Քսուքների ներկում ըստ Gram մեթոդի Բակտերիաների ներկման ամենատարածված մեթոդը, որը հնարավորություն է տալիս բջիջները դասակարգել ըստ պատի ներկման տեսակի՝ որպես գրասիլիկուտ (գրամ-բացասական) կամ ֆիրմիկուտ (գրամ-դրական):
Ֆիքսված քսուքի վրա դրվում է զտիչ թղթի կտոր, վրան 30-50 վայրկյան լցնում են ժանտամանուշակի կարբոլիկ լուծույթ։ Ներկանյութը քամվում է, թուղթը հանվում է, Լուգոլի լուծույթը կիրառվում է 60 վայրկյան։ Հեռացրեք Լուգոլի լուծույթը: Լվանալ դեղը 95 ° էթանոլով 30-50 վայրկյան, մինչև ներկը դադարի հեռանալ, ինչը կախված է քսուքի հաստությունից: Պատրաստուկը լվանում են ջրով, 30-60 վայրկյան ներկում Pfeiffer fuchsin-ով, լվանում ջրով, չորացնում և մանրադիտակով զննում։ Մանրադիտակային նկար՝ գրամ դրական բակտերիաներ՝ մանուշակագույն, գրամ-բացասական՝ կարմիր։
Պրակտիկան ցույց է տալիս, որ ավելի մաքուր պատրաստուկներ՝ չհակասելով տարբերակմանը, ձեռք են բերվում, եթե գենտյան մանուշակով ներկվելուց հետո քսուքը մի փոքր ողողվի ջրով, որի մնացորդները թափահարվեն և միայն դրանից հետո կիրառվի Լուգոլի լուծույթը:
Փոփոխություն ըստ A.P. Սինևա. Ֆիքսված քսուքի վրա դնում են ներկով թղթի շերտ, 2-3 կաթիլ ջուր լցնում և 2 րոպե ներկում։ Այնուհետեւ շարունակեք վերը նկարագրվածը:
Քերիի փոփոխություն. Քսուքը 1-2 րոպե ներկվում է ժանտամանուշակի սպիրտային լուծույթով, 1-2 րոպե մշակվում է յոդի լուծույթով, ապա 30-40 վայրկյան էթանոլով։ Լվացվեց։ Բազմիցս 1 րոպե մշակվել է յոդի լուծույթով, լվանալ, 1-2 րոպե ներկվել ֆուչսինով կամ սաֆրանինի խառնուրդով փայլուն կանաչով։
Բուրկի փոփոխությունը. Լուծում A. 1% բյուրեղյա մանուշակագույն լուծույթ թորած ջրի մեջ:
Մորդանտ՝ բյուրեղային յոդ՝ 1 գ, կալիումի յոդիդ՝ 2 գ, թորած ջուր՝ 100 մլ:
Գունաթափող լուծիչ՝ էթիլային եթեր՝ 1 հատ, ացետոն՝ 3 հատ։
Լրացուցիչ ներկ՝ սաֆրանինի 2% լուծույթ թորած ջրի մեջ:
Մեթոդաբանությունը. Ջեռուցմամբ ամրացված քսուքը ընկղմվում է Ա լուծույթի մեջ։ Քսուքը ողողում են յոդի մուրդանտի մեջ և 2 րոպե ծածկում թարմ քսուքով։ Լվանալ ջրով, այնուհետև սպիտակեցնող լուծիչով, մինչև արտահոսող լուծիչը ներկից ազատվի: Չորացնելուց հետո ներկել լրացուցիչ ներկով 5-10 վայրկյան, լվանալ ջրով և մանրադիտակով։
Հուկերի ձևափոխում
Լուծում A՝ բյուրեղյա մանուշակ՝ 2 գ, 95% էթանոլ՝ 20 մլ։
Բ լուծույթ՝ ամոնիումի օքսալատ՝ 0,8 գ, թորած ջուր՝ 80 մլ։
A և B լուծույթները պատրաստված ծավալներով խառնվում են մուգ սրվակի մեջ և թողնում սենյակային ջերմաստիճանում 24 ժամ:
Լուծում Բ՝ սաֆրանինի 2,5% լուծույթ (96% էթանոլում) - 10 մլ, թորած ջուր՝ 100 մլ։
Մեթոդաբանությունը. Տաքացման միջոցով ամրացված քսուքը 1 րոպե ընկղմվում է A և B լուծույթների խառնուրդի մեջ, որից հետո պատրաստուկը լվանում են ջրով և 1 րոպե մշակում Լուգոլի լուծույթով, այնուհետև նորից լվանում ջրով և չորացնում; 30 վրկ քսում են 96% էթանոլ, պատրաստուկը մանրակրկիտ լվանում են ջրով, չորացնում, 10 վայրկյան տեղադրում B լուծույթում, մի փոքր լվանում ջրով, չորացնում, մանրադիտակով զննում։
Կալիումի հիդրօքսիդի թեստ՝ բակտերիալ գրամի ներկման արդյունքները վերահսկելու համար: Եթե Gram բիծը պարզ չէ, այս մեթոդը թույլ է տալիս կատարելագործել արդյունքը:
Թեստի կարգավորում: 3% KOH լուծույթի 1-2 կաթիլները կիրառվում են ապակե սլայդի վրա: Ագարի մշակույթը մանրէաբանական օղակով ներմուծվում է KOH, խառնվում, այնուհետև օղակը բարձրացվում է վերև: Եթե մշակույթը «թելի» տեսքով հասնում է հանգույցին` գրամ-բացասական, այս երեւույթի բացակայության դեպքում` գրամ դրական բակտերիա:
Թթվային արագ բակտերիաների ներկման մեթոդներ
Ziehl-Nielsen գունավորում. Պատրաստվում է կարբոլ ֆուքսին ներկ՝ հիմնական ֆուքսին՝ 0,3 գ, 95% էթանոլ՝ 10 մլ, ֆենոլ (բյուրեղները հալվում են տաքացնելիս)՝ 5 մլ, թորած ջուր՝ 95 մլ։
Հիմնական ֆուքսինը լուծվում է էթանոլի մեջ, ավելացնում են ջրում լուծված ֆենոլը, խառնում, 5-7 օր պահում սենյակային ջերմաստիճանում; Օգտագործելուց առաջ զտված է ֆիլտր թղթի միջով:
Գունաթափող լուծիչ (հիդրոքլորային սպիրտ)՝ էթանոլ 95% – 97 մլ, խտացված աղաթթու՝ 3 մլ։ Լրացուցիչ ներկ՝ մեթիլեն կապույտ՝ 0,3 գ, թորած ջուր՝ 100 մլ։
Մեթոդաբանությունը. Կարբոլ-ֆուքսին ներկը լցնում են տաքացնելով ամրացված քսուքի վրա, տաքացնում են մինչև գոլորշիները դուրս գան (բայց չեն եռում): 5 րոպե հետո լվացվեց ջրով։ Այնուհետև քսուքը 30-50 վայրկյան մշակվում է սպիտակեցնող լուծիչով, լվանում ջրով, որից հետո քսուքի վրա բակտերիաների թաղանթը դառնում է գունատ վարդագույն։
Քսուքը 3-5 րոպե ներկվում է լրացուցիչ ներկով (մեթիլեն կապույտ և այլն), լվանում ջրով և չորանում։
Թթվապահ միկրոօրգանիզմները քսուքի մեջ կարմիր են, մյուսները՝ կապույտ։
Auramine բիծ. Լուծում A՝ աուրամին - 1,5 գ, ռոդամին B - 0,75 գ, գլիցերին - 75 մլ, հալված ֆենոլ - 10 մլ, թորած ջուր - 50 մլ:
Ներկանյութեր՝ ֆենոլը և գլիցերինը լուծվում են 25-30 մլ ջրի մեջ, մնացած ծավալը ավելացնում են և զտում ապակյա բուրդով։
Լուծում B՝ 70% էթանոլ՝ 99,5 մլ, խտացված աղաթթու՝ 0,5 մլ։
Լուծում B՝ կալիումի պերմանգանատ՝ 0,5 գ, թորած ջուր՝ 99,5 մլ։
Մեթոդաբանությունը. Այրիչի կրակի վրա ամրացված քսուքը 15 րոպե ներկվում է A լուծույթով սենյակային ջերմաստիճանում կամ 37-38°C-ում: Լվանում են հոսող ջրի տակ մինչև գունաթափվելը: Բ լուծույթը 3-5 րոպե լցնում են քսուքի վրա, լվանում և ներկում ևս 2-4 րոպե C լուծույթով: Լվանում, չորացնում, մանրադիտակով լյումինեսցենտային մանրադիտակի մեջ ընկղմման տակ (հուզիչ լույսի զտիչ BG-12, արգելափակող OG-1): .
Թթվային արագ բակտերիաներ դեղին-նարնջագույն մուգ ֆոնի վրա:
Fly գունավորում. Դեղը դիմանում է 24 ժամ մեթիլ մանուշակի լուծույթում (10 մլ մեթիլ մանուշակի հագեցած ալկոհոլային լուծույթ, 100 մլ կարբոլաթթվի 2% ջրային լուծույթ): Լուգոլի լուծույթը կիրառվում է 1-2 րոպե, ապա 1 րոպեի ընթացքում կիրառվում է 5% լուծույթ ազոտական թթուեւ 10 վայրկյան 3% լուծույթ աղաթթվի. Այնուհետև էթանոլի և ացետոնի խառնուրդը (1:1) կիրառվում է պատրաստուկի վրա, մինչև ներկը դադարի դուրս գալ, լվանալ ջրով, չորացնել և մանրադիտակով զննել:
Սպորների ներկման մեթոդներ
Աուեսսկու մեթոդը. Օդով չորացրած առանց ամրացման քսուքը 2-3 րոպե մշակվում է (տաքացնելիս) 0,5% ծծմբաթթվով, լվանում և ամրացնում կրակի վրա։ Տաքացնելիս 7-8 րոպե ներկվում է Ziel's carbol fuchsin-ով, ներկը քամվում է։ Քսուքը մշակվում է 5-7 վայրկյան 5% ծծմբաթթվի լուծույթով, լվանում և ներկում մեթիլեն կապույտով 4-5 րոպե։ Մանրադիտակի տակ բջջի վեգետատիվ մասը կապույտ է, սպորը՝ կարմիր։
Մելլերի մեթոդը. Բոցի վրա ամրացված քսուքը 2-3 րոպե փորագրվում է 5% քրոմաթթվով, լվանում և ներկվում Ziel's carbolic fuchsin-ով: Սպիտակեցրեք և ներկեք նույն ձևով, ինչ Aujeszky մեթոդով:
Պեշկովի մեթոդ. Ֆիքսված քսուքը ներկվում է մինչև եռացող մեթիլեն կապույտով: Ներկը լվանում և ներկվում է չեզոքության 1% ջրային լուծույթով 10 վայրկյան: Լվացված, չորացրած: Սպորները կապույտ են, վեգետատիվ բջիջները՝ կարմիր։
Շեֆեր-Ֆուլտոն մեթոդ. Մալաքիտի կանաչի 0,5% ջրային լուծույթը լցնում են տաքացնելով ամրացված քսուքի վրա՝ ծածկված զտիչ թղթով։ Քսուքը դրվում է 5 րոպե եռացող ջրի վրա։ Լվացվեցին և 30 վրկ ներկվեցին սաֆրանինի 2% ջրային լուծույթով: Լվացված, չորացրած: Սպորները վառ կանաչ են, վեգետատիվ բջիջները՝ կարմիր-դարչնագույն։
Տրուխիլոյի մեթոդ. Քսուքը ամրացվում է այրիչի կրակի վրա, ծածկված մալաքիտ կանաչի հագեցած ջրային լուծույթով, տաքացվում է մինչև գոլորշի առաջանալը և ներկվում 3 րոպե: Ներկը լվանում են ջրով և քսուքը ներկում են հիմնական ֆուքսինի 0,25% ջրային լուծույթով 1 րոպե: Լվացված, չորացրած: Սպորները կանաչ են, վեգետատիվ բջիջները՝ կարմիր։
Դորների մեթոդ. Այրիչի կրակի վրա ամրացված քսուքը տաքացնելիս 5-10 րոպե ներկվում է կարբոլ ֆուքսինով, 1 րոպեով գունաթափվում աղաթթվի սպիրտով (3 մլ խտացված աղաթթու և 97 մլ 96% էթանոլ): Դեղը լվանում են, չորացնում ֆիլտրի թղթով և լցնում քսուքի վրա նիգրոզինի 10% լուծույթի բարակ շերտով 0,5% ֆորմալինի լուծույթում: Առանց լվանալու, քսուքը չորացնում են օդում և մանրադիտակով: Սպորները կարմիր են, վեգետատիվ բջիջները՝ անգույն՝ սև ֆոնի վրա։
Վալդմանի մեթոդը. Lefleur blue (ալկալային) կիրառվում է ֆիքսված պատրաստուկի վրա և տաքացվում է մինչև եռալ, ապա սառչում և լվանում ջրով: Ներկեք 1% չեզոք լուծույթով 30 վայրկյան: Մանրադիտակային պատկերը՝ սպորները՝ կապույտ, վեգետատիվ բջիջները՝ կարմիր։
Օժեշկա մեթոդ. HC1-ի 0,5% լուծույթը լցնում են չամրացված քսուքի վրա և տաքացնում 1-2 րոպե: Թթուն քամում են, պատրաստուկը լվանում ջրով, չորացնում, ամրացնում կրակի վրա և ներկում Զիել-Նիլսենի մեթոդով։ Մանրադիտակային պատկերը՝ սպորները՝ կարմիր, վեգետատիվ բջիջները՝ կապույտ։
Պարկուճի ներկման մեթոդներ
Ռոմանովսկի-Գիմսա մեթոդ. Էթանոլի կամ Նիկիֆորովի հեղուկի մեջ ամրացված քսուքը տեղադրվում է Ռոմանովսկի-Գիեմսա ներկի մեջ (15-20 կաթիլ ներկ 10 մլ թորած ջրի դիմաց) 15-20 րոպե: Լվացված, չորացրած: Բակտերիաների մարմինը ներկված է մուգ կապույտ գույնով, պարկուճները՝ վարդագույն։
Օլտի մեթոդը. Այրիչի կրակի վրա ամրացված քսուքները 1-3 րոպե ներկվում են սաֆրանինի 2% ջրային լուծույթով (սաֆրանինը լուծվում է. տաք ջուր, զտել, կիրառել թարմ պատրաստված լուծույթ): Բակտերիաների մարմինը շագանակագույն ներկված է, պարկուճը՝ գունատ դեղին։
Ռեբիգերի մեթոդը. Չֆիքսված քսուքը 15-20 վայրկյան ներկվում է ֆորմալինի մեջ ժանտամանուշակի լուծույթով (15-20 գ ժանտամանուշակը լուծվում է 100 մլ 40% ֆորմալինի մեջ, նստեցնում, ֆիլտրում), լվանում ջրով։ Բակտերիաների մարմինը մուգ մանուշակագույն է, պարկուճը՝ կարմրավուն մանուշակագույն։
Անտոնի ճանապարհը. Քսուքը 2 րոպե ներկվում է բյուրեղյա մանուշակի 1% ջրային լուծույթով։ Ներկը լվանում են պղնձի սուլֆատի 20% ջրային լուծույթով (CuSO 4 · 5H 2 O), ավելցուկային լուծույթը թափահարում և քսուքը չորացնում են ֆիլտր թղթով առանց ջրով ողողելու։ Մանրէներ՝ մուգ մանուշակագույն, պարկուճ՝ բաց կապույտ։
