով:

Նյութափոխանակության ուսումնասիրության սխեմա - փուլեր.

1. Նախնական (ծայրամասային) նյութափոխանակություն - արտաքինից նյութերի ներթափանցում բջջ և քայքայումը մինչև միջանկյալ արտադրանք:

2. Ամֆիբոլիզմ (միջանկյալ նյութափոխանակություն) - կատաբոլիկ և անաբոլիկ ուղիներին բնորոշ միջանկյալ նյութափոխանակության արտադրանքի ձևավորում:

3. Կառուցողական նյութափոխանակության (հանգեցնում է բջջային կառուցվածքների կառուցմանը) և էներգետիկ նյութափոխանակության (ATP-ի ձևավորում) վերջնական, խիստ մասնագիտացված փուլերը։

Բջջում սննդանյութերի ներթափանցման մեխանիզմները.

Պարզ դիֆուզիոն (ճշմարիտ լուծումների համար): էներգիայի անկախ գործընթաց:

Հեշտացված դիֆուզիոն («գոլորշու հոսանքով ներքև») - կոնցենտրացիայի գրադիենտի ուղղությամբ՝ կրող սպիտակուցների մասնակցությամբ։ էներգիայից կախված գործընթաց:

Ակտիվ տրանսպորտը հակասում է կոնցենտրացիային և էլեկտրաքիմիական գրադիենտին՝ պերմեազների (ամինաթթու, հիդրօքսիաթթու, իոնային և այլն) մասնակցությամբ։ Գործընթացը ընթանում է ATP էներգիայի ծախսով, կախված է նյութերի լիցքավորումից և փոխանցման գործընթացում դրանց փոխակերպումից։

Միկրոօրգանիզմները ըստ ածխածնի աղբյուրները կլանելու ունակության բաժանվում են երկու խմբի՝ ավտոտրոֆներ (լատ. ավտոմեքենաներ - ինքս ինձ, ավար - սնուցում) սինթեզում են բջջի բոլոր ածխածին պարունակող բաղադրիչները CO 2-ից՝ որպես ածխածնի և հետերոտրոֆների միակ աղբյուր (լատ. հետերոս - մյուսը՝ «սնվել ուրիշների հաշվին») օգտագործում են մի շարք օրգանական ածխածին պարունակող միացություններ։

Կախված էներգիայի աղբյուրներից՝ միկրոօրգանիզմները բաժանվում են նաև ֆոտոտրոֆների (ֆոտոսինթետիկ), որոնք ունակ են օգտագործել արևային էներգիան և քիմոտրոֆների (քիմիոսինթետիկ), որոնք էներգիա են ստանում ռեդոքս ռեակցիաների միջոցով։

Կախված օգտագործվող էլեկտրոնների դոնորներից՝ բակտերիաները բաժանվում են լիտոտրոֆների (օգտագործելով անօրգանական էլեկտրոն դոնորներ) և օրգանոտրոֆների (օրգանական միացությունների օգտագործմամբ)։

Պրոտոտրոֆներ- միկրոօրգանիզմներ, որոնք ունակ են սինթեզել իրենց անհրաժեշտ բոլոր օրգանական միացությունները գլյուկոզայի և ամոնիումի աղերից:

Աուքսոտրոֆներ- միկրոօրգանիզմներ, որոնք ունակ չեն սինթեզել որևէ օրգանական միացություն. Այդ միացությունները նրանք ստանում են պատրաստից միջավայրըկամ մարդու մարմինը:

Ֆերմենտներ(հունարենից. fermentum-sourdough) - բոլոր կենդանի բջիջներում առկա սպիտակուցային կատալիզատորներ, առանց որոնց հնարավոր չէ կյանքն ու վերարտադրությունը։ Ֆերմենտները ճանաչում են իրենց համապատասխան մետաբոլիտները (սուբստրատները), փոխազդում են նրանց հետ և արագացնում քիմիական ռեակցիաները։ Ֆերմենտները սպիտակուցներ են:

Միկրոօրգանիզմի ֆերմենտային բաղադրությունը որոշվում է գենոմով և բավականին կայուն հատկանիշ է։ Ֆերմենտների որոշումը լայնորեն կիրառվում է բակտերիաների կենսաքիմիական նույնականացման համար։

Էնդոֆերմենտները կատալիզացնում են նյութափոխանակությունը բջջի ներսում:

Էկզոֆերմենտները բջիջի կողմից արտազատվում են շրջակա միջավայր:

Սահմանադրականֆերմենտները մշտապես սինթեզվում են որոշակի կոնցենտրացիաներում:

ինդուկտիվֆերմենտները ֆերմենտներ են, որոնց կոնցենտրացիան մեծանում է համապատասխան սուբստրատի ընդունմամբ:

Ագրեսիվության ֆերմենտներ. hyaluronidase, fibrinolysin, neuraminidase, collagenase, lecithinase (licitovitellase), coagulase, urease, amino acid decarboxylases, deoxyribonuclease:

մշակություն- արհեստական ​​սննդարար միջավայրում միկրոօրգանիզմների կուլտուրաներ ստանալը.

Մշակման նպատակները.

պաթոգեն միկրոօրգանիզմների մաքուր կուլտուրաների ձեռքբերում և դրանց նույնականացում.

BAS արտադրողների կենսազանգվածի կուտակում (վիտամիններ, հորմոններ, ամինաթթուներ, հակաբիոտիկներ և այլն);

ախտորոշիչ և պրոֆիլակտիկ պատրաստուկների (պատվաստանյութեր, ախտորոշիչներ) ձեռքբերում.

տեղեկատու թանգարանային մշակույթների պահպանում;

սանիտարական մանրէաբանության մեջ՝ սանիտարական ինդիկատիվ միկրոօրգանիզմների որոշման համար՝ շրջակա միջավայրի աղտոտվածության ցուցանիշները:

մշակույթը- սնուցող միջավայրի վրա աճեցված միկրոօրգանիզմների պոպուլյացիա:

մաքուր մշակույթ- մեկ տեսակի միկրոօրգանիզմների պոպուլյացիա, որն աճեցված է մեկուսացված գաղութից սննդարար միջավայրի վրա:

Շատ պաթոգեն մանրէներ աճեցվում են սննդարար միջավայրում 37°C ջերմաստիճանում 1-2 օրվա ընթացքում:

Մշակութային լրատվամիջոցների դասակարգում

Ըստ հետևողականության.հեղուկ, կիսահեղուկ, խիտ:

Ծագում:բնական (կաթ, կարտոֆիլ), արհեստական, կիսասինթետիկ, սինթետիկ

Կազմով.պարզ (MPA, MPB, բանջարեղեն, կաթ), բարդ (1% գլյուկոզա, 10-20% շիճուկ, 20-30% ասցիտիկ հեղուկ, 5-10% դեֆիբրինացված արյուն):

Ըստ նշանակման.

ունիվերսալ - կրիչներ, որոնց վրա շատ տեսակի բակտերիաներ լավ են աճում: Դրանք ներառում են միս-պեպտոն արգանակ (MPB) և միս-պեպտոն ագար (MPA);

հատուկ - հատուկ պատրաստված կրիչներ՝ բակտերիաների աճը ստանալու համար, որոնք չեն աճում ունիվերսալ միջավայրում.

