FISH (fluorescence in situ hybridization) nezaobilazna je metoda u dijagnostici raka. Uz pomoć specifičnih fluorescentnih sondi, ovom metodom moguće je utvrditi prisutnost genomskih preustroja, odnosno razjasniti dijagnozu, prognozu i odabrati odgovarajuću terapiju, ovisno o konkretnom slučaju. Prije svega, ovaj pristup se koristi u onkohematološkim bolestima. Prethodno se u te svrhe koristila konvencionalna kariotipizacija, ali ako stanice pacijenta ne pokazuju izražen rast u kulturi, to ozbiljno komplicira dijagnozu ovom metodom. U tim slučajevima primjena FISH-a značajno proširuje mogućnosti laboratorijske dijagnostike. Osim toga, složene kromosomske preraspodjele lakše je protumačiti pomoću FISH-a.

Laboratorij koristi sonde za centromere, specifične regije kromosoma i gena. Odabiru se dvobojne sonde za traženje translokacija na takav način da ako su fragmenti dvaju gena koji se normalno nalaze u različitim dijelovima genoma u blizini, dva signala razne boje- iz svake sonde po jedan, spojiti u jednu koja se svjetlošću razlikuje od originalnih. Tako se, na primjer, otkrivaju BCR-ABL translokacije uobičajene među leukemijama različitih vrsta. Geni kao što su MLL, TEL i RARα mogu se preurediti u himerne gene s različitim sekvencama. U ovom slučaju, dvije sonde se približavaju različitim krajevima gena. Ako je gen netaknut, bit će jedna točka u svakoj jezgri na preparatu, ako je slomljen, bit će dvije točke različitih boja. Zbog toga je FISH fleksibilnija tehnika za otkrivanje kromosomskih translokacija od PCR-a. Sonda će sjediti na kromosomu, bez obzira na to kako je točno došlo do loma i pričvršćivanja fragmenta drugog kromosoma unutar bilo koje specifične regije, za razliku od oligonukleotida korištenih u PCR-u, koji prepoznaju specifične, iako uobičajene, preraspodjele.

Panel markera koje otkriva FISH omogućuje procjenu prognoze kronične limfoidne leukemije. Delecije 11q i 17p povezane su s lošom prognozom, dok je delecija 13q, poput normalnog kariotipa, povezana s povoljnom prognozom. S trisomijom na 12. kromosomu, slučaj se može pripisati skupini srednjeg rizika.

Kategorija rizika od mijeloma također je povezana s kombinacijom delecija i translokacija, t(4;14), t(14;16) translokacije i delecija 17p povezane su s lošom prognozom. Takve dijagnostičke studije izvode se na biopsijama crvene koštane srži nakon obogaćivanja. Lagana inverzija, popraćena stvaranjem kimernog EML4-ALK gena, karakteristična je za karcinom pluća nemalih stanica. Produkt kimernog gena cilj je ciljane terapije. Takvo se preuređenje također može detektirati metodom FISH. Amplifikacija HER2 često se procjenjuje neizravnim znakom - povećanjem razine ekspresije, koristeći za to metodu imunohistokemije, međutim, u nekim zemljama se preporučuje korištenje FISH za tu svrhu, ili barem korištenje ove metode za potvrdu.

Kratak odgovor: Metoda fluorescentne in situ hibridizacije (FISH - fluorescence in situ hybridization) uključuje korištenje jedinstvenih sekvenci nukleotida DNA kao sonde za traženje željenih sekvenci DNA u materijalu dobivenom od pacijenta. Metoda se temelji na komplementarnom vezanju DNA sonde na DNA metafaznih kromosoma ili interfaznih stanica. DNK sonda i testna DNK su denaturirane da bi se formirala jednolančana DNK. DNA sonda se dodaje kromosomskom preparatu i inkubira određeno vrijeme. Prisutnost ili odsutnost sonde obilježene fluorokromom u DNK nakon hibridizacije utvrđuje se ispitivanjem kromosoma pomoću fluorescentne mikroskopije.

Detaljan odgovor: Metoda fluorescentne hibridizacije in situ omogućuje identifikaciju pojedinačnih kromosoma ili njihovih pojedinačnih dijelova na preparatima metafaznih kromosoma ili interfaznih jezgri na temelju komplementarne interakcije DNA sonde konjugirane s fluorescentnom oznakom i željenog mjesta na kromosomu. Za vizualizaciju peptidno-nukleinskih spojeva na kromosomu koriste se PNA sonde temeljene na proteinskom produktu.
Metoda se temelji na komplementarnom vezanju DNA sonde na DNA metafaznih kromosoma ili interfaznih stanica i uključuje sljedeće korake:
1. Denaturacija dvolančane sonde DNA i ciljane DNA u jednolančane pod utjecajem visoke temperature ili kemijskih agenasa.
2. Hibridizacija DNA sonda s DNA metom po principu komplementarnosti sa stvaranjem dvolančane hibridne molekule
3. Pranje nakon hibridizacije za uklanjanje nehibridizirane DNA sonde
4. Analiza hibridizacijskih signala fluorescentnim mikroskopom