Ջինի մեթոդ. Թորած ջրով 1:3 նոսրացված սև թանաքի կաթիլը դրվում է ապակե սլայդի վրա և ցենտրիֆուգվում 3000 պտ/րոպում 15 րոպե: Դիակի կաթիլում մշակույթը կախում են օղակով և պատրաստվում քսում (նման է արյան քսուկին): Չորացնել, ամրացնել այրիչի բոցի վրա, ներկել Ziel's carbol fuchsin-ով, նոսրացված 1:3: Բակտերիալ մարմինները կարմիր են: Մուգ ֆոնի վրա գտնվող պարկուճը տեսանելի է բակտերիաների շուրջ լուսապսակի տեսքով:
Միխինի մեթոդը. Քսուքը ներկվում է 3-5 րոպե Leffleur's blue-ով (հարմար է միայն ներկը, որը պահպանվել է առնվազն 20-30 օր, քանի որ պահպանման ընթացքում դրա մեջ ձևավորվում է լազուր՝ տալով մետախրոմատիզմ): Բակտերիաների մարմինները կապույտ են, պարկուճը՝ վարդագույն։
Giss մեթոդ. Սովորական տավարի կամ ձիու արյան շիճուկի մի կաթիլ (կամ մի կաթիլ յուղազերծված կաթ) կիրառվում է ապակե սլայդի վրա, մշակույթը ներմուծվում է դրա մեջ օղակով, կասեցվում և պատրաստվում է քսուք: Բակտերիալ կախոցի թաղանթը չորացվում է օդում, ամրացվում այրիչի կրակի վրա և ներկվում 0,1% ջրային բյուրեղյա մանուշակով 1 րոպե: Քսուքը լվանում են պղնձի սուլֆատի 20% ջրային լուծույթով, չորացնում ֆիլտր թղթով։ Կեղտոտված պարկուճները գունատ կապույտ են, բակտերիաների մարմինները մուգ մանուշակագույն են:
Դուգիդի մեթոդը. Սև թանաքի կաթիլը դրվում է ապակե սլայդի վրա, և մշակույթը կասեցվում է դրա մեջ: Կաթիլը ծածկված է կափարիչի ապակիով, ավելորդ թանաքը հեռացվում է ֆիլտր թղթով։ Դարչնագույն-սև ֆոնի վրա տեսանելի են լույս բեկող բակտերիաները, որոնք շրջապատված են թափանցիկ գոտու տեսքով պարկուճով։
Ջոնի ճանապարհը: Թորած ջրով 1:2-1:4 նոսրացված թանաքի կաթիլը դրվում է ապակե սլայդի մակերեսի մի ծայրին: Բակտերիաները կասեցվում են կաթիլով և պատրաստվում է քսուք (ինչպես արյան քսուք): Պատրաստուկը չորացնում են օդում, ամրացնում այրիչի կրակի վրա և 2 րոպե ներկում գենտինի մանուշակի 2% ջրային լուծույթով կամ ֆուքսինի 1% լուծույթով։ Լվանալ ջրով, 8-10 վայրկյան մշակվել քացախաթթվի 2%-անոց լուծույթով և նորից լվանալ։ Կեղտոտման մեջ ինտենսիվ ներկված բակտերիաների շուրջ տեսանելի է չներկված պարկուճ:
դրոշակի ներկման մեթոդ
Դրոշակների առկայությունը բակտերիաներում դատվում է անուղղակի նշաններով, օրինակ՝ «փշրված կաթիլ», «կախված կաթիլ» պատրաստուկներում բջիջների շարժունակությամբ, ինչպես նաև կիսահեղուկի մեջ փորձնական մշակույթի աճի բնույթով։ ագար (0,15-0,3%): Վերջին դեպքում փորձնական կուլտուրան պատվաստում են ենթաստամոքսային գեղձի ծակով և ինկուբացնում 18-24 ժամ։ Աճման ընթացքում շարժվող բակտերիաները ներգաղթում են ներարկման գծից՝ առաջացնելով միջավայրի պղտորություն, մինչդեռ անշարժ բակտերիաները աճում են միայն ներարկման երկայնքով։
Որոշ դեպքերում կկիրառվեն ներկման մեթոդներ, որոնք թույլ են տալիս ուղղակիորեն դիտարկել դրոշակները
Գունավորման բոլոր մեթոդների համար սլայդները պետք է պատրաստվեն երիտասարդ ագարի մշակույթներից (14-20 ժամ աճ): Պեպտոնի 0,5% ջրային լուծույթը ավելացվում է 30-40 րոպեով թեք ագարի վրա կուլտուրա ունեցող խողովակներին: Հեղուկը նստում է, դրա մեջ անցած մանրէների նստվածքի համար ցենտրիֆուգ են անում։ Նստվածքը լցվում է աղի լուծույթով և նորից ցենտրիֆուգվում: Դրոշակների կորուստը կանխելու համար լվացված նստվածքը նորից կախում են 10% ֆորմալինի լուծույթում՝ մի փոքր պղտոր կախոց ստանալու համար:
Flagella ներկված osmic թթուով: Մաքուր յուղազերծված առարկայի կամ ժամացույցի ապակու վրա բակտերիաների կախույթի մի կաթիլը խառնվում է օսմաթթվի 2% լուծույթի մի կաթիլով: Ստացված խառնուրդի կաթիլը կիրառվում է մաքուր, առանց ճարպի ապակե սլայդի վրա՝ Pasteur pipette-ի բարակ մազանոթով: Չորացրեք օդով և ամրացրեք կրակի վրա (խուսափեք գերտաքացումից):
Մի քանի օրվա ընթացքում պատրաստած դեղը լցնում են ֆիքսված պատրաստուկի վրա (1 մլ ֆուքսինի հագեցած ալկոհոլային լուծույթ, 10 մլ թանինի 20% ջրային լուծույթ և 5,5 մլ երկաթի սուլֆատի ամոնիակի հագեցած ջրային լուծույթ): 15 րոպե հետո մորդանը լվանում են ջրով, 4 րոպե ներկում ֆուքսինով, լվանում և մանրադիտակով:
Դրոշակի գունավորում արծաթով։ Կախոցքից պատրաստում են բարակ քսուք, չորացնում և 2-3 րոպե ամրացնում օսմաթթվի 2% լուծույթով։ Դեղը լվանում են 2-3 վրկ ընկղմմամբ արծաթի նիտրատի 0,5% ջրային լուծույթի մեջ և առանց լվանալու 2-3 վրկ թաթախում են թթու վարունգի մեջ (պիրոգալոլ կամ գալիկաթթու՝ 2,0 գ, տանին՝ 1,2 գ, նատրիումի ացետատ։ - 4,0 գ, թորած ջուր - 150 մլ): Այն հանում են մորդանից և նորից թաթախում արծաթի նիտրատի լուծույթի մեջ՝ պահելով մինչև պատրաստուկը սևանա։ Լվացքից հետո կատարվում է մանրադիտակ:
Դրոշակների գունավորումն ըստ Պլիմերի. Ներկը պատրաստվում է. տանին - 5,0 գ, ցինկ քլորիդ - 5,0 գ, ալյումինի քլորիդ - 10,0 գ, ֆուքսինի փոշի - թվարկված բաղադրիչների նմուշի 0,75 գ աղալը հավանգի մեջ, աստիճանաբար ավելացնելով 40 մլ 60% էթանոլ մինչև ամբողջովին լուծարվի: . Օգտագործելուց առաջ ներկը նոսրացնում են ջրով (1։5)։
Զտիչ թղթի շերտը դրվում է չորացած բարակ քսուքի վրա և լցնում պատրաստված ներկով: 2 րոպե անց ներկը լվանում են ջրով և լրացուցիչ ներկվում Ziehl carbol fuchsin-ով։ Բակտերիաները և դրոշակները կարմիր են:
Դրոշակների գունավորումն ըստ Բենիչետտիի. Նախօրոք պատրաստվում է 3 լուծում. Լուծում 1՝ ցինկի սուլֆատ՝ 0,5 գ, դաբաղ՝ 8,0 գ, թորած ջուր՝ 50 մլ։ Լուծում 2՝ կալիումի շիբի հագեցած լուծույթ: Լուծում 3. Գենտյան մանուշակի կամ բյուրեղյա մանուշակի հագեցած լուծույթ: Օգտագործելուց առաջ լուծույթները խառնում են (5։5։3)։ Լուծույթների խառնուրդը լցնում են չորացրած քսուքի վրա և տաքացնում մինչև գոլորշու առաջանալը։ Լվացեք 3 րոպե հետո և մանրադիտակով: Մանուշակագույն-սև դրոշակ:
Գունավորում ըստ Վալենտիի. Քսուքը տաքացնելիս 3 րոպե մշակվում է 20% տանինային լուծույթով, լվացվում, տաքացնելիս 10 րոպե ներկվում է կարբոլիկ ֆուքսինով։ Լվացված, մանրադիտակային: Բակտերիաները և դրոշակները կարմիր են:
Մոխրագույն գունավորում. Լուծում A՝ տաննիկ 20% ջրային թթու՝ 2 մլ, կալիումի շիբի հագեցած ջրային լուծույթ՝ 5 մլ, սնդիկի քլորիդ, հագեցած ջրային լուծույթ՝ 2 մլ, հիմնային ֆուքսին 3% 96% էթանոլում՝ 0,4 մլ: Ներկանյութը (magenta) ավելացնում են մնացած բաղադրիչներին անմիջապես օգտագործելուց առաջ, իսկ դրա լուծարումից հետո ստացված լուծույթը զտվում է ֆիլտր թղթի միջով։ Լուծում B՝ Ziel's carbolic fuchsin (հիմնական ֆուքսին 3% 95% էթանոլում՝ 10 մլ, ֆենոլ՝ 5 մլ, թորած ջուր՝ 95 մլ)։
Մեթոդաբանությունը. Բակտերիաների մի կաթիլ (կասեցում) ֆորմալինի մեջ կիրառվում է ապակու վրա և թողնում է ցամաքեցնել: Չոր օդով: Տեղադրում են զտիչ թղթի շերտ և 4-6 րոպե լցնում Ա լուծույթը, լվանում ջրով և ֆիլտրի թղթի միջով 3 րոպե ներկում B լուծույթով, լվանում, չորացնում, մանրադիտակով: Դրոշակները և բակտերիաները կարմիր են:
Գունավորում ըստ Lifeson-ի. Պատրաստել 3 լուծում. Լուծում 1. 1,5% նատրիումի քլորիդի լուծույթ թորած ջրի մեջ: Լուծում 2. 3% tannic թթվի լուծույթ թորած ջրի մեջ: Լուծում 3՝ քացախաթթու ռոզանիլին՝ 0,9 գ, աղաթթու պրոզանիլին՝ 0,3 գ, 96% էթանոլ՝ 100 մլ։ 1-ին և 2-րդ լուծույթները հավասարապես խառնում են և հետո այս խառնուրդից 2 հատոր լցնում են 1 հատ լուծույթի մեջ 3. Խառնուրդը պահվում է սառնարանում մինչև 3 ամիս։
Մեթոդաբանությունը. Մի կաթիլ լուծույթը կիրառվում է լավ յուղազերծված ապակու վրա և թույլ է տալիս ցամաքեցնել: Չորացնելուց հետո ապակու վրա մատիտով ուրվագծվում են բակտերիաների թաղանթի սահմանները, 7-15 րոպե տարածքը լցնում են ներկով։ Դիմացե՛ք այնքան, մինչև ներկի մակերեսը ոսկեգույն երանգ ստանա, և բակտերիաների թաղանթը չծածկվի նստվածքով։ Լվացված, չորացրած: Բակտերիաները և դրոշակները կարմիր են:
Բջջային պատերի ներկման մեթոդներ
Բջջային պատերի ներկումը ախտորոշիչ նշանակություն ունի միկոպլազման բակտերիաներից տարբերելու համար:
Գուտշտեյնի մեթոդ. Դեղը 1-2 ժամ ֆիքսվում է Բուենի հեղուկում, 2-3 րոպե պահում տանինի 5-10% ջրային լուծույթում, ողողում ջրով և մանրադիտակով մանրադիտակով մանրադիտակով անցնում բյուրեղյա մանուշակի 0,01% ջրային լուծույթի մեջ։
Պեշկովի մեթոդ. Դեղը 15 րոպե ամրացվում է հետևյալ բաղադրության հեղուկի մեջ՝ էթանոլ 90% - 60 մլ, քլորոֆորմ - 30 մլ, քացախային էություն - 10 մլ: Այնուհետև պատրաստուկը 2-5 րոպե պահում են դաբաղի 10% ջրային լուծույթում, լվանում ջրով, 30-60 վայրկյան ներկում Pfeiffer magenta-ով և առանց խառնելու չորացնում և մանրադիտակով մանրադիտակով զտում։
Մեթոդ) Ռոբինով. Ուսումնասիրված միկրոօրգանիզմը աճեցվում է ագարի միջավայրի վրա՝ Պետրի ափսեի մեջ, կտրում են ագարի բլոկը և իր մակերեսով դրվում ծածկապատման վրա, որը գիշերը տեղադրվում է Բուենի հեղուկի մեջ: Հաջորդ օրը ագարը հանում են, ապակին երեսով ներքև դնում տաննիկ թթվի 5-10% ջրային լուծույթի մակերեսին 20-30 րոպե։ Այնուհետև պատրաստուկը լվանում են ջրով, բակտերիաների բջիջներով ծածկված բաժակը 5-10 վայրկյանով դրվում է բյուրեղյա մանուշակի 0,02% ջրային լուծույթի վրա: Արդյունքում, բջջային թաղանթները և միջնորմները ներկվում են մուգ կապույտ կամ սև գույնով, իսկ ցիտոպլազմը մնում է անբիծ:
Ցիտոպլազմային ներդիրների ներկման մեթոդներ
Միկրոօրգանիզմների հայտնաբերման ժամանակ առանձնահատուկ նշանակություն ունեն կառուցողական նյութափոխանակության տեսակն ու ուղղությունը արտացոլող բջիջներում ներդիրների առկայության մասին տվյալները: Ցիտոպլազմային ներդիրները ներառում են պոլի-β-հիդրօքսիբուտիրաթթու, մետախրոմատինի (վոլուտին) հատիկներ և պոլիսախարիդներ։
Պոլի-β-հիդրօքսիբուտիրաթթուն բետա-հիդրօքսիբուտիրաթթվի պոլիեսթեր է, որը կուտակվում է բջիջների ցիտոպլազմայում 200-800 նմ չափի կլոր կամ օվալաձև հատիկների տեսքով։ Մետախրոմատինը պոլիֆոսֆատներ է, իսկ պոլիսախարիդները՝ գլյուկաններ, որոնք կազմված են D-գլյուկոզայից՝ մինչև 200 նմ չափսերով։ Թվարկված ընդգրկումները գործում են որպես բջջային նյութերի մի տեսակ պաշարներ և կարող են հայտնաբերվել ներկման հատուկ մեթոդներով:
Պոլի-բետա-հիդրօքսիբուտիրաթթվի հայտնաբերում
Այրիչի կրակի վրա ամրացված քսուքը ներկվում է 5-15 րոպե Սուդանի սև B-ի 0,3% լուծույթով էթիլեն գլիկոլում: Ներկը քամում են և առանց ջրով լվանալու օդում չորացնելուց հետո ողողում են քսիլենով։ Քսուքը չորացնելուց հետո այն 5-10 վայրկյանով իջեցնում են սաֆրանինի 0,5% ջրային լուծույթի մեջ։ Լվացվեց ջրով, չորացրեց և մանրադիտակով: Պոլի-β-հիդրօքսիբուտիրաթթվի ընդգրկումները տեսանելի են ցիտոպլազմայի վարդագույն ֆոնի վրա՝ որպես սև-կապույտ գոյացություններ։
Մետախրոմատինի (վոլուտինի) հայտնաբերում
Նայսերի մեթոդ. Պատրաստել 4 լուծում. Լուծում A՝ մեթիլեն կապույտ՝ 0,1 գ, 95% էթանոլ՝ 2 մլ, սառցադաշտային քացախաթթու՝ 6 մլ, թորած ջուր՝ 100 մլ։ Բ լուծույթ՝ բյուրեղյա մանուշակ՝ 1 գ, էթանոլ 95%՝ 100 մլ, թորած ջուր՝ 300 մլ։ Բ լուծույթ բյուրեղային յոդ՝ 1 գ, կալիումի յոդիդ՝ 2,0 գ, թորած ջուր՝ 300 մլ։ Լուծում Դ՝ քրիզոիդին՝ 1 գ, թորած ջուր՝ 300 մլ (քրիզոիդինը լուծվում է տաք ջրում)։ A և B լուծույթի խառնուրդը 2:1 հարաբերակցությամբ լցնում են այրիչի բոցի վերևում ամրացված քսուքի վրա 1 րոպե (խառնուրդը պատրաստվում է ներկելուց առաջ): Ներկը քամում են, 1 րոպե մշակում B լուծույթով (Լուգոլի լուծույթ) և լվանում ջրով, չորացնում, մանրադիտակով: Բակտերիաների բջիջները բաց դեղին են, վոլուտինի հատիկները՝ մուգ կապույտ։
Ռասկինի մեթոդը. Պատրաստեք ներկը հետևյալ բաղադրությամբ՝ Ցիլյա կարբոլիկ ֆուչսին - 4 մլ, հագեցած ալկոհոլային լուծույթ մեթիլեն կապույտ- 4 մլ, սառցադաշտային քացախաթթու - 5 մլ, էթանոլ 96% - 95 մլ, թորած ջուր - 92 մլ: Ներկանյութը լցնում են այրիչի կրակի վերևում ամրացված քսուքի վրա, տաքացնում են այրիչի վրա մինչև ալկոհոլը այրվի, լվանում ջրով, չորացնում և մանրադիտակով զննում: Բակտերիաների բջիջները ներկված են բաց կարմիր գույնով, վոլուտինի հատիկները՝ սև և կապույտ:
Պոլիսաքարիդների հայտնաբերում
Ներկված Շիֆի ռեագենտով: Պատրաստել 4 լուծում. Լուծում A (պերիոդատի լուծույթ) 4% յոդաթթվի լուծույթ 20 մլ, 0,2 մ ջրային նատրիումի ացետատի լուծույթ 10 մլ, 96% էթանոլ 70 մլ: Լուծումը զգայուն է լույսի նկատմամբ, ուստի այն պետք է մթության մեջ պահել մուգ շշի մեջ։
Տարբերակել գունազարդման պարզ և բարդ մեթոդները:
Պարզ ներկման մեթոդներկոչվում է նախնական ներկում
paraty որեւէ մեկ ներկ. Որոշ միկրոօրգանիզմներ (սպիրոխետներ), որոնք դժվար է հայտնաբերել դրական բծերով, հեշտությամբ հայտնաբերվում են, երբ ներկված են բացասական բծերով:
Խոհարարության տեխնիկա դեղ հետեւյալն է. Ֆիքսված պատրաստուկը տեղադրվում է զուգահեռ ապակե սալիկների (կամուրջի) վրա, որոնք ընկած են կյուվետի վերևում: Ֆուքսինի կամ մեթիլեն կապույտի 1% ջրային լուծույթը կիրառվում է քսուքի վրա՝ օգտագործելով կաթիլային 1-2 րոպե: Համոզվեք, որ ներկի լուծույթը ներկման ժամանակ չի չորանում: Գունավորումն ավարտելուց հետո ներկը քամվում է: Դեղը լվանում են ջրով, մինչև հոսող ջուրը դառնում է անգույն: Այնուհետեւ դեղը չորանում է: Դա անելու համար պատրաստուկի ստորին կողմը քսում են ֆիլտրի թղթով, իսկ վերին կողմը զգուշորեն չորացնում են կողքերից՝ առանց քսելու քսելու: Դեղը վերջապես չորանում է օդում կամ ալկոհոլային լամպի բոցից բարձր: Ավելի մաքուր պատրաստուկներ ստանալու համար ներկը կիրառվում է ֆիլտրի թղթով ծածկված քսուքի վրա։ Գունավորման մեթոդը Սինևայի մոդիֆիկացիայի մեջ թույլ է տալիս ներկային լուծույթի փոխարեն օգտագործել դրանով նախապես ներծծված ֆիլտրի թուղթ։ Ճիշտ ներկված և լավ լվացված պատրաստման դեպքում տեսողական դաշտը պայծառ ու մաքուր է, միայն բջիջները ներկված են: Մանրադիտակային պատրաստուկներ ընկղմման համակարգով.
ժամը բարդ (տարբերակիչ) մեթոդներՆույն պատրաստուկի վրա գունավորումը ազդում է մի քանի գունազարդման նյութերի վրա, որոնցից մեկը կոչվում է հիմնական, մյուսները `լրացուցիչ: Ներկանյութերից բացի օգտագործվում են տարբեր սպիտակեցնող նյութեր՝ սպիրտներ, թթուներ, ացետոն և այլն: Գունավորման բարդ մեթոդների կիրառմամբ բացահայտվում են միկրոօրգանիզմների բջիջների բջջաբանական առանձնահատկությունները (բջջային կառուցվածքներ, ներդիրներ և այլն):
Գրամ բիծգունազարդման բարդ մեթոդներից առավել բազմակողմանի է: Գունավորումը բակտերիաների տարբերակման հիմքն է և արտացոլում է բջիջների կարողությունը՝ ընկալելու և պահպանելու բջջի ներսում գենտինայի մանուշակի և յոդի գունազարդման համալիրը կամ կորցնելու այն ալկոհոլով բուժումից հետո: Համապատասխանաբար, գրամ դրական ( բացիլ, Կլոստրիդիում, Ստաֆիլոկոկ, Streptococcus, Lactobacillus, Սարկինա, և այլն.) և գրամ բացասական (Էշերիխիա, Pseudomonas, Էրվինիա, Նեյսերիա, Ռիկեցիա, և այլն.) ձևերը.
Գրամ ներկող քսուքները պետք է պատրաստվեն երիտասարդ, ակտիվորեն աճող (սովորաբար մեկ օրական) մշակույթներից՝ հուսալի արդյունքներ ստանալու համար, քանի որ հին մշակույթների բջիջները երբեմն տալիս են անկայուն գրամ ռեակցիա: Գրամ-բացասական բակտերիաները կարող են հայտնվել որպես Գրամ-դրական, եթե բակտերիալ թաղանթը (քսուքը) չափազանց հաստ է, և ալկոհոլի գունաթափումը ամբողջական չէ: Գրամ-դրական բակտերիաները կարող են հայտնվել որպես Գրամ-բացասական, եթե քսուքը գունաթափվում է ալկոհոլով:
Մեթոդի էություն . Գրամ-դրական միկրոօրգանիզմների բջջի ցիտոպլազմայի մակերեսին առկա է սպիտակուցի և մագնեզիումի ռիբոնուկլեատի համալիր, որը բացակայում է գրամ-բացասական բակտերիաներում։ Գրամ-դրական բջիջների մակերևույթի վրա գրամ ներկելը ձևավորում է սպիտակուցի, մագնեզիումի ռիբոնուկլեատի, գենտինի մանուշակի և յոդի ուժեղ համալիր, որը չի քայքայվում ալկոհոլի բուժման արդյունքում: Նման բակտերիաները մնում են կապույտ ներկված: մանուշակագույն. Գրամ-բացասական բակտերիաները ներկը պահպանելու հատկություն չունեն և սպիրտով մշակվելիս գունաթափվում են: Նրանց նույնականացնելու համար պատրաստուկը ներկվում է ֆուկսինով։ Գրամ-բացասական բակտերիաները կարմիր գույն են ստանում:
Տարբերակված գրամ ներկման փուլերը.
Ֆիքսված քսուքը ծածկված է ֆիլտրի թղթի կտորով (1,5 x 1,5 սմ) և դրա վրա կիրառվում է գենտյան մանուշակի կամ բյուրեղյա մանուշակի կարբոլիկ լուծույթ մինչև ամբողջովին թրջվելը (ավելի հաճախ օգտագործվում է Sinev մոդիֆիկացիան): Գունավորումն իրականացվում է 1-2 րոպե:
Թուղթը հեռացնում են, ներկը քամում են և առանց պատրաստուկը ջրով լվանալու, Լուգոլի լուծույթը քսում են պատրաստուկի վրա 1-2 րոպե, մինչև քսուկը սևանա։
Լուգոլի լուծույթը քամվում է, ներկված քսուքը գունազրկվում է 96º էթիլային սպիրտով: Դրա համար դեղը 2-3 անգամ դրվում է ալկոհոլով բաժակի մեջ, մինչև մանուշակագույն հոսքերը դադարեն դուրս գալ (գունաթափման ժամանակը ոչ ավելի, քան 30 վրկ), կամ 2-4 կաթիլ սպիրտ լցնում են քսուքի վրա 30-ով: 45 վ.
Դեղը արագ լվանում է ջրով (ինչպես նկարագրված է վերևում):
Քսուքը լրացուցիչ ներկվում է 1-2 րոպե ֆուքսինի ջրային լուծույթով (Pfeiffer's fuchsin):
Ներկանյութը քամում են, պատրաստուկը լվանում ջրով, չորացնում ֆիլտր թղթով։
մանրադիտակով ընկղմված համակարգով:
Գրամ դրական բակտերիաները ներկում են մանուշակագույն, գրամ-բացասական բակտերիաները՝ վարդագույն:
Նուկլեոիդ.Դժվար է հայտնաբերել նուկլեոիդ բակտերիաների բջիջում լուսային մանրադիտակի միջոցով: Նուկլեոիդների ընտրովի ներկման համար ֆիքսված բջիջները նախապես մշակվում են ռիբոնուկլեազով կամ նոսր աղաթթվով՝ ռիբոսոմային ՌՆԹ-ի քայքայման համար: Հիմնական ներկով հետագա ներկումը հնարավորություն է տալիս նուկլեոիդը բացահայտել խիտ մարմինների տեսքով՝ անկանոն ուրվագծերով, որոնք տեղակայված են բջջի կենտրոնում կամ բևեռներում։
Թթվային արագ բակտերիաների Ziehl-Neelsen ներկումարտացոլում է միկոբակտերիաների և նոկարդիայի առանձնահատկությունները:
Մեթոդի սկզբունքը. Այս բակտերիաների թթվային դիմադրությունը կապված է բարձր պարունակությունլիպիդներ բջջային պատի մեջ. Թթվակայուն բակտերիաները ներկվում են Ziehl carbolic fuchsin-ով, երբ պատրաստուկը կարմիր տաքացվում է և պահպանում է այս գույնը ծծմբաթթվով սպիտակեցնելուց հետո: Ոչ թթվայնացնող բակտերիաները գունազերծվում են թթվով և այնուհետև ներկվում կապույտ մեթիլեն կապույտով:
Համար պարկուճների հայտնաբերումօգտագործելով տարբեր մեթոդներ, այդ թվում Բուրի մեթոդ և Բուրի Գուինսա . Մեթոդը հիմնված է բացասական հակադրության վրա: Քանի որ մանրէաբանական բջջի պարկուճը կամ մարմինը ներկանյութեր չի ընկալում, թանաքով ներկվում է միայն միկրոպատրաստուկի ֆոնը։ Պարկուճը տեսանելի է որպես անբիծ տարածք թանաքի քսուքի մուգ ֆոնի վրա: Ըստ Burri-Gins մեթոդի՝ մանրէաբանական բջիջների մարմինները լրացուցիչ ներկվում են կարմիր գույնով ֆուքսինով։
Համար դրոշակի ներկումԱռաջարկվել են մի քանի մեթոդներ, որոնց ընդհանուր քայլը պատրաստուկի փորագրումն է (սովորաբար տանինի, KAl(SO 4) 2 , HgCl 2 լուծույթներով) և հետագա գունավորումը (հաճախ ֆուքսինի կարբոլիկ լուծույթով): Դրա արդյունքում ներկը նստում է դրոշակի վրա, ինչի շնորհիվ միաժամանակ ձեռք է բերվում և՛ դրանց հաստության բարձրացում, և՛ թափանցիկության նվազում։ Դրոշակները ներկելու առաջարկվող մեթոդներից մեկն է Լեյֆսոնի մեթոդը. Պատրաստուկը մանրադիտակով է անցնում ընկղմման համակարգով։ Բակտերիաների բջիջները դառնում են կարմիր, դրոշակները ստանում են բջջից ձգվող հաստ թելերի ձև:
Հարցեր ինքնատիրապետման համար
1 Թվարկե՛ք միկրոօրգանիզմների հիմնական մորֆոլոգիական բջիջների տեսակները:
2 Նկարագրեք բակտերիալ բջջի սխեմատիկ կառուցվածքը:
3 Թվարկե՛ք միկրոօրգանիզմների ֆիքսված պատրաստուկների պատրաստման փուլերը, նկարագրե՛ք դրանք։
5 Դասակարգե՛ք մանրէաբանության մեջ օգտագործվող ներկանյութերը, բնութագրե՛ք դրանք։
Պրակտիկա 4
Թիրախ:ծանոթացում ֆիքսված պատրաստուկների պատրաստման եղանակներին, պարզ և բարդ ներկման մեթոդներին. ծանոթանալ տարբեր միկրոօրգանիզմների մորֆոլոգիայի և բջջաբանության հետ.