դիֆերենցիալ ախտորոշում - միջավայրեր, որոնք հնարավորություն են տալիս ֆերմենտային ակտիվությամբ տարբերել բակտերիաների մի տեսակը մյուսներից.

ընտրովի - որոշակի տեսակների միկրոօրգանիզմների կողմից օգտագործվող նյութեր պարունակող և այլ միկրոօրգանիզմների աճը կանխող նյութեր: Ընտրովի կրիչները թույլ են տալիս ուսումնասիրվող նյութից ընտրել բակտերիաների որոշակի տեսակներ.

դիֆերենցիալ-սելեկտիվ - միջավայրեր, որոնք համատեղում են դիֆերենցիալ ախտորոշիչ և ընտրովի միջավայրերի հատկությունները.

կոնսերվանտ;

կենտրոնանալով.

Բակտերիաների վերարտադրությունը հեղուկ և խիտ սննդարար միջավայրում:

Աճ բակտերիալ բջջի բոլոր բաղադրիչների համակարգված վերարտադրությունը և դրա կենսազանգվածի ավելացումը: վերարտադրություն- վերարտադրումը և բջիջների քանակի ավելացումը, ինչը հանգեցնում է բակտերիաների պոպուլյացիայի ձևավորմանը.

Բակտերիաները բնութագրվում են վերարտադրության բարձր արագությամբ: Բազմացման արագությունը կախված է տեսակից, կազմից աճի միջավայր, pH, ջերմաստիճան, օդափոխություն:

Խիտ սննդանյութերի վրա բակտերիաները ձևավորում են բջիջների կլաստերներ, որոնք կոչվում են գաղութներ: Տարբեր տեսակների գաղութները տարբերվում են չափերով, ձևով, հետևողականությամբ, գույնով, եզրերի բնույթով, մակերեսի բնույթով, թափանցիկությամբ։

Հեղուկ սնուցող միջավայրի վրա աճի բնույթը՝ թաղանթային (սննդային միջավայրի մակերեսին թաղանթի ձևավորում), ցրված պղտորություն, մերձներքև (տեղումներ):

Բակտերիալ պոպուլյացիայի զարգացման փուլերը

Սկզբնական ստացիոնար փուլ (~ 1-2 ժամ): Բակտերիաների թիվը չի ավելանում, բջիջները չեն աճում։

Հետաձգման փուլ կամ բուծման հետաձգման փուլ (~ 2 ժամ):

Log-phase - լոգարիթմական կամ էքսպոնենցիալ փուլ (~ 3-5h): Բնակչությունը բաժանվում է առավելագույն արագությամբ և նկատվում է անհատների աճ երկրաչափական գծով։

Բացասական արագացման փուլ (~ 2 ժամ): Կապված է սահմանափակող մետաբոլիտի սպառման կամ թունավոր նյութափոխանակության արտադրանքի կուտակման հետ:

Առավելագույնի ստացիոնար փուլ. Ձևավորված և մահացող բջիջների թիվը նույնն է:

Արագացված մահվան փուլ (~ 3 ժամ):

Լոգարիթմական մահվան փուլ (~ 5):

Մահացության մակարդակի նվազման փուլ՝ մնացած կենդանի անհատները անցնում են քնած վիճակի։

Բակտերիաների էներգետիկ նյութափոխանակությունը

Աերոբներ- միկրոօրգանիզմներ, որոնք օգտագործում են սուբստրատների կենսաբանական օքսիդացման աերոբ (օքսիդատիվ) տեսակը: Աերոբների նյութափոխանակությունն իրականացվում է միայն միջավայրում ազատ թթվածնի բարձր կոնցենտրացիայի առկայության դեպքում, որը հանդես է գալիս որպես ենթաշերտից վերցված էլեկտրոնների վերջնական ընդունող: Աերոբների աճեցումն իրականացվում է մթնոլորտային թթվածնի լիարժեք հասանելիությամբ միջավայրերում:

պարտադիր անաէրոբներ- անաէրոբ տիպի օգտագործող միկրոօրգանիզմներ կենսաբանական օքսիդացում(խմորում): Նյութափոխանակությունը տեղի է ունենում միայն թթվածնի բացակայության դեպքում ցածր ռեդոքս պոտենցիալ ունեցող միջավայրերում:

Շրջակա միջավայրում թթվածնի կոնցենտրացիայի ավելացումը հանգեցնում է վեգետատիվ ձևերի մահվան:

Ֆերմենտացման ընթացքում արդյունահանվող էներգիայի քանակը փոքր է, ուստի պարտադիր անաէրոբները ստիպված են խմորում մեծ քանակությամբ սուբստրատ:

Ֆակուլտատիվ անաէրոբներ- միկրոօրգանիզմներ, որոնք ունակ են էներգիա կորզելու ենթաշերտերից կենսաբանական օքսիդացման աերոբ (օքսիդատիվ) և անաէրոբ (ֆերմենտացնող) ուղիներով. Նյութափոխանակությունը կարող է իրականացվել ինչպես շրջակա միջավայր թթվածնի լիարժեք հասանելիության, այնպես էլ անաէրոբիոզի պայմաններում:

Անաէրոբիոզի ստեղծման մեթոդներ

Ֆիզիկական

ցանում շաքարի MPA սյունակում;

հեղուկ սնուցող միջավայրի եռում (վերականգնում), որին հաջորդում է յուղային ծածկույթը.

անաէրոստատներում թթվածնի մեխանիկական հեռացում;

թթվածնի փոխարինում անտարբեր գազով;

Veillon-Vignal խողովակներ.

Քիմիական

Արիստովսկու ապարատ;

մոմ Օմելյանսկի ( ալկալային լուծույթպիրոգալոլ);

քիմիական թթվածնի ընդունիչների օգտագործումը՝ գլյուկոզա, պիրուվիկ թթու, նատրիումի մածուցիկ թթու և այլն։

Կենսաբանական

Kitta-Tarozzi չորեքշաբթի

Fortner մեթոդ

Անաէրոբներ - օրգանիզմներ, որոնք էներգիա են ստանում մուտքի բացակայության դեպքում թթվածին ըստ ենթաշերտի ֆոսֆորիլացում , ենթաշերտի թերի օքսիդացման վերջնական արտադրանքները կարող են օքսիդացվել ավելի շատ էներգիայով՝ ձևով.ATP օրգանիզմների կողմից վերջնական պրոտոն ընդունողի առկայության դեպքում, որը .

Անաէրոբ շնչառություն- ագրեգատ կենսաքիմիական ռեակցիաներ, որը տեղի է ունենում կենդանի օրգանիզմների բջիջներում, երբ օգտագործվում է որպես վերջնական պրոտոն ընդունող, ոչ թթվածինև այլ նյութեր (օրինակ. նիտրատներ) և վերաբերում է գործընթացներին էներգիայի նյութափոխանակություն(կատաբոլիզմ,դիսիմիլացիա), որոնք բնութագրվում են օքսիդացումածխաջրեր,լիպիդներև ամինաթթուներցածր մոլեկուլային քաշի միացությունների նկատմամբ:

ԲԱՅՑ Աերոբ և անաէրոբ բակտերիաները հեղուկ սննդարար միջավայրում նախապես հայտնաբերվում են O2 կոնցենտրացիայի գրադիենտով.