Prednosti Metode molekularne genetske dijagnostike FISH uključuju brzu analizu veliki broj stanica, visoka osjetljivost i specifičnost, mogućnost proučavanja stanica koje se ne kultiviraju i koje se ne dijele.
Mane metoda su nemogućnost dobivanja informacija o fizičko stanje DNK ili regija kromosoma koja se proučava.
FISH se koristi u prenatalnoj molekularno-genetičkoj dijagnostici i za karakterizaciju tumora; u pedijatrijskoj praksi koristi se, u pravilu, za identifikaciju submikroskopskih delecija povezanih sa specifičnim malformacijama. Sindromi temeljeni na mikrodelecijama prije su se smatrali bolestima nepoznate etiologije, budući da se kromosomske delecije i preraspodjele koje uzrokuju razvoj ovih bolesti obično ne vizualiziraju tradicionalne metode kromosomska analiza. Takve male delecije u određenim regijama kromosoma FISH može detektirati s velikom točnošću. Bolesti uzrokovane submikroskopskim delecijama uključuju Prader-Willijev, Angelmanov, Williamsov, Miller-Diekerov, Smith-Magenisov sindrom i velokardiofacijalni sindrom. FISH olakšava dijagnostiku ovih sindroma u atipičnim slučajevima, osobito u dojenačkoj dobi, kada još nema mnogih dijagnostički značajnih znakova bolesti. Primjena ove metode molekularne genetske dijagnoze također je preporučljiva u adolescenciji i odrasloj dobi, kada se tipični klinički znakovi bolesti, karakteristični za djetinjstvo, mijenjaju.

121. DNK sonde. Njihova upotreba u determinaciji nasljednih bolesti.

Kratki osvrt

DNK sonda je kratki fragment DNA konjugiran s fluoresceinom, enzimom ili radioaktivnim izotopom, koji se koristi za hibridizaciju s komplementarnom regijom ciljne molekule DNA.

Glavni dio

DNA dijagnostički sustavi

Podaci o čitavoj raznolikosti svojstava organizma sadržani su u njegovom genetskom materijalu. Dakle, patogenost bakterija određena je prisutnošću određenog gena ili skupa gena u njima, a nasljedna genetska bolest nastaje kao posljedica oštećenja određenog gena. Segment DNA koji određuje ovu biološku osobinu ima strogo definiran slijed nukleotida i može poslužiti kao dijagnostički marker.

Mnoge brze i pouzdane dijagnostičke metode temelje se na hibridizaciji nukleinske kiseline- sparivanje dvaju komplementarnih segmenata različitih molekula DNA. Postupak je općenito sljedeći.

1. Fiksacija jednolančane DNA mete na membranski filter.

2. Primjena obilježene jednolančane DNA probe, koja se pod određenim uvjetima (temperatura i ionska jakost) spaja s ciljnom DNA.

3. Pranje filtra kako bi se uklonio višak nevezane označene DNA sonde.

4. Detekcija sonda/ciljanih hibridnih molekula.

U dijagnostičkim testovima koji se temelje na hibridizaciji nukleinskih kiselina, tri su komponente ključne: DNA sonda, DNA meta i metoda detekcije hibridizacijskog signala. Sustav za otkrivanje mora biti uključen najviši stupanj specifičan i vrlo osjetljiv.

* Fluorescein (dioksifluoran, uranin A) - organski spoj, fluorescentna boja. NA analitička kemija fluorescein se koristi kao fluorescentni acidobazni indikator. u biokemiji i molekularna biologija izotiocijanatni derivati ​​fluoresceina kao biološke boje za određivanje antigena i antitijela.

* Detekcija je otkrivanje, identifikacija, pronalazak nečega.

*konjugacija=konjugacija

*Ako se mješavina DNK, na primjer, ljudske i mišje, rastali i žari u jednoj "epruveti", tada će se neki dijelovi lanaca mišje DNK rekombinirati s komplementarnim dijelovima lanaca ljudske DNK kako bi formirali hibride. Broj takvih nalazišta ovisi o stupnju srodnosti vrste. Što su vrste bliže jedna drugoj, to je više regija komplementarnih DNA lanaca. Ova pojava se zove DNA-DNA hibridizacija.

122. Metode i uvjeti za primjenu izravne DNA dijagnostike.

Kratka recenzija:

Izravnim metodama otkrivaju se poremećaji u primarnom slijedu nukleotida DNA (mutacije i njihove vrste). Izravne metode karakteriziraju točnost koja doseže gotovo 100%.