Նյութեր և սարքավորումներ.կենսաբանական մանրադիտակներ, մանրադիտակի սլայդներ և ծածկոցներ, սպիրտային լամպեր, բակտերիալ օղակներ, ընկղման յուղ, ստերիլ պիպետներ, պինցետներ, ֆիլտրի թուղթ, լուցկի, հիգիենիկ բամբակյա շվաբրեր, մարկերներ, ստերիլ Պետրի ամաններ, յուրաքանչյուր խմբի մեջ՝ 50 մլ կոլբայի ստերիլ ջրի մեջ, թորած ջուր լվացքի համար, լվացող մեքենաներ, կյուվետներ, կամուրջներ, պատրաստի ներկերի լուծույթների հավաքածու ստենդի մեջ, սպիրտ 96 0, պիպետներ, թուրմեր բնական նյութերից՝ միս, ոլոռ և այլն։
Src="http://present5.com/presentation/3/55298978_132451894.pdf-img/55298978_132451894.pdf-1.jpg" alt="(!LANG:> ԿԱԼՎԻ ՊԱՏՐԱՍՏՄԱՆ ՏԵԽՆԻԿԱ. ՆԿԱՐՈՒԹՅԱՆ ՄԵԹՈԴՆԵՐ.">!}
Src="http://present5.com/presentation/3/55298978_132451894.pdf-img/55298978_132451894.pdf-2.jpg" alt="(!LANG:> Անվտանգություն մանրէաբանական սենյակում (լաբորատորիայում) Կանոններ"> Техника безопасности в кабинете (лаборатории) микробиологии Правила работы со спиртовкой ØЗаправленную спиртовку хранят плотно закрытой притертым колпачком, чтобы предотвратить испарение спирта с фитиля. ØПри зажигании спиртовки нужно снять колпачок и поджечь фитиль спичкой. При этом нельзя сдвигать держатель фитиля, т. к. пламя проскочит внутрь спиртовки, что вызовет сильную вспышку и разбрызгивание горящего спирта. ØНельзя зажигать спиртовку от другой уже горящей спиртовки, т. к. при этом может сдвинуться держатель фитиля и вылиться спирт. ØНельзя дуть на пламя, чтобы погасить спиртовку. Для этого следует аккуратно закрыть спиртовку колпачком. ØНеобходимо следить за тем, чтобы спиртовка не перегревалась. Это ведет к испарению спирта и опасности взрыва. ØПри длительном нагревании лучше пользоваться двумя спиртовками. ØНе следует при работе наклонять голову над спиртовкой, т. к. при накоплении паров спирта под держателем фитиля может происходить самопроизвольное вспыхивание.!}
Src="http://present5.com/presentation/3/55298978_132451894.pdf-img/55298978_132451894.pdf-3.jpg" alt="(!LANG:> Կենդանի մշակույթի հետ աշխատելու կանոններ 1. Հիմնական բանը, երբ կենդանի մշակույթ ցանելը - սա է"> Правила работы с живой культурой. 1. Главное при посеве живой культуры – это оградить посев от посторонних микробов и распространение культуры микроорганизма с питательной среды или материала во внешнюю среду. 2. Работать следует быстро, но без резких движений, усиливающих колебания воздуха. 3. Во время посевов нельзя разговаривать, перемещаться по лаборатории. 4. Вся посуда и оборудование, подвергшиеся обсеменению во время работы с культурой, обрабатываются на месте путем фломбирования в пламени спиртовки или сброса в емкость с дез. средством. 5. По окончанию посевов рабочие поверхности столов подвергаются дезинфекции, обрабатываются руки. 6. Лабораторная посуда с посевами помещается в термостат: пробирки в штативе, а чашки Петри переворачивают дном вверх. Использование материалов и средств личной гигиены, раздражающих кожу рук, запрещается.!}
Src="http://present5.com/presentation/3/55298978_132451894.pdf-img/55298978_132451894.pdf-4.jpg" alt="(!LANG:> Ակնոցների պատրաստման և պահպանման կանոններ (թեմա, ծածկոցներ) Առարկա և ծածկոցներ"> Правила приготовления и хранения стекол (предметных, покровных). Предметные и покровные стекла должны иметь абсолютно чистую поверхность и быть хорошо обезжиренными. Капля воды, нанесенная на обезжиренное стекло, растекается равномерно, а на плохо обезжиренном стекле распадается на мелкие капельки. Предметные и покровные стекла рекомендуется мыть и ополаскивать в резиновых перчатках, чтобы не загрязнять их жиром, находящимся на поверхности кожи. Стекла предметные и покровные, не бывшие в употреблении, моют в теплой мыльной воде и после споласкивания заливают смесью Никифорова.!}
Src="http://present5.com/presentation/3/55298978_132451894.pdf-img/55298978_132451894.pdf-5.jpg" alt="(!LANG:> պահպանել"> Если стекла, вынутые через 2- 3 дня из смеси Никифорова, сохраняют следы жира, их складывают в фарфоровую чашечку, заливают 2- 5 % раствором гидрокарбоната натрия или едкого натра, ставят на слабый огонь и кипятят, считая от момента закипания воды, в течение 20- 30 мин. После кипячения в !} ալկալային լուծույթբաժակները ողողում են ծորակի հոսող ջրով, 10-15 րոպե թաթախում 5-10% աղաթթվի լուծույթի մեջ և լվանում հոսող ջրով։ Օգտագործված սլայդները և ծածկոցները, որոնք աղտոտված են ներկով և ընկղմման յուղով, մշակվում են հետևյալ կերպ. դրանք 2 ժամ ընկղմվում են խտացված վիճակում: ծծմբական թթուկամ քրոմի խառնուրդ, այնուհետև մանրակրկիտ լվացվում է հոսող ծորակի ջրով; լցնել նատրիումի բիկարբոնատի կամ ալկալիի 5% լուծույթ (կաուստիկ պոտաշ կամ կաուստիկ սոդա), դնել մարմանդ կրակի վրա և եռացնել 30-40 թ.
Src="http://present5.com/presentation/3/55298978_132451894.pdf-img/55298978_132451894.pdf-6.jpg" alt="(!LANG:> ՊԱՏՐԱՍՏՄԱՆ ՔԱՅԼԵՐԸ. 1. Քսուքի պատրաստում. 3."> ЭТАПЫ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ПРЕПАРАТА. 1. Приготовление мазка 2. Высушивание 3. Фиксация 4. Окрашивание!}
Src="http://present5.com/presentation/3/55298978_132451894.pdf-img/55298978_132451894.pdf-7.jpg" alt="(!LANG:> Կարբոլիկ ներկերի պատրաստման բաղադրատոմսեր"> Рецепты приготовления красителей Карболовый фуксин Циля: - насыщенного спиртового раствора основного фуксина – 10 мл - раствора карболовой кислоты 5% - 90 мл Внимание! Карболовую кислоту вливают в краситель, а не наоборот. Смесь встряхивают, фильтруют и сливают во флакон! Или - основной фуксин в порошке - 1 гр - карболовая кислота кристаллическая -5 гр - глицерин -0, 5 мл - спирт 96% - 10 мл - вода дистиллированная - 100 мл 2. Насыщенные спиртовые растворы (исходные): - красителя - 1 гр - спирта 96% - 10 мл Смесь помещают в термостат на несколько дней до полного растворения. Взбалтывают ежедневно, хранят с притертыми пробками. Фуксин Пфейффера: - фуксин Циля – 1 мл - воды дистиллированной – 9 мл Готовят непосредственно перед употреблением, т. к. раствор нестойкий. Бумага по Синеву: - 1%спиртовой раствор кристаллического фиолетового: на 100 мл 96% спирта добавляют 1 гр сухого красителя и 3 мл глицерина Полоски фильтровальной бумаги пропитывают раствором и высушивают.!}
Src="http://present5.com/presentation/3/55298978_132451894.pdf-img/55298978_132451894.pdf-8.jpg" alt="(!LANG:>"> АЛГОРИТМ ПРИГОТОВЛЕНИЯ МАЗКА ИЗ КУЛЬТУРЫ, ВЫРАЩЕННОЙ НА СКОШЕННОМ АГАРЕ(«КОСЯЧКЕ») Предметное стекло аккуратно берут за ребро и с обратной стороны нанесения мазка наносят его границы и номер культуры. Зажигают спиртовку, горелку, предварительно выпустив пары спирта. Фламбируют поверхность стекла, где будет располагаться мазок. Стекло помещают вблизи спиртовки на чашку Петри В !} ձախ ձեռքՎերցրեք փորձանոթը ստերիլ ֆիզիկական լուծույթով (թորած ջուր) և դրեք այն 1-ին և 2-րդ մատների միջև այնպես, որ ափը լինի փորձանոթի տակ, իսկ փորձանոթի պարանոցն ուղղված լինի ալկոհոլային լամպի գոտի: բակտերիալ հանգույց աջ կողմում, մատիտի նման: Օղակը կարմրում է, սկզբում հորիզոնական, այնուհետև ուղղահայաց: արձակելով օղակներ, փոքր մատը աջ ձեռքսեղմել խցանը ֆիզիկական. լուծումը ձեռքի ափի մեջ և զգուշորեն հանեք այն փորձանոթից: Շարժումները պետք է լինեն հարթ, փորձանոթի կոկորդը կրակի մեջ այրվում է և տեղադրվում է օղակ, վերցվում են ֆիզիկական ելքի օղակով։ լուծույթ և բաժակի վրա մի քանի կաթիլ լցրեք քսուքի սահմաններում Փակեք խցանը՝ նախապես փորձանոթի խցանն ու կոկորդը անցնելով սպիրտի լամպի բոցի միջով, միևնույն ժամանակ փորձանոթը դրեք եռոտանի մեջ։
Src="http://present5.com/presentation/3/55298978_132451894.pdf-img/55298978_132451894.pdf-9.jpg" alt="(!LANG:> Վերցրեք մշակույթի խողովակը ձախ ձեռքում և դրեք այն այնպես, ինչպես խողովակ"> В левую руку берут пробирку с культурой и помещают, как и пробирку с физ. р-ром петля в правой руке Петлю фламбируют Над пламенем спиртовки спокойно вынимают пробку с культуры одновременно обжигая пробку и горло пробирки Вводят в пробирку петлю, охлаждая ее о стенки пробирки Осторожно закрывают и захватывают петлей культуру, не повреждая агара, и вынимают петлю, не касаясь ею стенок пробирки Петлю с культурой вносят в каплю физ. р-ра и осторожно эмульгируют, незаходя за границы мазка Бактериальную петлю с остатками культуры прожигают до покраснения в пламени спиртовки Прожигают горло пробирки пробку в пламени, одновременно. Закрывают пробирку. Пробирку с культурой и петлю ставят в штатив Приготовленный мазок высушивают либо на воздухе либо высоко над пламенем спиртовки!}
Src="http://present5.com/presentation/3/55298978_132451894.pdf-img/55298978_132451894.pdf-10.jpg" alt="(!LANG:>"> Примечание: 1. Приготовление мазка из культуры, выращенной на жидкой питательной среде, не требует использования физ. р-ра. 2. При приготовлении мазка из культуры, выросшей на чашке Петри необходимо: отметить изолированную колонию со стороны дна чашки чашку берут в левую руку и в сторону спиртовки приоткрывают крышку, придерживая ее 1 и 2 пальцами левой руки прокаленную петлю вводят под крышку чашки, остужая ее о крышку осторожно откалывают часть выделенной колонии и, не задевая края чашки, выносят на стекло с физ. р-ром. При подсушивании мазка следует помнить: высокая температура может нарушить структуру клетки!}
Src="http://present5.com/presentation/3/55298978_132451894.pdf-img/55298978_132451894.pdf-11.jpg" alt="(!LANG:>Քաղվածքի պատրաստման սխեմա">!}
Src="http://present5.com/presentation/3/55298978_132451894.pdf-img/55298978_132451894.pdf-12.jpg" alt="(!LANG:> Ֆիքսման տեսակներ q Ֆիզիկական - ալկոհոլային լամպի բոցում q Քիմիական"> Виды фиксации q Физический – в пламени спиртовки. q Химический – в растворах спирта, ацетона, смеси Никифорова (1: 1 спирт и эфир) Цели фиксации Обеззараживание патогенных микробов Закрепление клеток на стекле Убитые микроорганизмы лучше воспринимают красители!}
Src="http://present5.com/presentation/3/55298978_132451894.pdf-img/55298978_132451894.pdf-13.jpg" alt="(!LANG:> Գունավորման մեթոդներ. Պարզ համալիր (Gram, Ziehl-Niel, Ziehl-Niel , Բուրի-Ջիններ)։">!}
Src="http://present5.com/presentation/3/55298978_132451894.pdf-img/55298978_132451894.pdf-14.jpg" alt="(!LANG:> ՊԱՐԶ ՄԵԹՈԴՆԵՐ ԳՈՒՆԱՎՈՐՄԱՆ ՀԱՄԱՐ (SMEARS Aniur"> ПРОСТЫЕ МЕТОДЫ ОКРАСКИ МАЗКОВ Для окрашивания микробов используют анилиновые красители (основные, кислые и нейтральные). Микроорганизмы лучше окрашиваются основными красками. Для окраски препаратов готовят спиртовые, водно-спиртовые и водные растворы. В некоторых случаях добавляют в качестве протравы карболовую кислоту, щелочь и др. Наиболее часто употребляемыми красителями являются следующие: Синие - метиловый синий, водный синий, опаловый синий; красные - фуксин основной, конго красный, сафранин, нейтральный красный, фуксин кислый; фиолетовые - метиловый фиолетовый, кристаллический фиолетовый, генцианвиолет; зеленые - малахитовый зеленый, бриллиантовый зеленый, светло-зеленый; желто-коричневые - хризоилин, везувин.!}