1. պարտադիր աերոբիկա(թթվածին պահանջող) բակտերիաները հիմնականում հավաքվում են խողովակի վերին մասում՝ առավելագույն քանակությամբ թթվածին կլանելու համար: (Բացառություն՝ միկոբակտերիա՝ մոմ-լիպիդային թաղանթի պատճառով մակերեսի վրա թաղանթի աճ):

2. պարտադիր անաէրոբբակտերիաները հավաքվում են ներքևում, որպեսզի խուսափեն թթվածնից (կամ չաճեն): 3. Ֆակուլտատիվ բակտերիաներհավաքվում են հիմնականում վերին ( օքսիդատիվ ֆոսֆորիլացումավելի օգտակար է, քան գլիկոլիզը), սակայն դրանք կարող են հայտնաբերվել ողջ միջավայրում, քանի որ դրանք կախված չեն O 2-ից: չորս . միկրոաէրոֆիլներհավաքվում են խողովակի վերին մասում, սակայն դրանց օպտիմալը թթվածնի ցածր կոնցենտրացիան է: 5. ԱերոտոլերանտԱնաէրոբները չեն արձագանքում թթվածնի կոնցենտրացիաներին և հավասարաչափ բաշխված են փորձանոթով:

Դ չափման համար հզորությունըմիջավայրեր Մ.Քլարկառաջարկվում է օգտագործել pH20 արժեքը՝ բացասական լոգարիթմմասնակի ճնշումգազային ջրածինը. Շարքը բնութագրում է ջրային լուծույթի հագեցվածության բոլոր աստիճանները ջրածնով և թթվածնով: Աերոբները աճում են ավելի բարձր պոտենցիալով, ֆակուլտատիվ անաէրոբները և ամենացածրը՝ պարտադիրները:)

Անաէրոբների դասակարգում, տարբերակել.

Ֆակուլտատիվ անաէրոբներ

Կապնեիստական ​​անաէրոբներ և միկրոաերոֆիլներ

Աերոտոլերանտ անաէրոբներ

Չափավոր խիստ անաէրոբներ

պարտադիր անաէրոբներ

Եթե ​​օրգանիզմը կարողանում է մի նյութափոխանակության ուղուց անցնել մյուսին (օրինակ՝ անաէրոբ շնչառությունից դեպի aerobicև հակառակը), ապա այն պայմանականորեն կոչվում է ֆակուլտատիվ անաէրոբներ .

Մինչև 1991 թվականը մանրէաբանության մեջ առանձնանում էր կապնեիստական ​​անաէրոբների մի դաս, որոնք պահանջում էին նվազեցված կոնցենտրացիան թթվածինև ածխածնի երկօքսիդի կոնցենտրացիայի ավելացում (Brucella bovine type - B. abortus)

Մշակութային հետազոտության մեթոդորոշակի տեսակի բակտերիաների սննդարար միջավայրից մեկուսացումն է մշակման միջոցով՝ դրանց հետագա տեսակների նույնականացմամբ։ Բակտերիաների տեսակը որոշվում է՝ հաշվի առնելով դրանց կառուցվածքը, մշակութային և բնապահպանական տվյալները, ինչպես նաև գենետիկական, կենսաքիմիական և կենսաբանական ցուցանիշները։ Մանրէաբանական ախտորոշման համար օգտագործվում են սխեմաներ, որոնք հաստատված են Առողջապահության նախարարության կողմից:

Սննդային միջավայրից ստացված բակտերիաների նոր տեսակները, որոնց հատկությունները դեռ պարզված չեն, կոչվում են մաքուր մշակույթ. Նրանց բնութագրերի վերջնական նույնականացումից հետո որոշակի տեղից և որոշակի ժամանակում ստացված բակտերիաներին անվանում են տալիս: լարում.Այս դեպքում թույլատրվում է մեկ տեսակի շտամի առանձնացման հատկությունների, վայրի կամ ժամանակի աննշան տարբերություն:

Մեթոդի նպատակը:

1. Էթիոլոգիական ախտորոշում, այսինքն՝ բակտերիաների մաքուր մշակույթի մեկուսացում և նույնականացում։

2. Միկրոօրգանիզմների քանակի և դրանց հատուկ բնութագրերի որոշում. Օրինակ, հակաբիոտիկների նկատմամբ հատուկ ռեակցիա:

3. Միկրոօրգանիզմների ներգեներային տարբերությունների բացահայտում` հիմնվելով դրանց համաճարակաբանական և գենետիկ բաղադրիչի վրա: Սա անհրաժեշտ է տարբեր վայրերում և տարբեր պայմաններում մեկուսացված միկրոօրգանիզմների ընդհանրությունը որոշելու համար, ինչը կարևոր է համաճարակաբանական նպատակներով:

Հետազոտության այս մեթոդն ունի որոշակի թվով փուլեր, որոնք տարբեր են աերոբ, ֆակուլտատիվ և պարտադիր աերոբ բակտերիաների համար։

Աերոբ և ֆակուլտատիվ աերոբ բակտերիաների մաքուր մշակույթ բուծում:

Փուլ 1

ԲԱՅՑ) Նախապատրաստական ​​աշխատանքներ. Այս փուլը ներառում է նյութի հավաքումը, պահպանումը և տեղափոխումը: Նաև, անհրաժեշտության դեպքում, այն կարող է վերամշակվել՝ կախված ուսումնասիրված բակտերիաների հատկություններից։ Օրինակ, տուբերկուլյոզի համար նյութը հետազոտելիս օգտագործվում են ալկալային կամ թթվային լուծույթներ՝ թթվակայուն միկրոբակտերիաները հայտնաբերելու համար։

Բ) Հարստացում. Այս փուլը ընտրովի է և իրականացվում է, եթե փորձարկման նյութում բակտերիաների քանակը բավարար չէ լիարժեք ուսումնասիրություն իրականացնելու համար: Օրինակ, արյան կուլտուրան մեկուսացնելիս փորձարկման արյունը տեղադրվում է միջավայրում 1-ից 10 հարաբերակցությամբ և պահվում մեկ օր 37°C ջերմաստիճանում:

AT) Մանրադիտակ. Փորձարկման նյութի քսուքը ներկվում և հետազոտվում է մանրադիտակի տակ. հետազոտվում է միկրոֆլորան, դրա հատկությունները և քանակը: Հետագայում առաջնային քսուքից անհրաժեշտ է առանձին մեկուսացնել դրանում առկա բոլոր միկրոօրգանիզմները։

է) Առանձին գաղութների ստեղծում. Նյութը կիրառվում է բաժակի վրա, հատուկ, ընտրովի միջավայրով, դրա համար օգտագործվում է օղակ կամ սպաթուլա: Այնուհետև բաժակը գլխիվայր դրեք՝ գաղութները խտացումից պաշտպանելու համար և պահեք թերմոստատի մեջ մոտ 20 ժամ՝ պահպանելով 37 o ջերմաստիճան:

Կարևոր.Պետք է հիշել, որ հետազոտության ընթացքում անհրաժեշտ է պահպանել մեկուսացման կանոնները։ Մի կողմից՝ պաշտպանելու փորձարկման նյութը և հեռացվող բակտերիաները, իսկ մյուս կողմից՝ կանխելու շրջակա մարդկանց և արտաքին միջավայրի աղտոտումը։

Ինչ վերաբերում է պայմանականորեն ախտածին միկրոօրգանիզմներին, ապա դրանց հեռացման դեպքում նշանակություն ունեն դրանց քանակական բնութագրերը։ Այս դեպքում կատարվում է քանակական ցանք, որի ժամանակ նյութի մի քանի հարյուրապատիկ նոսրացումներ են կատարվում նատրիումի քլորիդի իզոտոնիկ լուծույթում։ Դրանից հետո ցանքը կատարվում է 50 մկլ Պետրի ամանների մեջ։

Փուլ 2

ԲԱՅՑ ) Ուսումնասիրությունը մորֆոլոգիական հատկություններգաղութները լրատվամիջոցներում և դրանց մանրադիտակը. Ուտեստները հետազոտվում են և նշվում են միկրոօրգանիզմների հատկությունները, դրանց քանակը, աճի տեմպերը և ամենահարմար սննդային միջավայրը։ Ուսումնասիրության համար ավելի լավ է ընտրել կենտրոնին ավելի մոտ գտնվող գաղութները, և եթե ձևավորվում են մի քանի տեսակի մաքուր մշակույթներ, ապա յուրաքանչյուրն առանձին ուսումնասիրեք: Մշակույթի մորֆոտիպային մաքրությունը ուսումնասիրելու համար օգտագործվում է գաղութային քսուք, այն ներկվում է (սովորաբար օգտագործելով Gram մեթոդը կամ որևէ այլ) և ուշադիր մանրադիտակային:

Բ) Մաքուր մշակույթի կուտակում. Դրա համար բոլոր մորֆոտիպերի գաղութները տեղադրվում են առանձին փորձանոթներում՝ սննդարար միջավայրով և պահվում թերմոստատում որոշակի ջերմաստիճանում (միկրոօրգանիզմների մեծ մասի համար հարմար է 37 o ջերմաստիճանը, բայց որոշ դեպքերում այն ​​կարող է տարբեր լինել):

Կլիգլերի միջավայրը հաճախ օգտագործվում է որպես սնուցիչ կուտակման համար, այն ունի «թեք» տեսք փորձանոթներում, որտեղ դրա մասերի 2/3-ը գտնվում են սյունակի տեսքով, իսկ 1/3-ը թեք մակերես է՝ գունավոր բաց կարմիր գույնով։ . Միացություն:

· MPA

· 0,1% գլյուկոզա

· 1% կաթնաշաքար

· Հատուկ ռեագենտ ջրածնի սուլֆիդի համար

· Ֆենոլային կարմիր ցուցիչ.

Փուլ 3

ԲԱՅՑ) Մշակույթի աճի և մաքրության մակարդակ. Ընդհանուր կարգով ստացված մաքուր կուլտուրան ունի միատեսակ աճ և մանրադիտակային հետազոտությամբ բջիջներն ունեն նույն ձևաբանական և թուրմային կառուցվածքը։ Բայց կան ընդգծված պլեոֆորիզմով բակտերիաների որոշ տեսակներ, մինչդեռ կան բջիջներ, որոնք ունեն այլ մորֆոլոգիական կառուցվածք։

Եթե ​​Kligler-ի միջավայրը օգտագործվել է որպես սննդարար միջավայր, ապա կենսաքիմիական բնութագրերը որոշվում են սյունակի և թեք հատվածի գույնը փոխելով: Օրինակ, եթե կաթնաշաքարը քայքայվում է, ապա թեքված մասը դառնում է դեղին, եթե գլյուկոզան՝ սյունակի դեղնացում; ջրածնի սուլֆիդի արտադրությամբ սևացում է առաջանում սուլֆատի երկաթի սուլֆիդի անցման պատճառով:

Ինչպես տեսնում եք նկարում, Kligler միջավայրը հակված է փոխել իր գույնը: Դա պայմանավորված է նրանով, որ բակտերիաների կողմից ազոտային նյութերի քայքայումը և ալկալային արտադրանքի ձևավորումը տեղի են ունենում անհամասեռորեն ինչպես սյունակում (անաէրոբ պայմաններ), այնպես էլ թեք մակերեսի վրա (աէրոբ պայմաններ):

Աերոբ միջավայրում (թեք մակերես) նկատվում է ավելի ակտիվ ալկալիների առաջացում, քան անաէրոբ միջավայրում (սյունակում)։ Հետեւաբար, երբ գլյուկոզան քայքայվում է, թեք մակերեսի թթուն հեշտությամբ չեզոքացվում է: Բայց, կաթնաշաքարի տարրալուծմամբ, որի կոնցենտրացիան շատ ավելի մեծ է, թթուն չի կարող չեզոքացվել։

Ինչ վերաբերում է անաէրոբ միջավայրին, ապա շատ քիչ ալկալային արտադրանք են առաջանում, ուստի այստեղ կարող եք դիտել, թե ինչպես է գլյուկոզան խմորվում:

Բրինձ. Kligler-ի սննդարար միջավայր.

1 - սկզբնական միջավայր,

2 - աճ E. coli

3 - աճ S. paratyphi B,

4 - աճ S. Typhi.

Ե.կոլի-նպաստում է գլյուկոզայի և կաթնաշաքարի տարրալուծմանը գազերի ձևավորման հետ, չի արտադրում ջրածին . Առաջացնում է ամբողջ միջավայրի դեղնացում՝ ընդհատումներով:

S. paratyphi -նպաստում է գլյուկոզայի տարրալուծմանը գազերի առաջացմամբ, լակտոզա-բացասական: Շեղված հատվածը գույնը չի փոխում, սյունը դեղնում է։
S. paratyphi A-չի արտադրում ջրածնի սուլֆիդ:
S. paratyphi B -արտադրվում է ջրածնի սուլֆիդ (ներարկման ժամանակ հայտնվում է սև գույն)։

S. typhi -գլյուկոզան քայքայվում է առանց գազի առաջացման, առաջանում է ջրածնի սուլֆիդ, կաթնաշաքար վանող։ Թեքված հատվածը չի փոխում գույնը, ներարկման ընթացքում սյունակը դառնում է դեղին, իսկ միջինը՝ սև:

Shigella spp.-լակտոզա-բացասական, գլյուկոզա-դրական, ջրածնի սուլֆիդ չի արտադրվում: Սյունակը ձեռք է բերում դեղին երանգ, իսկ թեքված մասը մնում է նույնը։