Svrha izravne dijagnostike je identificirati mutirane alele (abnormalnosti u primarnom slijedu nukleotida DNA, mutacije i njihove vrste).

Nedostatak izravne DNA dijagnostike je potreba da se zna točna lokacija gena i spektar njegovih mutacija. Metode izravne DNA dijagnostike indicirane su za bolesti kao što su fenilketonurija (mutacija R408W), cistična fibroza - (najčešća delF508 mutacija), Huntingtonova koreja (ekspanzija trinukleotidnih ponavljanja-CTG ponavljanja) itd.

Potpuni odgovor:

Izravnim metodama otkrivaju se poremećaji u primarnom slijedu nukleotida DNA (mutacije i njihove vrste). Izravne metode karakteriziraju točnost koja doseže gotovo 100%. Međutim, u praksi se ove metode mogu primijeniti pod određenim uvjetima:

1) poznata citogenetička lokalizacija gena odgovornog za nastanak nasljedne bolesti,

2) gen bolesti mora biti kloniran i njegova nukleotidna sekvenca poznata.

Svrha izravne dijagnostike je identificirati mutirane alele (abnormalnosti u primarnom slijedu nukleotida DNA, mutacije i njihove vrste). Visoka točnost izravne DNA dijagnostičke metode u većini slučajeva ne zahtijeva analizu DNA svih članova obitelji, budući da otkrivanje mutacije u odgovarajućem genu omogućuje potvrdu dijagnoze s gotovo 100%-tnom točnošću i određivanje genotipa svi članovi obitelji bolesnog djeteta, uključujući heterozigotne nositelje.

Nedostatak izravne DNA dijagnostike je potreba da se zna točna lokacija gena i spektar njegovih mutacija.

Metode izravne DNA dijagnostike indicirane su za bolesti kao što su fenilketonurija (mutacija R408W), cistična fibroza - (najčešća mutacija delF508), Huntingtonova koreja (ekspanzija trinukleotidnih ponavljanja-CTG ponavljanja) itd.

Međutim, do danas geni mnogih bolesti nisu mapirani, njihova egzon-intronska organizacija je nepoznata, a mnoge nasljedne bolesti karakterizira izrazita genetska heterogenost, što ne dopušta punu primjenu izravnih DNA dijagnostičkih metoda. Stoga informativni sadržaj metode izravne DNK dijagnostike jako varira. Dakle, u dijagnozi Huntingtonove koreje, ahondroplazije, to je 100%, s fenilketonurijom, cističnom acidozom, adrenogenitalnim sindromom - od 70 do 80%, a s Wilson-Konovalovom bolešću i Duchenne / Becker miopatijom - 45-60%. U tom smislu koriste se neizravne metode molekularne genetske dijagnostike nasljednih bolesti.

Standardni mikroskopi ne omogućuju ispitivanje stanica na molekularnoj razini. Samo snažno povećanje ovdje nije dovoljno. Potrebni su digitalna slika, dodatni reagensi i drugi materijali i instrumenti. Za analizu DNA i RNA trenutno se koristi metoda koja se naziva in situ hibridizacija. Budući da uključuje bojenje uzoraka nakon čega slijedi analiza zračenja, naziva se i fluorescentna hibridizacija ili FISH.

Fluorescentna in situ hibridizacija naširoko se koristi u genetskim istraživanjima, dijagnostici raka, vođenju trudnoće i mnogim drugim područjima znanosti. Metoda se, kao što naziv govori, temelji na svojstvu molekula DNA i RNA da stvaraju stabilne veze sa sondama, odnosno da tvore hibridne molekule. Riječi "In situ" znače da se sva promatranja vrše "in situ", odnosno izravno bez upotrebe dodatnog medija.

DNA sonde (sonde) su komplementarne molekulama u ispitnom uzorku. Oni uključuju nukleozide, koji su obilježeni fluoroforima (tvari koje molekuli daju svojstvo fluorescencije). Ova se metoda naziva izravnim označavanjem; ako se kao markeri koriste hibridne konjugirane molekule, dobiva se neizravno označavanje. Uz izravno označavanje, hibridizacija se može promatrati pod fluorescentnim mikroskopom odmah nakon njezina završetka. Za neizravno označavanje provodi se drugi postupak bojenja. Odvaja konjugirane molekule iz proučavanih uzoraka bojom.

Metoda hibridizacije s neizravnim označavanjem zahtijeva više vremena i reagensa, ali vam omogućuje postizanje pouzdanijih rezultata. Razina signala u ovom će slučaju biti veća, a osim toga, moguće je i njegovo postupno pojačanje. Klonirane DNA sekvence (PCR produkti, genomska DNA, obilježeni oligonukleotidi i drugi) koriste se kao sonde za označavanje. Označavanje sondom provodi se na nekoliko načina. Uobičajene metode su nick translacija i lančana reakcija polimerazom (PCR) s obilježenim nukleotidima.