Src="http://present5.com/presentation/3/55298978_132451894.pdf-img/55298978_132451894.pdf-15.jpg" alt="(!LANG:> Ներկման պարզ մեթոդով մի քանի կաթիլ ցանկացած սպիրտ կամ ջուր"> При простом методе окраски на фиксированный мазок наливают несколько капель какого-либо спиртоводного или водного раствора красок на 1- 2 минуты; чаще всего для этой цели применяется фуксин 1: 10 или леффлеровская метиленовая синька. Затем краску смывают дистиллированной водой и мазок обсушивают между двумя полосками фильтровальной бумаги. Обычно Фуксином I: 10 красят 10- 30 секунд, а метиленовой синькой – 2 -10 мин. Фуксин окрашивает мазки более интенсивно. А при окраске метиленовой синькой получаются нежные, более изящные препараты. Мазок после обсушивания фильтровальной бумагой должен быть совершенно сухим, в противном случае при соприкосновении оставшейся влаги с кедровым маслом образуется эмульсия и при микроскопии получится неясное изображение. Вообще же продолжительность окраски зависит от вида и качества красящего раствора, степени восприимчивости микроба к окраске и толщины мазка.!}
Src="http://present5.com/presentation/3/55298978_132451894.pdf-img/55298978_132451894.pdf-16.jpg" alt="(!LANG:>Պարզ գունավորումով մանրէաբանական մարմինները ընկալում են կիրառվող ներկի գույնը նույնքան ինտենսիվ, որքան նման"> При простой окраске микробные тела воспринимают цвет применяемой краски так же интенсивно, как и ядра клеток; в то же время цитоплазма и весь фон мазка (если это не мазок из !} մաքուր մշակույթ) ներկված են նույն գույնով, բայց մի փոքր ավելի գունատ: Մագենտան և գենտյան մանուշակը ավելի ինտենսիվ գունավորող ներկեր են. մեթիլեն կապույտ բծերը շատ ավելի գունատ են: Գույնի ընկալումը կախված է ոչ միայն գույների հատկություններից, այլև ներկվող մանրէների հատկություններից։ Մանրէների մեծ մասը հեշտությամբ և արագ ներկվում է ջրով կամ ներկերի սպիրտ-ջրային լուծույթներով: Գունավորելու ունակությունը բարձրացնելու համար ներկը ենթարկվում է բարձր ջերմաստիճանի (տաքացման) մինչև գոլորշիների առաջանալը (մինչև եռալը): Ջեռուցման աստիճանը փոխելով՝ հնարավոր է ձեռք բերել տարբեր աստիճանի գունային ուժ։ Գունավոր լուծույթի ազդեցության ժամանակի երկարաձգումը օբյեկտի վրա կարող է նաև որոշակիորեն բարձրացնել գունավորման աստիճանը:
Src="http://present5.com/presentation/3/55298978_132451894.pdf-img/55298978_132451894.pdf-17.jpg" alt="(!LANG:> Բարդ գունավորման մեթոդներ՝ հիմնված ֆիզիկայի քիմիական կառուցվածքի առանձնահատկությունների վրա. մանրէաբանական բջիջ Այս մեթոդների էությունը"> СЛОЖНЫЕ МЕТОДЫ ОКРАШИВАНИЯ Основаны на особенностях физико-химического строения микробной клетки. Сущность этих методов заключается в воздействии на мазок двух красящих веществ, из которых одно является основной, главной краской, а другое дополнительной - контраст. После воздействия первой краской мазок обесцвечивают и только после этого подвергают дополнительной окраске. В качестве обесцвечивающих веществ может быть применен целый ряд химических реагентов (кислоты, щелочи, спирт, ацетон и др.). Обмывание мазка простой водой также является в какой-то степени чисто механическим процессом обесцвечивания, но для этого необходимо продолжительное время; кроме того, обесцвечивание получается неполное. По отношению к обесцвечивающим веществам можно разбить микробов на группы легко и трудно обесцвечиваемых. Не все виды микробов одинаково относятся к обесцвечивающим реагентам; некоторые являются кислото - и спиртоустойчивыми, другие только кислотоустойчивы. Наконец, некоторые, как, например, споры, энергично противостоящие воздействию всех обесцвечивающих веществ, относятся к группе краскоустойчивых.!}
Src="http://present5.com/presentation/3/55298978_132451894.pdf-img/55298978_132451894.pdf-18.jpg" alt="(!LANG:> GRAM ՄԵԹՈԴ v Կիրառել գենդիական մանուշակագույնը ֆիքսված երանգի վրա"> СПОСОБ ГРАМА v На фиксированный мазок нанести генцианвиолет (бумага по Синеву) на 1 -2 мин. v Краску слить и нанести раствор Люголя на 1 мин. v Раствор Люголя слить и на мазок нанести 96% спирт на 15 -20 мин в зависимости от толщины мазка. v Спирт смыть дистиллированной водой. v Мазок дополнительно окрасить разведенным фуксином Пфейффера на 2 -3 мин. v Краситель смыть водой, препарат высушить, промикроскопировать с иммерсией Микроскопия с иммерсией. Генцианвиолет связывается с пептидогликаном клеточной стенки Толстый слой пептидогликана грамположительных бактерий связывает много красителя, тонкий слой – грамотрицательных – мало. Раствор Люголя фиксирует краситель за счет образования комплекса – краситель-пептидогликан-йод. При обработке мазка спиртом грамотрицательные микроорганизмы быстро теряют краситель и обесцвечиваются, а грамположительные остаются окрашенными в синий цвет. Дополнительный краситель окрашивает грамотрицательные микроорганизмы в красный цвет Грамположительные бактерии окрашиваются в сине-фиолетовый цвет. Грамотрицательные бактерии окрашиваются в красный цвет.!}
Src="http://present5.com/presentation/3/55298978_132451894.pdf-img/55298978_132451894.pdf-19.jpg" alt="(!LANG:>Բակտերիաների հարաբերակցությունը գրամ ներկելու ունակությամբ որոշվում է. պահպանել ձևավորվել է"> отношение бактерий к окраске по Граму определяется их способностью удерживать образовавшийся в процессе окраски комплекс генцианового фиолетового и йода. У грамположительных бактерий основным веществом клеточной стенки (до 90%) являются мукопептиды-муреин (пептидогликан). У грамотрицательных бактерий однослойный муреин располагается в глубине клеточной стенки, значительно больше содержится белков и липидов, которые вместе с полисахаридами образуют поверхностные слои в виде мозаики, их цитоплазма содержит РНК и ДНК в соотношении 8: 1 и 1: 1 соответственно. Кроме того, проницаемость клеточной стенки у грамположительных бактерий меньше, чем у грамотрицательных. Это объясняется большим содержанием мукопептида в составе клеточной стенки грамположительных бактерий и меньшим диаметром пор, что способствует удержанию образовавшегося комплекса при обработке бактерий этиловым спиртом.!}
Src="http://present5.com/presentation/3/55298978_132451894.pdf-img/55298978_132451894.pdf-20.jpg" alt="(!LANG:> ԳՐԱՄ-ԲԱՑԱՍԱԿԱՆ ԵՎ ԳՐԱՄ-ԴՐԱԿԱՆ"> ГРАМОТРИЦАТЕЛЬНЫЕ И ГРАМПОЛОЖИТЕЛЬНЫЕ БАКТЕРИИ Грамположительные микроорганизмы Грамотрицательные микроорганизмы!}
Src="http://present5.com/presentation/3/55298978_132451894.pdf-img/55298978_132451894.pdf-21.jpg" alt="(!LANG:>Streptococci Gr+ cocci-ները դասավորված են շղթաներով Streptococphylocacuse Entreptococcuse"> Стрептококки Гр+ кокки, располагающиеся в виде цепочек Streptococcus piogenes Enterococcus faecalis Стафилококки Гр+ кокки, располагающиеся в виде скоплений, напоминающих виноградную гроздь Staphylococcus aureus Staphylococcus epidermidis Бактерии Гр- палочковидные неспорообразующиие микроорганизмы Esherichia coli Salmonella typhi Mycobacterium tuberculosis!}
Src="http://present5.com/presentation/3/55298978_132451894.pdf-img/55298978_132451894.pdf-22.jpg" alt="(!LANG:> Vibrio Gr- Vibrio cholerae"> Вибрионы Гр- Vibrio cholerae Vibrio parahaemolyticus Клостридии Гр+ ппалочковидные спорообразующие микроорганизмы. Диаметр спор больше поперечника клетки Clostridium perfringens Clostridium tetani Clostridium botulinum!}
Src="http://present5.com/presentation/3/55298978_132451894.pdf-img/55298978_132451894.pdf-23.jpg" alt="(!LANG:> ԹՈՔԱՅԻՆ ՏՈՒԲԵՐԿՈՒԼՈԴԻՈՍԿԻ ԴԻԱԳՆՈՍՏԻԿԱ"> ДИАГНОСТИКА ТУБЕРКУЛЕЗА ЛЕГКИХ БАКТЕРИОСКОПИЧЕСКИМ МЕТОДОМ ОСНОВАНИЕ: МЕТОДИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ МЕЖДУНАРОДНОГО СОЮЗА БОРЬБЫ С ТУБЕРКУЛЕЗОМ. ФРАНЦИЯ, ПАРИЖ, 1999 г Приготовление мазков Бактерии обнаруживаются в плотных гнойных частицах мокроты. Захватите петлей материал и распределите тонким слоем на 2/3 части предметного стекла. Можно стекло с кусочком мокроты покрыть другим предметным стеклом, придавить друг к другу и раздавить в противоположном направлении до образования тонкого мазка. Можно для приготовления мазка пользоваться деревянными палочками. ВЫСУШИВАНИЕ Приготовленные мазки высушиваются на воздухе 15 -30 мин ФИКСАЦИЯ Медленно провести мазок в течение 3 -5 мин 3 раза через верхнюю или среднюю наиболее яркую часть пламени спиртовки.!}
Src="http://present5.com/presentation/3/55298978_132451894.pdf-img/55298978_132451894.pdf-24.jpg" alt="(!LANG:>COLORING ա) Ծածկեք քսուքը ֆիլտր թղթով և քսեք թղթի կարբոլիկ ֆուքսինի ամբողջ մակերեսը"> ОКРАШИВАНИЕ а) мазок накрыть фильтровальной бумагой и на всю поверхность бумаги нанести карболовый фуксин Циля б) медленно нагревайте стекло с мазком над пламенем спиртовки до появления паров, не допуская кипения и высушивания. Оставить мазок с прогретым раствором на 5 мин ОБЕСЦВЕЧИВАНИЕ а) снять фильтровальную бумагу и удалить окрашивающий раствор под слабой струей воды б) обработать каждый мазок индивидуально 25% раствором серной кислоты в течение 3 -х минут в) смыть водой г) обработать каждое стекло в течение 5 минут 96% спиртом д) смыть водой ДОПОЛНИТЕЛЬНАЯ ОКРАСКА Обесцвеченные и промытые стекла с мазками обработать 0, 3% раствором метиленовой синьки в течение 1 минуты Промыть водой и высушить на воздухе.!}
Src="http://present5.com/presentation/3/55298978_132451894.pdf-img/55298978_132451894.pdf-25.jpg" alt="(!LANG:> ZIEHL-NIELSEN ՄԵԹՈԴ (INSTRUCTION)1"> МЕТОД ЦИЛЯ-НИЛЬСЕНА (ИНСТРУКЦИЯ 1999 ГОД) На фиксированный препарат накладывают фильтровальную бумагу, на которую наносят карболовый фуксин Циля. Подогревают до отхождения паров, процедуру можно повторить. Выдерживают 5 мин 1. Н 2 О 2. 25% Н 2 SО 4 - 3 мин 3. Н 2 О 4. Спирт 96% - 5 мин 5. Н 2 О 6. Метиленовый синий 0, 3 % - 1 мин 7. Н 2 О Кислотоустойчивая микобактерия!}
Src="http://present5.com/presentation/3/55298978_132451894.pdf-img/55298978_132451894.pdf-26.jpg" alt="(!LANG:> ZIEHL-NIELSEN ՄԵԹՈԴ"> МЕТОД ЦИЛЯ-НИЛЬСЕНА 1. На фиксированный препарат + фильтровальная бумага + фуксин Циля. Подогреваем до отхождения паров + краситель (2 раза) 2. Н 2 О 3. 5% Н 2 SО 4 (погружая 2 -3 раза) 4. Н 2 О 5. Метиленовый синий 1 % - 3 -5 мин 6. Н 2 О 7. Микроскопия с иммерсией. Кислотоустойчивые бактерии окрашиваются в красный цвет, остальные – в синий (рис. № 4, 5). Mycobacterium tuberculosis в мокроте!}