Բ) Մաքուր մշակույթի վերջնական նույնականացում և դրա արձագանքը հակաբիոտիկներին. Վրա այս փուլըՈւսումնասիրվում են մշակույթի կենսաքիմիական, կենսաբանական, սերոլոգիական և գենետիկական հատկությունները։

Հետազոտական ​​պրակտիկայում կարիք չկա ուսումնասիրել միկրոօրգանիզմների հատկությունների ամբողջ շրջանակը: Բավական է օգտագործել ամենապարզ թեստերը՝ պարզելու համար, թե արդյոք միկրոօրգանիզմները պատկանում են որոշակի տեսակի։

II. ՁԵՌՔԻ ՎԻՐԱԲԱՆՈՒԹՅԱՆ ՔՆՆՈՒԹՅԱՆ ԵՎ ԲՈՒԺՄԱՆ ՎԻՐԱԲԱՆԱԿԱՆ ՄԵԹՈԴՆԵՐ ԵՎ ՄԵԹՈԴՆԵՐ

III. ՕԳՆԱԿԱՆ ԳՈՐԾԻՔԱՅԻՆ ԵՎ ԼԱԲՈՐԱՏՈՐԻԱԿԱՆ ՀԵՏԱԶՈՏՈՒԹՅԱՆ ՄԵԹՈԴՆԵՐ.

IV. Մեթոդական ցուցումներ ուսանողների համար դասին պատրաստվելու վերաբերյալ

ՆՊԱՏԱԿ:

1. Բակտերիաների մաքուր կուլտուրաների մեկուսացման ուսումնասիրության մեթոդներ

2. Տիրապետել վարակիչ հիվանդությունների ախտորոշման մանրէաբանական մեթոդին.

ՏԵՍԱԿԱՆ ՀԻՄՆԱԿԱՆ

Մանրէաբանական մեթոդվարակիչ հիվանդությունների ախտորոշման հիմնական մեթոդն է։ Դրա էությունը վարակիչ գործակալի տեսակը որոշելն է, հետևաբար, մանրէաբանական մեթոդի արդյունքների հիման վրա կարող է կատարվել էթիոլոգիական (վերջնական) ախտորոշում: Մեթոդի հիմնական թերությունը ուսումնասիրության տեւողությունն է՝ 3-ից 5 օր, իսկ որոշ դեպքերում՝ նույնիսկ ավելին։

Մանրէաբանական մեթոդի հաջողությունը մեծապես կախված է նախնական փուլից, ներառյալ փորձարկման նյութի նմուշառումը և դրա տեղափոխումը, ինչպես նաև մանրէաբանական լաբորատորիա ուղղորդման ձևավորումը: Այս դեպքում պետք է պահպանել մի շարք կանոններ.

1. Ցանկապատփորձարկման նյութը պետք է իրականացվի նախքան հակաբիոտիկ թերապիայի մեկնարկը կամ հակաբիոտիկի վերջին դեղաչափից 8-10 ժամ հետո: Շրջակա միջավայրի միկրոֆլորայով նմուշի աղտոտումից խուսափելու համար անհրաժեշտ է պահպանել ամենախիստ ասեպսիսը: Դա անելու համար օգտագործեք ստերիլ նյութ՝ ա) բամբակյա շվաբրեր՝ վերքից, լորձաթաղանթներից (աչքեր, կոկորդ, քիթ) նյութ վերցնելու համար. բ) լարային հանգույց հեշտոցից, անուսից նյութ վերցնելու համար. գ) արյուն վերցնելու ներարկիչ, թարախ; դ) ստերիլ սպասք՝ մեզի, խորխի, կղանքի մեջ ուղղակի հավաքելու համար։

2. ՏրանսպորտՍտացված նյութը պետք է արտադրվի հնարավորինս շուտ (2-3 ժամ) հատուկ հեծանիվներով կամ մատիտատուփերում։

3. Ուղղությունորպես ուղեկցող փաստաթուղթ կցվում է կլինիկական նմուշին: Այն պարունակում է մանրէաբանական ուսումնասիրություն անցկացնելու համար անհրաժեշտ հիմնական տեղեկատվությունը.

հիվանդի ազգանունը, անունը, հայրանունը, տարիքը.

Առաջարկվող հիվանդության ախտորոշում;

Նախկին հակամանրէային թերապիա;

Նյութի բնույթը;

Նյութի ընդունման ամսաթիվը և ժամը;

Ուսումնասիրության նպատակը;

Բուժհաստատության անվանումը, բաժանմունքի համարը, բաժանմունք;

Բժշկի ստորագրությունը.

Մանրէաբանական մեթոդն իրականացվում է երկու փուլով (նկ. 2.1.).

1. Պաթոգենի մաքուր մշակույթի մեկուսացում (1-2 օր);

2. Մաքուր մշակույթի նույնականացում (1-3 օր):

Առաջին փուլում փորձարկման նյութը ցանվում է պինդ կամ հեղուկ սննդարար միջավայրի վրա, գնահատվում են մշակութային հատկությունները, ընտրվում են կասկածելի գաղութներ և զննում թեք ագարի վրա: Նույնականացման փուլը ներառում է մեկուսացված մաքուր մշակույթի մորֆոլոգիայի, կենսաքիմիական հատկությունների և հակագենային կառուցվածքի պարտադիր ուսումնասիրություն, ինչպես նաև լրացուցիչ ուսումնասիրություններ՝ որոշելու հակաբիոտիկների զգայունությունը, ֆագերի զգայունությունը, ֆագերի տիպավորումը, պաթոգենությունը և կայուն հատկությունները:

ՊԱՏՐԱՍՏՄԱՆ ՀԱՐՑԵՐ.

1. Մանրէաբանական հետազոտության համար փորձանմուշի հավաքման և տեղափոխման կանոններ.

2. Մանրէաբանական հետազոտության ուղեգիր տալու կանոնները.

3. Միկրոօրգանիզմների մաքուր կուլտուրաների մեկուսացման մեթոդներ.

4. Մանրէաբանական ախտորոշման մեթոդ. Թիրախ. Փուլեր. ախտորոշիչ արժեք.

ԱՆԿԱԽ ԱՇԽԱՏԱՆՔԱՅԻՆ ՊԼԱՆ.

1. Ուսումնասիրեք «Բակտերիաների մաքուր կուլտուրաների մեկուսացման մեթոդներ» և «Մաքուր կուլտուրաների մեկուսացում և նույնականացում» աղյուսակները:

2. Մեկուսացնել մաքուր մշակույթը բակտերիաների խառնուրդից և իրականացնել դրա նույնականացումը. տիրապետել մանրէաբանական ախտորոշման մեթոդին (Աշխատանք 1)

ԹԵՄԱ՝ Ստերիլիզացում, ասեպսիս, հակասեպսիս, ախտահանում:

Միկրոօրգանիզմների աճեցման և մաքուր կուլտուրաների մեկուսացման սկզբունքներ, մեթոդներ.

Մանրէաբանական հետազոտության մեթոդ. Փուլ 1.

1. Ծանոթացեք մանրէաբանության և բժշկության մեջ օգտագործվող ախտահանման և մանրէազերծման հիմնական մեթոդներին:

2. Իմանալ միկրոօրգանիզմների նյութափոխանակության առանձնահատկությունները, լաբորատոր պայմաններում դրանց մշակման սկզբունքները.