Src="http://present5.com/presentation/3/55298978_132451894.pdf-img/55298978_132451894.pdf-27.jpg" alt="(!LANG:> ԲԱԿՏԵՐԻԱՅԻ ՄԵՋ ԿԱՊՍՈՒԼՆԵՐԻ ՀԱՅՏՆԱԲԵՐՈՒՄԸ Որոշ մանրէներ"> ОБНАРУЖЕНИЕ КАПСУЛ У БАКТЕРИЙ Некоторые микробы обладают способностью откладывать на поверхности своего тела мощный слизистый слой вокруг клеточной стенки. Его называют капсулой. В состав капсул входят, главным образом, полисахариды (пневмококк), но у некоторых они содержат и полипептиды (палочка сибирской язвы). Капсулы имеют консистенцию геля, поэтому при микроскопии живых бактерий они видны очень плохо. Для обнаружения применяют негативную окраску. При этом краситель заполняет пространство вокруг бактерий, в результате чего они выглядят светлыми частицами на темном фоне. ОБНАРУЖЕНИЕ КАПСУЛ ПО МЕТОДУ БУРРИ Смешать на предметном стекле немного культуры и каплю туши, разведенной 1: 10. Ребром шлифовального стекла сделать тонкий мазок, также как мазок крови: каплю туши наносят на предметное стекло на расстояние одной трети от левого края. В эту каплю бак. петлей вносят культуру. Затем краем специально отшлифованного стекла, наклонив его под углом 45 О, прикасаются к капле туши с культурой. Прижимая отшлифованное стекло к предметному продвигают его вперед. Мазок заканчивается «метелочкой» Сбросить шлифовальное стекло в дез. Средство. Высушить на воздухе Бактериоскопировать.!}
Src="http://present5.com/presentation/3/55298978_132451894.pdf-img/55298978_132451894.pdf-28.jpg" alt="(!LANG:>"> ОБНАРУЖЕНИЕ КАПСУЛ ПО МЕТОДУ БУРРИ-ГИНСА Приготовить мазок на предметном стекле по методу Бурри Высушить на воздухе Фиксировать химическим способом: погружение стекла в емкость со спиртом или сулемой – 10 мин, или со смесью Никифорова (спирт и эфир 1: 1) – 15 -20 мин Осторожно промыть водой На мазок нанести фуксин Пфейффера – 3 -5 мин Промыть Н 2 О Высушить на воздухе Микроскопия с иммерсией. Внимание! Фильтровальной бумагой не пользоваться, чтобы не повредить препарат. Препарат по Бурри – Гинсу под микроскопом: фон черный, клетки бактерий красные, капсулы неокрашенные (красители не воспринимают). Окраска по Бурри и Бурри-Гинсу!}
Src="http://present5.com/presentation/3/55298978_132451894.pdf-img/55298978_132451894.pdf-29.jpg" alt="(!LANG:>BURRI AND BURRI-GINS Stain Capsule in Kleumoniaella">!}
Src="http://present5.com/presentation/3/55298978_132451894.pdf-img/55298978_132451894.pdf-30.jpg" alt="(!LANG:>"> МЕТОД ОЖЕШКО сходен с методом Циля-Нильсена, но отличается использованием раствора соляной кислоты в качестве протравы, разрыхляющей оболочку споры, которая плохо воспринимает красители. Кислотоустойчивые споры окрашиваются в розово-красный, а бактериальная клетка в голубой цвет. Рис. № 9. Споры у Bacillus subtilis!}
Src="http://present5.com/presentation/3/55298978_132451894.pdf-img/55298978_132451894.pdf-31.jpg" alt="(!LANG:> OZZHZKO STAIN Չորացրած քսուքի վրա) +մի քանիx"> ОКРАСКА ПО МЕТОДУ ОЖЕШКО На высушенный мазок (нефиксированный!) + несколько капель 0, 5% НCl, держать над пламенем спиртовки до образования паров Высушивают и фиксируют физическим способом Окрашивают по методу Циля-Нильсена: На фиксированный препарат + фильтровальная бумага + фуксин Циля. Подогреваем до отхождения паров + краситель (2 раза) Н 2 О 5% Н 2 SО 4 (погружая 2 -3 раза) Н 2 О Метиленовый синий 1 % - 3 -5 мин Н 2 О Микроскопия с иммерсией!}
Src="http://present5.com/presentation/3/55298978_132451894.pdf-img/55298978_132451894.pdf-32.jpg" alt="(!LANG:> Միկրոօրգանիզմների շարժունակության ուսումնասիրություն."> Изучение подвижности микроорганизмов. Подвижности бактерий важный видовой признак и производиться при диагностических исследованиях: результат учитывают при идентификации микроорганизмов. У подвижных видов способность самостоятельного поступательного (и вращательного) движения обусловлена наличием жгутиков -специальных тонких нитевидных образований.!}
Src="http://present5.com/presentation/3/55298978_132451894.pdf-img/55298978_132451894.pdf-33.jpg" alt="(!LANG:> Փշրված Կաթիլների ՄԵԹՈԴ Կաթիլը կիրառվում է բաժակի վրա: pipette կամ հանգույց"> МЕТОД РАЗДАВЛЕННОЙ КАПЛИ На предметное стекло наносят пипеткой или петлей каплю культуры и покрывают ее покровным стеклом. !Чтобы не образовалось пузырьков воздуха, покровное стекло подводят ребром к краю капли и резко опускают его. Для предохранения от высыхания препарат помещают во влажную камеру Микроскопируют в темном поле при увеличении объектива 40 Х Препарат можно поместить во влажную камеру для предохранения от высыхания!}
Src="http://present5.com/presentation/3/55298978_132451894.pdf-img/55298978_132451894.pdf-34.jpg" alt="(!LANG:> Դրոշակները տարբեր երկարություններ ունեն: Նրանց տրամագիծն այնքան փոքր է, որ նրանք մեջ անտեսանելի են"> Жгутики бывают различной длины. Их диаметр настолько мал, что они невидимы в световом микроскопе (менее 0, 2 мкм). У разных групп бактерий количество и расположение жгутиков неодинаково. Жгутики плохо воспринимают красители. Методы сложной окраски искажают подлинный вид жгутиков, поэтому в лабораториях окраску жгутиков не осуществляют, а исследуют бактерии в живом состоянии. В зависимости от расположения и количества жгутиков микробы подразделяют: а) монотрихи - микроорганизмы, имеющие на одном из полюсов один жгутик, движения активные, поступательные (псевдомонас); б) лофотрихи - микробы, имеющие на одном из полюсов пучок жгутиков (листерии); в) амфитрихи - микробы, имеющие жгутики на обоих полюсах микробной клетки; г) перитрихи - микробы, у которых жгутики расположены по всей поверхности клетки(E. coli). Есть виды микроорганизмов, обладающие подвижностью, но жгутиков не имеют (спирохеты, лептоспиры). Их движение обусловлено импульсивными сокращениями двигательного фибриллярного аппарата микробной клетки.!}
Src="http://present5.com/presentation/3/55298978_132451894.pdf-img/55298978_132451894.pdf-35.jpg" alt="(!LANG:>Բակտերիաների շարժունակության որոշումը «կախված կաթիլ» մեթոդով. Յանգ կաթիլ (18 -20 ժամ) արգանակ"> Определение подвижности бактерий методом «висячая капля» . Каплю молодой (18 -20 часовой) бульонной культуры бактерий бактериологической петлей наносят на покровное стекло. Специальным предметным стеклом с углублением (луночкой) накрывают каплю культуры так, чтобы покровное стекло с каплей находилось в центре луночки и прилипло к предметному стеклу (края луночки предварительно слегка смазывают вазелином). Препарат перевертывают стеклом вверх, и капля «повисает» над луночкой. Препарат микроскопируют при затемненном поле зрения, сначала при малом, затем при среднем или большом увеличении. На светлом фоне микробы темно-серые!}
Src="http://present5.com/presentation/3/55298978_132451894.pdf-img/55298978_132451894.pdf-36.jpg" alt="(!LANG:> ԿԱԽԵԼՈՒ ԿԱԹԵԼԻ ՄԵԹՈԴ"> МЕТОД ВИСЯЧЕЙ КАПЛИ Для приготовления препарата необходимы стекло с лункой, покровное стекло, вазелин. Края лунки покрывают тонким слоем вазелина. 1. На покровное стекло наносят каплю культуры и осторожно накрывают покровное стеклом с лункой так, чтобы капля оказалась в центре. 2. Склеившиеся стекла быстро переворачивают покровным стеклом вверх. Капля находится в герметической камере и сохраняется долгое время. Микроскопия сначала при увеличении 8 Х. Находят край капли, а затем переводят на большое увеличение 40 Х. Техника приготовления препарата висячая капля!}
Մենք ապրում ենք բակտերիաների աշխարհում: Նրանք մեր շուրջն են և մեր մարմնի ներսում: Զարմանալի չէ, որ մենք ցանկանում ենք որքան հնարավոր է շատ բան իմանալ նրանց մասին: Բայց ինչպե՞ս դիտարկել և առավել ևս ուսումնասիրել այդքան փոքր բանը: Մանրադիտակը, թվում է, պետք է լուծի այս խնդիրը։ Բայց ամեն ինչ այնքան էլ պարզ չէ՝ միկրոօրգանիզմներն իրենց բնական վիճակում ապակու պես թափանցիկ են։ Բակտերիաների ներկման տարբեր մեթոդներ օգնում են «ցուցադրել» նկարը՝ օգնելով բացահայտել մանրէների արտաքին և ներքին կառուցվածքը։
Տասնիններորդ դարի վերջում դանիացի կենսաբան Քրիստիան Գրամը առաջարկեց այս խնդրի լուծումը։ Եթե ինչ-որ բան անտեսանելի է, այն պետք է ներկել և տեսնել, թե ինչ է տեղի ունենում: Gram-ի առաջարկած բակտերիաների ներկման մեթոդն այնքան համոզիչ էր, որ մինչ օրս միկրոօրգանիզմները բաժանվում են գրամ-դրական (պահպանող գույն) և գրամ-բացասական (գունաթափվում են ալկոհոլով բուժումից հետո):
Ինչպես պարզվեց, բջիջները ծածկված են միահյուսված թելերի նման թաղանթով։ Եվ չնայած բջջի համար անհրաժեշտ սնուցիչները ազատորեն անցնում են թելերի միջև եղած բացերը, պատյանը հուսալիորեն պաշտպանում է «ներաշխարհը» արտաքին ագրեսիվ գործոններից։ Բակտերիաների տարբեր տեսակների դեպքում բջջի արտաքին պատն ունի տարբեր հաստություն, խտություն և քիմիական բաղադրությունը. Բջջային թաղանթների այս հատկության վրա է հիմնված Գրամ ներկման մեթոդը:
Քրիստիան Գրամի աշխատանքի հիման վրա կենսաբանները մշակել են նոր մեթոդներ, որոնք թույլ են տալիս ոչ միայն որոշել բջիջների ձևն ու չափը, այլև դիտարկել դրանց կառուցվածքի որոշ մանրամասներ: Երբեմն արտաքին տեսքով միանգամայն նույնական միկրոօրգանիզմները տարբեր կերպ են արձագանքում ներկերին։ Ստացված տեղեկատվությունը թույլ է տալիս արագ և ճշգրիտ որոշել բակտերիաների տեսակը։
Հին չի նշանակում վատ
Թերևս միկրոօրգանիզմների ներկման առավել գործնական և լայնորեն կիրառվող մեթոդը Գրամ մեթոդն է: Կրակով ամրացված քսուքը պատում են մեթիլմանուշակագույն ներկով, ամրացնում յոդով, չորացնում և լվանում սպիրտով։ Այս փուլում, կախված բջջային թաղանթի հատկություններից, բակտերիաները դառնում են.
- վառ կապույտ (գրամ-դրական);
- անգույն (գրամ բացասական):
Անգույն մնացած բջիջների թաղանթի հաստությունը թույլ չի տալիս ներկին ներթափանցել ներս, և այն հեշտությամբ լվանում է բակտերիաների մակերեսից։ Գրամ ներկման վերջին քայլը կարմիր ներկի օգտագործումն է, որը մնում է բջջաթաղանթի մակերեսին և դրան տալիս է վարդագույն կամ կարմիր երանգ:
Գրամ դրական բակտերիաները հիմնականում վտանգավոր են մարդկանց համար: Այս կատեգորիան ներառում է streptococci, staphylococci, bacilli, clostridia և այլն: Գրամ-բացասականներն այնքան էլ վտանգավոր չեն: Նրանք կարող են նաև առաջացնել հիվանդություն և բորբոքում, բայց միայն որոշակի պայմաններում: Այսպիսով, պարզապես գունավոր պատրաստուկ պատրաստելով, կարելի է պատկերացում կազմել ուսումնասիրված միկրոօրգանիզմների վտանգավորության աստիճանի մասին։
Կենսական ներկման մեթոդներ
Ըստ մանրէաբանության մեջ ուսումնասիրված օրգանիզմների վիճակի՝ առանձնանում են.
- կենսական մեթոդ, այսինքն՝ աշխատել կենդանի բակտերիաների հետ (վտանգավոր է, պահանջում է անվտանգության նախազգուշական միջոցների խստիվ պահպանում);
- հետվիտալ մեթոդ – աշխատանք ֆիքսված (սպանված) բջիջների հետ;
- բացասական, կարող է լինել կենսական և հետկենսական, հարմար պարկուճների հետ աշխատելու համար։
Կենսական նշանակություն ունեցող մեթոդն ամենավտանգավորն է, քանի որ հետազոտողները ստիպված են գործ ունենալ կենդանի բջիջների հետ, որոնք երբեմն մահացու են: Սակայն հենց այս մեթոդն է հնարավորություն տալիս ուսումնասիրել ոչ միայն բջջի կառուցվածքը, այլև նրա ողջ կյանքի ցիկլը և փոխազդեցությունը շրջակա միջավայրի հետ։
Շատ մանրէաբանական հետազոտությունների համար կարևոր է պահպանել բակտերիաները: Սա նշանակում է, որ անհրաժեշտ է օգտագործել հատուկ ոչ թունավոր կամ ցածր թունավոր ներկանյութեր, որոնք, ավելին, հեշտությամբ ներթափանցում են բջջի կառուցվածք արտաքին պատյանով։ Սրանք այսպես կոչված կենսական ներկեր են, որոնց համար կարելի է նախատեսված լինել տեսանելի լույսկամ լյումինեսցենտ: Ըստ քիմիական բաղադրության՝ ներկանյութերը բաժանվում են.
- հիմնական (ակրիդին նարնջագույն, մեթիլեն կապույտ);
- թթու կամ թթու (ինդիգո կարմին, թթու ֆուչսին);
- չեզոք (ռոդամին B):
Ֆիքսված դեղերի հետ աշխատելը
Ըստ աշխատանքի բարդության՝ ֆիքսված (ոչ կենդանի) բջիջները ներկելու մեթոդները բաժանվում են.
- Պարզ մեթոդներ. Այս դեպքում օգտագործվում է միայն մեկ ներկ, սովորաբար կարմիր (magenta) կամ կապույտ (methylene blue): Այս ներկերի տարբերությունը ազդեցության արագությունն է: Ֆուկսինը արդյունքը տալիս է 1-2 րոպե հետո, իսկ կապույտ ներկի արդյունքին պետք է սպասել 3-5 րոպե։ Հարմար է նաև ֆուքսինի լուծույթ օգտագործել կարբոլաթթվի մեջ (այսպես կոչված Ziel's fuchsin), քանի որ պատրաստված պատրաստուկը մի քանի ամիս չի կորցնում իր գունազարդման հատկությունները։ Մեթիլեն կապույտ ներկը նույնպես կարելի է նախապես պատրաստել ուժեղ ալկոհոլային լուծույթում։
- Բարդ (դիֆերենցիալ) մեթոդներ. Սա կպահանջի մի քանի ներկանյութ (առնվազն երկու), ունենալով տարբեր գույն. Սա թույլ կտա ոչ միայն տեսնել բակտերիաները, այլև ավելի մանրամասն ուսումնասիրել դրանց ներքին կառուցվածքը, քանի որ բջջի տարբեր մասերը կարող են տարբեր կերպ ընկալել ներկերը։ Բարդ մեթոդները ներառում են Gram, Ziehl-Nielsen (թթվակայուն բակտերիաների համար), Benignetti (բակտերիալ դրոշակի ներկում), Ջին (պարկուճների նույնականացում), Ռոմանովսկի-Գիմսա տարբերակիչ մեթոդը (սպորների ներկում) և մի քանի այլ մեթոդներ:
Վարակիչ հիվանդությունների ախտորոշման համար հատկապես կարևոր են բարդ մեթոդները, օրինակ՝ Նեյսերի ներկման մեթոդը օգնում է տարբերել դիֆթերիայի բացիլը կեղծ դիֆթերիայից։
Ռոմանովսկի-Գիմսա տարբերակիչ մեթոդը հիմնված է հատուկ պատրաստի փոշու օգտագործման վրա, որի հիման վրա լաբորատորիաները պատրաստում են ցանկալի կոնցենտրացիայի ներկային լուծույթ: Այս մեթոդի առավելությունն այն է, որ բջջի ցիտոպլազմը և միջուկը ստանում են այլ գույն, ինչը հեշտացնում է միկրոօրգանիզմների նույնականացումը և ուսումնասիրությունը:
Նայսերի մեթոդն օգտագործվում է բժշկության մեջ՝ դիֆթերիայի հարուցիչների մեջ վոլուտինի հատիկներ (պրոկարիոտիկ բազմաթիվ բջիջների համար սննդի պաշարներով հատիկներ) հայտնաբերելու համար։ Գունավորման արդյունքում բակտերիան ձեռք է բերում դեղին, իսկ վոլուտինի հատիկները կապույտ են։
Սպիտակը սևի վրա
Բակտերիաների ներկման մեկ այլ տեսակ հիմնված է բացասականի հատկությունների վրա, այսինքն՝ պատրաստուկի մուգ ֆոնի վրա հստակ տեսանելի են անգույն բակտերիաները, այլ կերպ ասած՝ ներկված է շրջակա միջավայրը, այլ ոչ թե բուն օրգանիզմը։
Երբեմն բակտերիաները, հայտնվելով որոշակի պայմանների մեջ, կազմում են պարկուճներ։ Սրանք լորձաթաղանթային գոյացություններ են, որոնք ծածկում են բջիջը, ինչ-որ չափով նման են գելին: Պարկուճները թափանցիկ են, դրանց քիմիական բաղադրությունը կարող է շատ տարբեր լինել բակտերիաների տարբեր տեսակների մեջ, այսինքն. պարզապես ներկել և արդյունքը գնահատել ստացված գույնով չի աշխատի:
Բացի այդ, պարկուճները փափուկ և փխրուն են, ներկելիս կարող են կորցնել իրենց ձևը: Գունավորող նյութերը լավ չեն փոխազդում պարկուճների դոնդողանման կառուցվածքի հետ և հեշտությամբ լվանում են մշակման ընթացքում: Պարկուճները հայտնաբերելու, բայց չվնասելու համար օգտակար է բացասական ներկման մեթոդը։
Պարկուճների հայտնաբերման մեթոդներից է Գինսի ներկման մեթոդը։ Սև թանաքի կաթիլը դրվում է ապակե սլայդի եզրին, փորձարկման նյութը ավելացվում է դրան, խառնվում և բաշխվում ամբողջ մակերեսով: Քսուքը չորացվում է օդով, ամրացվում և ներկվում Ziehl magenta-ով: 2-3 րոպե հետո լվանալ ջրով և չորացնել։ Արդյունքում թափանցիկ պարկուճներով շրջապատված վարդագույն բջիջները ընդհանուր մուգ ֆոնի վրա հստակ տեսանելի են մանրադիտակի տակ։
Սպոր առաջացնող բակտերիաների գունավորում
Եթե խոսենք բջջային թաղանթների մասին, ապա չենք կարող չհիշել սպոր առաջացնող բակտերիաները։ Սպորները առաջանում են բջջի համար անբարենպաստ պայմաններում և կարող են բավականին երկար ժամանակ գոյություն ունենալ ագրեսիվ միջավայրում։ Այն, ինչ լավ է բջիջը պահպանելու համար, վատ է այն ուսումնասիրելու համար: Սպորները շատ խիտ են և գրեթե անթափանց հեղուկների համար, բացի այդ, դրանք թթվակայուն են։ Հետեւաբար, պարզ բիծը կամ Գրամի մեթոդը սպորները կթողնեն անգույն:
Գունավորումից առաջ անհրաժեշտ է սպորների մակերեսը քիմիապես մշակել, որպեսզի այն մի փոքր փոխի իր կառուցվածքը և թույլ տա ներկանյութերին ներթափանցել ներս։ Այս դեպքում բջջի ամբողջ ցիտոպլազմը նույնպես ներկված է: Ցիտոպլազմը գունաթափելու համար պատրաստուկը լվանում և չորացնում են։ Սպորների մեջ ներկը, իրենց ավելի խիտ կառուցվածքի շնորհիվ, ավելի լավ է պահպանվում, քան ցիտոպլազմում։
Սպորների ներկման մեթոդները կարող են տարբեր լինել, օրինակ, Orzeshko կամ Ziehl-Nielsen, բայց դրանք բոլորը իջնում են նույն սխեմայի վրա.
- սպորի մակերեսի թուլացում քիմիական նյութեր(թթուներ, ամոնիակ, կաուստիկ սոդա);
- բջջի ներկում սպորով (սովորաբար, երբ տաքացվում է);
- ցիտոպլազմայի գունաթափում.
Արդյունքում մենք ստանում ենք հիանալի տեսանելի վառ գույնի սպոր և գունատ, գրեթե թափանցիկ ցիտոպլազմա։
Ինչպես հետազոտել բակտերիալ դրոշակները
Մեկ այլ բարդ խնդիր է բակտերիաների ներկումը դրոշակներով: Սրանք պարուրաձև ոլորված շատ բարակ թելեր են, որոնք միկրոօրգանիզմներն օգտագործում են շարժվելու համար: Դրոշակները անսովոր բարակ են, երբ ներկված են, հեշտությամբ անջատվում են բջիջից: Հետեւաբար, նախքան ներկելը, դրոշակները փորագրվում են՝ արհեստականորեն մեծացնելով ծավալը։
Ուսումնասիրության համար միկրոօրգանիզմներ պատրաստելիս բակտերիալ մշակույթը մի քանի օր ենթամշակվում է թարմ սննդային միջավայրի վրա մի քանի օր շարունակ: Այնուհետև դրոշակակիր բակտերիաները տեղափոխվում են ստերիլ ջրով փորձանոթի մեջ (t 37⁰С): Դա արեք շատ ուշադիր, առանց հեղուկը խառնելու, որպեսզի չվնասեք դրոշակները։
Փորձանոթի պարունակությունը թողնում են մոտ մեկ ժամ, որպեսզի բակտերիաները հավասարաչափ բաշխվեն ամբողջ ծավալով։ Նախքան ուսումնասիրությունը սկսելը, ստուգվում է բջիջների շարժունակությունը կախված կաթիլում: Եթե շարժում չկա, խողովակը մնում է ևս որոշ ժամանակ։
Երբ լուծումը կիրառվում է ապակե սլայդի վրա, բջիջները հեշտությամբ կարող են կորցնել իրենց դրոշակները: Հետևաբար, ապակե մակերեսը պետք է լինի կատարյալ մաքուր և առանց ճարպի: Նախքան լուծույթի կաթիլները դնելը, այրիչի բոցի տաք մասի վրայով անցկացվում է ապակե սլայդ, որպեսզի մակերեսի վրա ընկած կաթիլները արագ տարածվեն և չորանան։
Չորացնելուց հետո քսուքը փորագրվում է, 15 րոպե հետո քիմիական նյութը լվանում է։ Հաջորդ փուլը` ֆուքսինի ներկումը, իրականացվում է ապակին ներկանյութի լուծույթի մեջ ընկղմելով, որպեսզի ներկ քսելիս դրոշակները չվնասվեն:
Ճիշտ ժամանակը պահպանելուց հետո քսուքը լվանում են ջրով և չորացնում։ Այժմ կարող եք անցնել ստացված արդյունքի ուսումնասիրությանը:
Գունավորման տեխնիկա
Գունավոր պատրաստուկ ստանալու համար չի կարելի պարզապես վրձին վերցնել, ներկել և բակտերիա բռնել։ Միկրոօրգանիզմների հետ աշխատելու որոշակի սխեմա կա.
- Քսուք պատրաստում. Մի կաթիլ ջուրը կիրառվում է ապակե սլայդի վրա (ստերիլ), որի մեջ լաբորատոր նյութն այնուհետև ներմուծվում է մանրէաբանական օղակով և բաշխվում մակերեսի վրա:
- Չորացում. Ավելորդ հեղուկը կա՛մ բնականորեն չորացվում է սենյակային ջերմաստիճանում, կա՛մ քսուքը մի փոքր տաքացվում է այրիչի բոցից բարձր:
- Ֆիքսացիա. Միայն ջուրը հեռացնելը բավարար չէ, պետք է բակտերիաները ամրացնել ապակե սլայդի վրա։ Դա անելու համար կարող եք օգտագործել կրակ (մի քանի անցումներ կրակի ամենաթեժ մասի վրայով) կամ հեղուկ (ալկոհոլ, ացետոն): Նման մշակումից հետո միկրոօրգանիզմներն ավելի արագ են կլանում ներկը։
- Ուղղակի ներկում. Ներկը պետք է ամբողջությամբ ծածկի քսուքի ամբողջ մակերեսը: Ճիշտ ժամանակին դիմակայելով (յուրաքանչյուր ներկի համար իր սեփականը) ներկը հանվում է և պատրաստուկը լվանում ջրով։
Չորացնելուց հետո (սովորաբար բնականաբար), արդյունքը կարող է օգտագործվել իր նպատակային նպատակների համար:
Միկրոօրգանիզմների ներկումը մեթոդների, տեխնիկայի, սխեմաների մի ամբողջ համակարգ է, որն ուղղված է մանրադիտակի միջոցով բջիջների հայտնաբերմանը և ճանաչմանը: Ոչ բժշկական հետազոտություն կամ գիտական աշխատանքմանրէաբանության մեջ նրանք չեն կարող անել առանց ուսումնասիրվող նյութի նախնական պատրաստման և գունավորման:
Միկրոօրգանիզմների ներկումը (մանրէների ներկումը) արտաքին և արտաքինն ուսումնասիրելու մեթոդների և տեխնիկայի մի շարք է. ներքին կառուցվածքըմիկրոօրգանիզմներ, մանրէաբանական տեխնոլոգիայի մեթոդ, որը թույլ է տալիս տարբերակել միկրոօրգանիզմների տեսակները։ Մեթոդը լայնորեն կիրառվում է կիրառական մանրէաբանության մեջ՝ որոշելու մանրէների ձևը, չափը, կառուցվածքը, տեղայնացումը, հարաբերական դիրքը և նրանց օրգանելների կառուցվածքը։ Առանց ներկելու, մանրէները, բացառությամբ որոշ սնկերի, գործնականում անտեսանելի են լուսային մանրադիտակի մեջ՝ իրենց ցածր հակադրության պատճառով: Բուժումից հետո մանրէների թաղանթները և/կամ օրգանելները ձեռք են բերում ֆոնի հետ հակադրվող գույն։
// Ընդհանուր տեղեկությունմեթոդի մասին
Մանրէաբանական պատրաստուկները ենթարկվում են քիմիական ռեակտիվների, սովորաբար ներկանյութերի կամ օսմիումի տետրօքսիդի: Ներկանյութի հետ փոխազդեցության ֆիզիկաքիմիական գործընթացի արդյունքում քիմիական միացություններառարկաներ, որպեսզի նրան արհեստականորեն որոշակի գույն հաղորդելու համար հնարավոր է դառնում որոշել միկրոօրգանիզմի տեսակը կամ գոնե նրա թաղանթի տեսակը (տես Գրամ բիծ)։
Ներկման մեթոդները բաժանվում են կենսական, հետվիտալային և բացասական, վերջիններս կարող են լինել կենսական և հետվիտալ։
Կենսական գունավորման մեթոդ
Կենսական (կենսական) ներկման համար օգտագործվում են մեթիլենի և տոլուոիդին կապույտի, նեյտրոտի և Կոնգո կարմիրի 0,2-0,001% ջրային լուծույթներ, որոնք ավելացվում են կուլտուրայի սեղմված կամ կախովի կաթիլին։ Այս մեթոդը բացահայտում է սպիրոխետներ, նախակենդանիներ, որոշում է բակտերիաների շարժունակությունը, պարկուճի իմունային այտուցը, սակայն դրա օգտագործումը պահանջում է լաբորատոր վարակը բացառող կանոնների խստիվ պահպանում։
Հետվիտալ ներկման մեթոդներ
Ֆիքսված պատրաստուկների ներկման մեթոդները (հետկենսական) բաժանվում են պարզ և բարդ: Պարզ մեթոդներով ֆիքսված պատրաստուկի վրա կիրառվում են Pfeiffer fuchsin-ի (ազդեցություն 1-2 րոպե), ալկալային մեթիլեն կապույտի (3-5 րոպե) ներկման լուծույթները, որպեսզի այն ամբողջությամբ ծածկի քսուքը, ներկը քամվի, պատրաստուկը լվացվի: ջրի հոսք՝ թափահարված, չորացրած և մանրադիտակով:
Պարզ ուղիներհնարավորություն է տալիս դատել առանձին բջիջների չափը, ձևը, տեղայնացումը, փոխադարձ դասավորությունը, սակայն դրանց օգնությամբ անհնար է հաստատել մանրէների կառուցվածքը և հաճախ դրանց տարբերակված կապը ներկերի հետ:
Բակտերիաների ներկման բարդ մեթոդներից տարբերակված գրամ մեթոդը, թթվային դիմադրության հայտնաբերումը ըստ Զիել-Նելսոնի, վոլուտինի հատիկների որոշումը ըստ Լեֆլերի կամ Նայսերի, Ռոմանովսկի-Գիմսայի տարբերակիչ մեթոդը, որոշման բացասական-դրական մեթոդը. պարկուճը ըստ Gins-Burri-ի, սպորների հայտնաբերումը ըստ Պեշկովի կամ Զիելի - Նելսոնի և այլն:
Նախակենդանիների ներկման համար օգտագործվում է Ռոմանովսկի-Գիմսա մեթոդը և հեմատոքսիլին-էոզին ներկելը։