3. Վարակիչ հիվանդությունների ախտորոշման մանրէաբանական մեթոդի վարպետ 1-ին փուլ.

1. Սննդանյութերի, լաբորատոր ապակյա իրերի, բժշկական գործիքների մանրէազերծման մեթոդներ, սարքեր և եղանակներ:

2. Ախտահանող միջոցների հիմնական խմբերը, դրանց գործողության մեխանիզմը, տարածքը և կիրառման եղանակը.

3. Մանրէաբանական պրակտիկայում սնուցող միջավայրերի նշանակում:

4. Միկրոօրգանիզմների մաքուր կուլտուրաների ստացման սկզբունքը և մանրէաբանական մեթոդի էությունը որպես «ոսկե ստանդարտ» վարակիչ հիվանդությունների ախտորոշման գործում։

5. Միկրոօրգանիզմների մաքուր կուլտուրաների մեկուսացման մանրէաբանական մեթոդի 1-ին փուլի կատարման նպատակը և հաջորդականությունը.

1. Ընտրեք միջոցները, ստերիլիզացման և ախտահանման եղանակը՝ ըստ կոնկրետ առաջադրանքների:

2. Նկարագրեք առաջարկվող սննդարար միջավայրը, որն օգտագործվում է մանրէաբանական պրակտիկայում:

3. Իրականացնել աերոբ միկրոօրգանիզմների մաքուր կուլտուրաների մեկուսացման մանրէաբանական մեթոդի 1-ին փուլը.

թեստի հարցեր:

1. Ցածր և բարձր ջերմաստիճանների բակտերիոստատիկ և մանրէասպան ազդեցությունը միկրոօրգանիզմների վրա։

2. Քիմիական նյութերի ազդեցությունը տարբեր դասերմիկրոօրգանիզմների վրա. Հակասեպտիկներ և ախտահանիչներ.

3. Հասկացություններ՝ ստերիլիզացում, ախտահանում, ասեպսիս, հակասեպսիս:

4. Ստերիլիզացման մեթոդները, սարքավորումները և եղանակները, դրանց ընտրությունը՝ կախված մանրէազերծվող առարկայի հատկություններից:

5. Ախտահանիչ միջոցների հիմնական խմբերը և դրանց կիրառման մարտավարությունը առողջապահական հաստատություններում.

6. Միկրոօրգանիզմների աճեցման սկզբունքներն ու մեթոդները.

7. Սնուցող միջավայր՝ հայեցակարգ; պահանջներ նրանց համար; դասակարգում.

8. Տեսակի, շտամի, գաղութի, միկրոօրգանիզմների մաքուր կուլտուրա հասկացությունը:

9. Մանրէաբանական մեթոդի էությունը և դրա կիրառման շրջանակը.

10. Աերոբների մեկուսացման մանրէաբանական մեթոդի 1-ին փուլի նպատակն ու հաջորդականությունը.

Դասի ընթացքում կատարված առաջադրանքներ (UIRS).

1. Ծանոթացեք բժշկական և մանրէաբանական պրակտիկայում ստերիլիզացման համար օգտագործվող սարքերին՝ գոլորշու ստերիլիզատոր (ավտոկլավ), Պաստերի վառարան։

2. Ընտրեք սննդանյութերի, լաբորատոր ապակյա իրերի, բժշկական գործիքների մանրէազերծման սարքեր և եղանակներ:

3. Ծանոթացեք բժշկական և մանրէաբանական պրակտիկայում օգտագործվող ախտահանիչներին: Առաջարկվող օբյեկտների համար ընտրեք ախտահանիչներ և ախտահանման ռեժիմ:

4. Ծանոթացեք մանրէաբանական պրակտիկայում օգտագործվող սննդանյութերի տարբեր միջավայրերին, բնութագրեք դրանք բաղադրության, հետևողականության և նպատակի առումով:

5. Իրականացնել աերոբների մաքուր կուլտուրաների մեկուսացման մանրէաբանական մեթոդի 1-ին փուլը.

5.1. Փորձարկման նյութից պատրաստել ֆիքսված պատրաստուկ, ներկել գրամով, մանրադիտակով և բացահայտել հայտնաբերված միկրոօրգանիզմները՝ ըստ մորֆոլոգիական և թուրմային հատկությունների:

5.2. Փորձարկման նյութը ցանել «հարված հարթակով» մեթոդով։

5.3. Փորձարկման նյութը ցանում են Դրագալսկու մեթոդով (ցուցադրում):

6. Ծանոթացեք պաթոլոգիական նյութերի հավաքման և տեղափոխման գործիքների հավաքածուին:

Ուղեցույցներհետազոտական ​​առաջադրանքին՝

1. Ծանոթություն ստերիլիզացման համար օգտագործվող սարքերին՝ գոլորշու ստերիլիզատոր (ավտոկլավ), պաստերի վառարան։

1.1. Steam sterilizer (ավտոկլավ) - գոլորշու մանրէազերծում ճնշման տակ:

Բժշկական և մանրէաբանական պրակտիկայում մանրէազերծման ամենահուսալի և ունիվերսալ մեթոդը ճնշման գոլորշու ստերիլիզացումն է: Այն արտադրվում է ավտոկլավում, որտեղ մանրէազերծվող առարկաները տաքացվում են հագեցած գոլորշու միջոցով մթնոլորտայինից բարձր ճնշման տակ։ Մանոմետրի ցուցումների և հագեցած գոլորշու ջերմաստիճանի միջև կա հետևյալ կապը.

Զրոյական ճնշումը համարվում է նորմալ մթնոլորտային ճնշում (760 մմ Hg):

Մանրէազերծումը կարող է իրականացվել միայն այն դեպքում, եթե ավտոկլավը լիովին գործարկվի և պատշաճ կերպով շահագործվի հատուկ պատրաստված անձնակազմի կողմից: Հետևաբար, անհրաժեշտ է մշտապես վերահսկել ստերիլիզացման ռեժիմը, որն իրականացվում է ֆիզիկական (առավելագույն ջերմաչափ և այլն), կենսաբանական (բիոտեստ միկրոօրգանիզմների փորձնական մշակույթների սպորներով) և քիմիական (քիմիական թեստեր, ցուցիչներ, ինչպիսիք են IS) մեթոդները:

Իրականացվում է ավտոկլավների ստերիլիզացման ռեժիմի հսկողություն քիմիական միջոցներովամեն անգամ, երբ ավտոկլավը բեռնվում է: Քիմիական փորձարկում - ապակե խողովակով քիմիականունենալով որոշակի հալման կետ՝ հակապիրին, ռեզորցինոլ՝ 110 ± 1 °, բենզոյական թթու՝ 120 ± 2 °, բենզամիդ՝ 126 ± 1 °, միզանյութ, նիկոտինամիդ, D (+)-մանոզ՝ 132 ± 2 °: մաս քիմիական թեստերներմուծվում է անիլինային ներկ (magenta, gentian violet և այլն), որը միատեսակ գունավորում է նյութը, երբ այն հալվում է։ Ներկայումս ավելի հաճախ օգտագործվում են IS տիպի ցուցիչներ (Vinar, Ռուսաստան), որոնք ներկայացնում են թղթի շերտ, որի վրա կիրառվում է ցուցիչ խառնուրդի շերտ և նախատեսված է ոչ միայն ջերմաստիճանի, այլև ստերիլիզացման ժամանակի գործառնական տեսողական հսկողության համար (IS-): 120, ԻՍ-132) . Մանրէազերծման ռեժիմը վերահսկվում է եռամսյակը մեկ՝ օգտագործելով փորձնական մշակույթի սպորներով բիովերլուծություն Bacillus stearotermophilus BKM B-718.