Սնկերը զննում են անբիծ կամ Գրամ, Զիել-Նելսոն, Լեֆլեր, Ռոմանովսկի-Գիմսա, ինչպես նաև Լուգոլի լուծույթ, լակտոֆուչսին և այլն մեթոդներով։
Գրամ մեթոդը հետազոտության համար միկրոօրգանիզմների ներկման մեթոդ է, որը թույլ է տալիս տարբերակել բակտերիաները՝ ըստ նրանց բջջային պատի կենսաքիմիական հատկությունների։ Առաջարկվել է 1884 թվականին դանիացի բժիշկ Գ.Կ. Գրամի կողմից։
Ըստ Gram-ի՝ բակտերիաները ներկվում են հիմնական ներկանյութերով՝ գենտյան կամ մեթիլմանուշակ և այլն, ապա ներկանյութը ամրացնում են յոդի լուծույթով։ Ներկված պատրաստուկը ալկոհոլով լվանալիս բակտերիաների այն տեսակները, որոնք պարզվում է, որ խիստ ներկված են, կոչվում են գրամ դրական բակտերիաներ՝ ի տարբերություն գրամ-բացասականի (Գրամ (-)), որոնք լվացվելիս գունաթափվում են:
// Օգտագործեք ախտորոշման մեջ
Գրամ բիծն ունի մեծ նշանակությունբակտերիաների տաքսոնոմիայում, ինչպես նաև վարակիչ հիվանդությունների մանրէաբանական ախտորոշման համար։
Բակտերիաների գրամ դրական կոկային և սպորակիր ձևերը, ինչպես նաև խմորիչները ներկված են կապույտ-սև (մուգ կապույտ) գույնով։
Շատ ոչ սպոր բակտերիաներ գրամ-բացասական են, դրանք ներկվում են կարմիր գույնով, բջջի միջուկները դառնում են վառ կարմիր, ցիտոպլազմը՝ վարդագույն կամ բոսորագույն։
Գունավորման տեխնիկա
Գրամ բիծը վերաբերում է գունավորման բարդ մեթոդին, երբ քսուքը ենթարկվում է երկու ներկերի, որոնցից մեկը հիմնականն է, իսկ մյուսը՝ լրացուցիչը: Բացի ներկանյութերից, գունազարդման բարդ մեթոդների համար օգտագործվում են սպիտակեցնող նյութեր՝ սպիրտ, թթուներ և այլն։
Գրամ ներկելու համար առավել հաճախ օգտագործվում են տրիֆենիլմեթանային խմբի ներկանյութեր՝ գենտիան, մեթիլ մանուշակ կամ բյուրեղյա մանուշակ։ Գրամ դրական գրամ (+) միկրոօրգանիզմները ուժեղ կապ են տալիս նշված ներկանյութերի և յոդի հետ։ Միևնույն ժամանակ, նրանք չեն գունաթափվում, երբ ենթարկվում են ալկոհոլի, ինչի հետևանքով, ֆուկսին Գրամ (+) լրացուցիչ ներկումով, միկրոօրգանիզմները չեն փոխում ի սկզբանե ընդունված մանուշակագույն գույնը։
Գրամ-բացասական Գրամ (-) միկրոօրգանիզմները կազմում են միացություն, որը հեշտությամբ ոչնչացվում է ալկոհոլի կողմից հիմնական ներկերի և յոդի հետ: Արդյունքում, միկրոբները գունաթափվում են, այնուհետև ներկվում են մանուշակագույնով և դառնում կարմիր։
Նկարչության համար նյութի պատրաստում
Փորձարկման նյութը բարակ շերտով տարածվում է լավ յուղազերծված ապակու սլայդի մակերեսի վրա: Պատրաստված քսուքը չորացնում են օդում և ամրացնում ամբողջական չորացումից հետո։ Հյուսվածքաբանական հատվածները պատրաստվում են սովորական տեխնիկայի համաձայն՝ հյուսվածքի կտորները ամրացնելով ֆորմալինի մեջ և ներկառուցելով պարաֆինի մեջ:
Ֆիքսացիա
Ամրագրելիս քսուքը ամրացվում է ապակու սլայդի մակերեսին, և, հետևաբար, պատրաստուկի հետագա ներկման ժամանակ մանրէաբանական բջիջները չեն լվանում։ Բացի այդ, սպանված մանրէաբանական բջիջները ավելի լավ են ներկվում, քան կենդանիները:
Տարբերակվում է ֆիքսման ֆիզիկական մեթոդը, որը հիմնված է մանրէային բջջի վրա բարձր ջերմաստիճանի ազդեցության վրա, և քիմիական մեթոդների միջև, որոնք ներառում են քիմիական նյութերի օգտագործում, որոնք առաջացնում են ցիտոպլազմային սպիտակուցների կոագուլյացիա:
Ֆիզիկական ամրագրման եղանակ
Պատրաստուկի հետ ապակե սլայդը պինցետով կամ աջ ձեռքի I և II մատներով վերցվում է կողոսկրերով՝ շարժումով դեպի վեր և 2-3 անգամ սահուն շարժումով այրիչի բոցի վերին մասի վրայով։ Ամբողջ ֆիքսման գործընթացը պետք է տևի ոչ ավելի, քան 2 վրկ:
Ֆիքսացիայի հուսալիությունը ստուգվում է հետևյալ մեթոդով. քսուքից զերծ ապակու սլայդի մակերեսը կիրառվում է ձախ ձեռքի հետևի մակերեսին: Քսուքի պատշաճ ամրագրման դեպքում ապակին պետք է տաք լինի, բայց այրվածք չառաջացնի:
Քիմիական մեթոդպարտավորվում է
Քսուքները ամրացնելու համար մեթիլ սպիրտ, ացետոն, Նիկիֆորովի խառնուրդ (էթիլային սպիրտի 96% և անզգայացնող եթերի խառնուրդ 1:1 հարաբերակցությամբ), Կարնոյի հեղուկ (էթիլային սպիրտ 96% - 60%, քլորոֆորմ 30%, սառցադաշտ. քացախաթթու 10%), ալկոհոլ-ֆորմոլ (40% ֆորմալին 5 մլ, էթիլային սպիրտ 96 ° - 95 մլ): Չորացրած քսուքով սլայդը 10-15 րոպե ընկղմվում է ֆիքսատորով շշի մեջ և այնուհետև չորացնում օդում: Կիրառվում է նաև 40% ֆորմալինի գոլորշու մեջ մի քանի վայրկյան ամրացում։
Գունավորման գործընթացը
Հիմնական ներկերից մեկը 2-3 րոպեով լցնում են ֆիքսված քսուքի վրա։ Տեղումներից խուսափելու համար ներկեք ֆիլտր թղթի միջով:
Քամեք ներկը, զգուշորեն հանեք ֆիլտրի թուղթը։ Քսուքը լցվում է Լուգոլի լուծույթով կամ Գրամի յոդիդի լուծույթով (կալիումի յոդիդի և բյուրեղային յոդի ջրային լուծույթ 2:1 հարաբերակցությամբ) 1-2 րոպե, մինչև պատրաստուկը սևանա:
Լուծույթը քամում են, քսուքը ողողում են 96° էթիլային սպիրտով կամ ացետոնով, լցնելով և ցամաքեցնելով մինչև քսուքը գունաթափվի և հոսող հեղուկը թափանցիկ լինի (մոտ 20-40-60 վայրկյան):
Սլայդները մանրակրկիտ լվացեք հոսող կամ թորած ջրի մեջ 1-2 րոպե:
Բակտերիաների գրամ-բացասական խումբը բացահայտելու համար պատրաստուկները լրացուցիչ ներկվում են ֆուչսինով կամ սաֆրանինով (2-5 րոպե):
Լվանալ հոսող ջրի մեջ և չորացնել ֆիլտր թղթով։
Հյուսվածքաբանական հատվածներում բակտերիաների ներկման տեխնիկա՝ ըստ Gram-Weigert-ի
Դեպարաֆինացված հատվածները բերվում են ջրի:
20 րոպե ներկված պարարոզանիլինի կամ հիմնային ֆուքսինի 1%-անոց լուծույթում 1%-ով քացախաթթու(ներկանյութի լուծույթը տաքացնում են մինչև եռման աստիճանը, սառչում և ֆիլտրում):
Լվացվում է թորած ջրի 3 փոփոխության մեջ։
Ներկեք 5 րոպե 1% բյուրեղյա մանուշակագույն թորած ջրի մեջ:
Արագ լվանալ նատրիումի քլորիդի 1% լուծույթով:
Բուժում են 30 վայրկյան խառնուրդում՝ 1 բաժին յոդ + 2 մաս կալիումի յոդիդ + 100 մաս թորած ջուր։
Թրջել ֆիլտրի թղթով։
Տարբերեք կտրվածքի վրա խառնուրդ քսելով հավասար ծավալներանիլին և քսիլեն (1 - 2 մլ); լուծույթները քամվում են այնքան ժամանակ, մինչև ներկերի ամպերը դադարեն հեռանալ կտրվածքից:
Անցեք քսիլենի 3 հերթափոխով
Պարփակված է բալասան կամ քսիլենի մեջ լուծված ցանկացած խեժի մեջ:
Արդյունքը՝ Գրամ դրական բակտերիաները կապույտ-սև են, ֆիբրինը մանուշակագույն է, միջուկները՝ կարմիր։
Պեշկովի մեթոդն օգտագործվում է բակտերիալ էնդոսպորները ներկելու համար։
Գունավորման տեխնիկա
Գրամ դրական բակտերիաների կուլտուրայից չորացրած պատրաստուկը 15 րոպե ամրացնում են Կարնոյի հեղուկում, այնուհետև լվանում ջրով, մեթիլեն կապույտը լցնում են ըստ Լեֆլերի և տաքացնում մինչև գոլորշիների առաջանալը, եփում 15-20 րոպե, սառչելուց հետո պատրաստում են։ լվացվել և ներկվել է չեզոք կարմիրի կամ մանուշակագույնի 0,5% ջրային լուծույթով՝ ըստ Pfeifer-ի 30-60 վայրկյան: Չորացնել ֆիլտրի թղթով և մանրադիտակով։
Գունավորման արդյունք
Արդյունքում, հասուն էնդոսպորները ներկվում են կապույտ, երիտասարդ էնդոսպորները՝ մուգ կապույտ, ցիտոպլազմը՝ կարմիր, իսկ քրոմատինի հատիկները՝ մանուշակագույն։
Ziehl-Nelsen-ի ներկման մեթոդը միկրոօրգանիզմների ներկման մեթոդ է՝ թթվակայուն միկոբակտերիաների (տուբերկուլյոզի, միկոբակտերիոզի, բորոտության հարուցիչներ), ակտինոմիցետների և թթվակայուն այլ միկրոօրգանիզմների հայտնաբերման համար: Միկրոօրգանիզմների թթվային դիմադրությունը պայմանավորված է նրանց բջիջներում լիպիդների, մոմի և հիդրօքսի թթուների առկայությամբ։ Նման միկրոօրգանիզմները վատ ներկվում են նոսրացված ներկերի լուծույթներով: Ներկանյութի ներթափանցումը միկրոօրգանիզմների բջիջներ հեշտացնելու համար պատրաստուկի վրա կիրառվող Tsilya ֆենոլային ֆուկսինը տաքացվում է այրիչի կրակի վրա: Գունավոր միկրոօրգանիզմները չեն գունաթափվում հանքային թթուների և ալկոհոլի թույլ լուծույթներով:
Մեթոդն անվանվել է գերմանացի բժիշկների՝ մանրէաբան Ֆրանց Ցիելի (1857-1926) և պաթոլոգ Ֆրիդրիխ Նելսենի (1854-1898) պատվին, ովքեր այն մշակել են 1882-1883 թվականներին:
Գունազարդման քայլեր
1. Ֆիքսված քսուքը ծածկում են հարթ զտիչ թղթով և վրան լցնում են Ziehl-ի ֆենոլ ֆուքսին: Քսուքը տաքացնում են այրիչի կրակի վրա, մինչև գոլորշիներ առաջանան, այնուհետև այն հանում են սառչելու և ներկանյութի նոր մասը ավելացնում: Ջեռուցումը կրկնվում է 2-3 անգամ։ Սառչելուց հետո հանեք ֆիլտրի թուղթը և պատրաստուկը լվացեք ջրով։
2. Դեղը գունազրկվում է՝ թաթախելով կամ քսելով 5% ծծմբաթթվի լուծույթ կամ 3% հիդրոքլորային սպիրտ և մի քանի անգամ լվանում ջրով։
3. Պատրաստուկները ներկել մեթիլեն կապույտի ջրային-ալկոհոլային լուծույթով 3-5 րոպե, լվանալ ջրով և չորացնել։
Ziehl-Nelsen մեթոդով ներկվելիս թթվակայուն բակտերիաները դառնում են ինտենսիվ կարմիր, մնացած միկրոֆլորան ներկվում է բաց կապույտ:
Ռոմանովսկի-Գիմսա ներկումը բջջաբանական մեթոդ է՝ նախակենդանիների, բակտերիաների, տարբեր տեսակների (ներառյալ արյան) բջջային կառուցվածքների և հյուսվածքների ներկման համար՝ լուսային մանրադիտակի միջոցով: Այն ներկում է ացիդոֆիլ գոյացությունները կարմիրի տարբեր երանգներով, բազոֆիլ գոյացություններ՝ մանուշակագույնից մինչև կապույտ գույներով:
// Ներկանյութի պատրաստում
Նախքան քսուքները ներկելը, պատրաստի հեղուկ ներկը նոսրացվում է 1 մլ թորած ջրի դիմաց 1-2 կաթիլ ներկի չափով: Քսուքները ներկվում են 20 - 25 րոպե 37°C ջերմաստիճանում խոնավ խցիկում (ներքևում խոնավացված զտիչով փակ Պետրիի աման): Ներկվելուց հետո քսուքները լվանում են հոսող ջրով, չորացնում օդում և զննում յուղի ընկղմմամբ։
Romanovsky-Giemsa-ի գունազարդման խառնուրդը, որը հիմնված է Ռոմանովսկի Ռայթի ներկի վրա, փոշու (առևտրային ներկ) տեսքով լուծվում է մեթիլային սպիրտի և գլիցերինի հավասար ծավալների խառնուրդում (800 մգ ներկ 100 մլ-ի համար): վճարունակ): Ներկը վատ է լուծվում, ուստի ավելի լավ է այն մանրացնել լուծիչով 100 մլ-ի համար 300 մգ, այնուհետև խառնելով ավելացնել ներկը՝ մինչև ստացվի ցանկալի կոնցենտրացիան։ Ներկանյութի պատրաստումը հաճախ տեւում է մի քանի օր։ Որպես լուծիչներ կարևոր է օգտագործել քիմիապես մաքուր մեթիլ սպիրտ և գլիցերին, քանի որ կեղտը քայքայում է ներկի հատկությունները: Մեթիլ սպիրտի փոխարեն կարելի է օգտագործել 100% էթիլային սպիրտ։ Պատրաստված գունազարդման խառնուրդը պահվում է զով չոր տեղում՝ ամուր փակ տարայի մեջ։
ներկման տեխնիկա
Մեթիլ սպիրտի մեջ ամրացված քսուկները ներկվում են լուծույթով (1 մլ պատրաստի հեղուկ ներկ + 2 մլ հիմնական բուֆերային լուծույթ + 47 մլ թորած ջուր) 40-120 րոպե (ներկման տևողությունը ընտրվում է էմպիրիկ եղանակով)։ Նրանք օգտագործում են ֆոսֆատային բուֆեր, սակայն բուֆերի pH-ը կախված է քսուքի տեսակից՝ ոսկրածուծի քսուքի համար՝ 5,8 - 6,0, արյան քսուկի համար՝ 6,4 - 6,5, նախակենդանիների հայտնաբերման համար՝ 6,8, մալարիայի պլազմոդիումը՝ 7։ , 0 - 7,2.
Լվանալ թորած ջրի մեջ, չորացնել և զննել ընկղմամբ:
Գունավոր արդյունք
Բակտերիաները ներկում են մանուշակագույն-կարմիր, բջջային ցիտոպլազմը՝ կապույտ, միջուկները՝ կարմիր: Նախակենդանիների ներկման ժամանակ նրանց ցիտոպլազման դառնում է կապույտ, իսկ միջուկները՝ կարմիր-մանուշակագույն։