1.2. Pasteur վառարան - չոր ջերմային ստերիլիզացում:

Pasteur ջեռոցում սիլիկոնային կաուչուկի վրա հիմնված ապակուց, մետաղներից և ռետիններից պատրաստված արտադրանքները ստերիլիզացվում են: Ստերիլիզացման ռեժիմ՝ 160°C - 150 րոպե; 180°С - 60 ր. Ստերիլիզացման ռեժիմի վերահսկումը յուրաքանչյուր ցիկլում իրականացվում է մանրէազերծման ցուցիչների օգնությամբ IS-160, IS-180; եռամսյակային - օգտագործելով բիոտեստ՝ փորձնական մշակույթի սպորներով Bacillus licheniformisհատ: Գ ԲԿՄ Բ-1711 Դ.

2. Լրացրեք տանըաղյուսակ թիվ 1.

Աղյուսակ 1.

Ստերիլիզացում

3. Ծանոթացեք ախտահանիչ միջոցներին և լցրեք դասարանումաղյուսակ թիվ 2՝ օգտագործելով թիվ 1, 2 հավելվածները։

Աղյուսակ 2.

Ախտահանում

4. Ծանոթացեք սնուցող միջավայրին և լցրեք դասարանումԱղյուսակ թիվ 3 «Սննդանյութեր».

Աղյուսակ 3

5. Կլինիկական մանրէաբանությունը որպես բժշկական մանրէաբանության ճյուղ լուծում է երկու հիմնական խնդիր՝ վարակիչ հիվանդության էթիոլոգիական ախտորոշում և էիոտրոպ թերապիայի ռացիոնալ ընտրություն։

Մանրէաբանական ախտորոշման հիմնական մեթոդըլուծել այս խնդիրները մանրէաբանական մեթոդ. Մանրէաբանական մեթոդի էությունն այն է, որ մեկուսացնեն պաթոգենի մաքուր կուլտուրան, որոշել դրա տեսակը և զգայունությունը հակամանրէային դեղամիջոցների նկատմամբ:

Ուսումնասիրվող նյութի ընտրությունկախված է հիվանդության տեսակից և դրա զարգացման որոշակի փուլում (պաթոգենեզ) հարուցչի գերակշռող տեղայնացումից: Նյութը կարող է լինել արյուն, ողնուղեղային հեղուկ, վերքի արտահոսք, խորք, կղանք, մեզ և այլն: Նյութի նմուշառման տեխնիկան ունի. մեծ նշանակությունհուսալի արդյունքներ ստանալու համար:

Մաքուր մշակույթի մեկուսացման հաջողությունը որոշվում է կոռեկտությամբ սնուցող միջավայրի ընտրություն և աճեցման պայմաններ. Չկա ունիվերսալ սնուցող միջավայր, որի օգտագործումը հնարավորություն կտա մեկուսացնել ցանկացած միկրոօրգանիզմ ցանկացած փորձարկման նյութից։ Հետևաբար, հնարավոր ախտածինների ֆիզիոլոգիական բնութագրերը հաշվի առնելով՝ նյութը ցանվում է հատուկ սննդային միջավայրի կամ սննդարար միջավայրերի համալիրի վրա (հատուկ, ընտրովի, դիֆերենցիալ ախտորոշիչ): Որոշ միկրոօրգանիզմներ պահանջում են նաև մշակման հատուկ պայմաններ (անաէրոբ, միկրոաերոֆիլ, ածխածնի երկօքսիդի բարձր պարունակությամբ)։

Հիվանդի պաթոլոգիական նյութը հաճախ միկրոօրգանիզմների խառնուրդ է: Այս առումով խնդիր է դրված առանձնացնել դրանք և ստանալով մեկուսացված գաղութներ. Մեկ մանրէային բջջի վերարտադրության և մեկ տեսակի բջջից բաղկացած մեկուսացված գաղութը հիմք է հանդիսանում մաքուր կուլտուրա ստանալու համար։ Մանրէաբանական պրակտիկայում տարբեր մեթոդներ են օգտագործվում մեկուսացված գաղութներ ստանալու համար։ Առավել հաճախ օգտագործվում են հետևյալները.

1. Փորձարկման նյութի ցանում «կաթված պահոցով» մեթոդով- փորձարկման նյութը կիրառվում է խիտ սննդային միջավայրի մակերեսին սահմանափակ տարածքում, այնուհետև բաժանվում է հաճախակի զուգահեռ հարվածներով ցանելով:

2. Դրիգալսկու մեթոդ- առաջին բաժակի վրա սնուցող միջավայրով կիրառված և թիակով ցանված նյութը հաջորդաբար պատվաստվում է նույն սպաթուլայով, առանց մանրէազերծելու ևս 1-2 բաժակ:

3. Ոլորտի բերքի մեթոդ– ուսումնասիրված նյութը ցանվում է հաջորդաբար մեկ օղակով մի քանի հատվածների վրա: Միևնույն ժամանակ, որոշակի ցանքի տեխնիկա (մեթոդ գուլդ) թույլ է տալիս ոչ միայն ձեռք բերել մեկուսացված գաղութներ, այլ նաև որոշել միկրոօրգանիզմների քանակը փորձարկման նյութի 1 մլ (գ) մեջ, ինչը կարևոր է օպորտունիստական ​​միկրոօրգանիզմների (OPM) պատճառաբանական դերը գնահատելու համար:

5.1.Աերոբների մեկուսացման մանրէաբանական մեթոդի 1-ին փուլի իրականացում.

Փորձարկման նյութից պատրաստել ֆիքսված պատրաստուկ, ներկել ըստ Gram մեթոդի, մանրադիտակային կերպով, հայտնաբերել հայտնաբերված միկրոօրգանիզմները մորֆո-թանգավոր հատկություններով. ուշադրություն դարձրեք միկրոօրգանիզմների քանակին. Արդյունքներն արձանագրել արձանագրության մեջ և եզրակացություն անել.

Փորձարկման նյութը կես բաժակի վրա ցանել խիտ սնուցող միջավայրով՝ «հարված հարթակով» մեթոդով;

· փորձարկման նյութը ցանել երեք ափսեի վրա՝ սննդարար միջավայրով, օգտագործելով Դրիգալսկի մեթոդը (ցուցադրում);

Սպասքների վրա պիտակավորեք պատվաստման ամսաթիվը և դրանք գլխիվայր դրեք 37°C ջերմաստիճանի թերմոստատի մեջ 18-24 ժամ:

6. Պաթոլոգիական նյութի հավաքման և առաքման միջոցներ

Նշում. * - օգտագործվում է, եթե նյութը լաբորատորիա առաքելու ժամանակը դրա ստացումից հետո գերազանցում է 1,5-2 ժամը:

Հարցեր ինքնատիրապետման համար.

1. Անվանեք և հիմնավորեք միկրոօրգանիզմների աճեցման սկզբունքները:

2. Ինչու են ընտրովի, դիֆերենցիալ ախտորոշիչ և կուտակային միջավայրերը օգտագործվում ախտաբանական նյութ ցանելու համար:

3. Հիմնավորել միկրոօրգանիզմների մաքուր կուլտուրաներ ստանալու սկզբունքը.

4. Ինչո՞ւ է մանրէաբանական մեթոդը «ոսկե ստանդարտ» վարակիչ հիվանդությունների մանրէաբանական ախտորոշման մեջ։

5. Ինչի՞ վրա են հիմնված միկրոօրգանիզմների մաքուր կուլտուրաների ստացման քիմիական եւ կենսաբանական մեթոդները:

6. Ո՞րն է տարբերությունը ստերիլիզացման և ախտահանման միջև:

7. Հիմնավորել մանրէազերծման և ախտահանման նպատակը մանրէաբանական և բժշկական պրակտիկայում:

8. Հիմնավորել ստերիլիզացման ռեժիմի մոնիտորինգի համար ջերմային ցուցիչ համակարգերի կիրառման առավելությունը (Ռուսաստանի Վինար քաղաքից IS ցուցիչի օրինակով):

Գրականություն:

Ձեռնարկներ:

1. Borisov L. B. Բժշկական մանրէաբանություն, վիրուսաբանություն, իմունոլոգիա: - M.: MIA LLC, 2002. - S. 26-29, 63-66, 150-159:

2. Pozdeev O. K. Բժշկական մանրէաբանություն / Ed. ակադ. RAMS V. I. Pokrovsky. - M.: GEOTAR Medicine, 2001. - S. 76-77, 126-130, 253-265:

Լրացուցիչ գրականություն.

1. Պաթոգենության III - IV խմբերի միկրոօրգանիզմների և հելմինտների հետ աշխատանքի անվտանգություն. սանիտարական կանոններ. - Մ.: դաշնային կենտրոնՊետական ​​սանիտարահամաճարակային վերահսկողություն Ռուսաստանի Առողջապահության նախարարություն, 1999. - 107p.

Դասախոսություններ մանրէաբանության վերաբերյալ.

Թեստեր.

Մանրէաբանական հետազոտության մեթոդ. Աերոբ բակտերիաների մաքուր մշակույթի մեկուսացում (1-2 փուլ)

1. Մանրէաբանական մեթոդի էությունը

3. Մեկուսացված գաղութների ստացման մեթոդներ

4. Մաքուր մշակույթ ստանալու մեթոդներ

1. Իրականացնել առաջնային ցանքս Կոխ և Դրիգալսկի մեթոդով

2. Մեկուսացնել մաքուր մշակույթը

Աշխատանքային պլան.

1. Մանրէաբանական հետազոտության մեթոդ

2. Մանրէաբանական մեթոդի փուլերը

3. Հայեցակարգ՝ մաքուր մշակույթ, շտամ, գաղութ

4. Մեկուսացված գաղութների ստացման մեթոդներ

5. Աերոբ բակտերիաների մաքուր կուլտուրա ստանալու մեթոդներ

Վարակիչ հիվանդությունների լաբորատոր ախտորոշման հիմնական մեթոդը մանրէաբանական մեթոդն է։ Մանրէաբանական մեթոդի էությունը ուսումնասիրվող նյութից հարուցիչների մեկուսացումն է և դրա նույնականացումը (սեռի, տեսակների, սորտերի սահմանումը):

Մանրէաբանական մեթոդը թույլ է տալիս որոշել.

1. Պաթոգենի տեսակը և հիվանդության ախտորոշումը

2. Հակաբիոտիկներ, որոնք սպանում են հարուցիչը և նշանակում համապատասխան բուժում

3. վարակի աղբյուրը բացահայտելու համար հարուցիչի ֆագովարները և սերովարները

Առաջին փուլը փորձարկման նյութի առաջնային պատվաստումն է՝ մեկուսացված գաղութներ ստանալու համար: Առաջնային ցանքն իրականացվում է պահեստային կրիչների և DDS-ի (բաժակի կրիչներ) վրա։

Երկրորդ փուլը մեկուսացված գաղութների բնութագրումն է և դրանցից մաքուր կուլտուրա ստանալը հիմնական միջավայրի թեք սյունակի վրա սերմնավորման միջոցով:

Երրորդ փուլը մաքուր մշակույթի նույնականացումն է՝ հարուցիչի սեռի, տեսակների, սորտերի որոշում, հակաբիոտիկների զգայունության որոշում, ֆագովարների որոշում։

Միկրոօրգանիզմների մշակույթը բակտերիաներ են, որոնք աճեցվում են սննդանյութերի վրա: Մաքուր մշակույթը բակտերիաների տեսակներից մեկն է, որն աճեցվում է սննդարար միջավայրում: Տեսակի ներսում կան սորտեր, որոնք տարբերվում են մեկ հատկանիշով.

1. Մորֆովարներ - տարբերվում են մորֆոլոգիայով

2. Քիմովարներ - տարբերվում են կենսաքիմիական հատկություններով

3. Serovars - տարբերվում են հակագենային հատկություններով

4. Ֆագովարներ - տարբերվում են ֆագերի նկատմամբ զգայունությամբ

Մաքուր մշակույթը անհրաժեշտ է նույնականացման, սերովարների, ֆագովարների որոշման, հակաբիոտիկների նկատմամբ զգայունության համար: Շտամը բակտերիաների մեկ տեսակ է, որը մեկուսացված է կոնկրետ աղբյուրից (Վոլգա գետ, հիվանդ Իվանով և այլն): Գաղութ - նույն տեսակի բակտերիաների տեսանելի կուտակում, որը ձևավորվել է մեկ բակտերիալ բջջի վերարտադրության ժամանակ խիտ սննդարար միջավայրի վրա:

Ուսումնասիրության առաջին փուլը փորձարկման նյութի առաջնային պատվաստումն է՝ մեկուսացված գաղութներ ստանալու համար: Նախքան նախնական պատվաստումը կատարվում է փորձարկման նյութի մանրադիտակ: Փորձարկման նյութը սովորաբար պարունակում է տարբեր բակտերիաների, ներառյալ պաթոգենների խառնուրդ: Հարթածինը մեկուսացնելու համար անհրաժեշտ է ձեռք բերել մեկուսացված գաղութներ (նույն տեսակի բակտերիաներ)՝ ընտրելով սնուցող միջավայր և կիրառելով ցանման հատուկ մեթոդներ։

Մեկուսացված գաղութներ ստանալու երկու եղանակ կա.

1. Դրիգալսկու մեթոդ