Redoslijed postupka

In situ metoda počinje s pripremna faza- projektiranje sondi. Dimenzije sondi ne smiju biti dovoljno velike da ometaju proces istraživanja. Premale sonde također su nepoželjne jer ne jamče pouzdane rezultate. Stoga se za istraživanje uzimaju sonde veličine do 1 tisuće bp. Ako je sonda dvolančana DNA, tada se kiselina denaturira prije hibridizacije. Kada se postigne željeni rezultat (određene regije kromosoma ili svi kromosomi su obojeni), daljnja hibridizacija DNA sondi s ponavljajućim sekvencama se blokira. Da bi se to postiglo, neobilježene ponovljene molekule DNA dodaju se u hibridizacijsku smjesu.

Sljedeća faza istraživanja je priprema preparata interfaznih jezgri ili metafaznih kromosoma. Stanice se fiksiraju u podlogu na staklu, nakon čega se DNK denaturira. Da bi se smanjila temperatura denaturacije i očuvala morfologija jezgri i kromosoma, denaturacija se provodi uz dodatak formadida. Nakon toga se materijalu dodaju sonde i nekoliko sati provodi hibridizacija. Po njegovom završetku provodi se višestupanjsko ispiranje kako bi se uklonile sonde koje se nisu spojile s molekulama uzorka.

metoda hibridizacije in situ* (na mjestu, lat.) temelji se na sposobnosti DNA ili RNA da formiraju stabilne hibridne molekule s DNA / RNA sondama izravno na pripravcima fiksnih kromosoma i interfaznih jezgri. Pomoću ove metode možete odrediti točnu lokaciju gotovo bilo koje sekvence DNA ili RNA izravno u stanici, staničnoj jezgri ili kromosomima.

Za hibridizaciju. in situ prikladni citološki ili histološki pripravci stanica bilo kojeg tkiva ili organa, pripremljeni prema standardnim metodama. U kliničkom citogenetskom laboratoriju koriste se preparati uzgojenih limfocita periferne krvi, stanica citotrofoblasta korionskog epitela, kultiviranih i nekultiviranih stanica amnionske tekućine, raznih tkiva iz materijala pobačaja, kao i razmazi bukalnog epitela i krvnih stanica.

metoda hibridizacije in situ je od posebne važnosti za praktičnu citogenetiku zbog razvoja neizotopske varijante koja se temelji na upotrebi sondi obilježenih neradioaktivno modificiranim nukleotidima. Neizotopne varijante hibridizacije na preparatima (osobito fluorescentne) imaju niz prednosti u odnosu na izotopne: visoku rezoluciju, koja je jednaka rezoluciji mikroskopa (0,1 - 0,2 μm), nema potrebe za statističkom obradom rezultata, brzina i sigurnost za zdravstvene istraživače

Osim toga, kombinacija različito modificiranih uzoraka detektirana korištenjem različitim sustavima otkrivanje, omogućuje vam da istovremeno odredite položaj dvaju ili više sekvenci DNA u jednoj stanici ili na jednoj metafaznoj ploči. A korištenje ponavljajućih sekvenci obilježenih fluorokromima kao DNA sondi smanjuje vrijeme postupka na 7-9 sati (klasična neizotopna hibridizacija traje dva dana, izotopske varijante od tjedan do mjesec dana), što je posebno važno za prenatalnu dijagnostiku. Korištenje FISH metoda u citogenetskoj dijagnostici, omogućuje prepoznavanje strukturnih kromosomskih preuređivanja, utvrđivanje prirode markerskih kromosoma, analizu numeričkih kršenja skupa kromosoma, kako na metafaznim kromosomima, tako iu interfaznim jezgrama.

Princip FISH metode

U srži FISH metoda leži reakcija hibridizacije između umjetno stvorene DNA sonde i njezine komplementarne nukleotidne sekvence nuklearne DNA. Molekula DNA sastoji se od dva spiralna lanca nukleotida, a hibridizacija je moguća samo ako se lanci odvoje. Za odvajanje nukleotidnih lanaca DNK koristi se denaturacija (za naknadnu hibridizaciju, i DNK u jezgrama uzorka koji se proučava i sama DNK sonda moraju biti denaturirane). Nakon denaturacije, DNA sonda se hibridizira u svoju komplementarnu nukleotidnu sekvencu i može se detektirati pomoću fluorescentnog mikroskopa.

Na ovaj način, opći oblik protokol za postavljanje RIBA može se predstaviti u sljedećem obliku:

1. Izrada histološkog ili citološkog preparata.
Izrada histološkog preparata provodi se prema standardnoj shemi: rezanje, označavanje, ožičenje, izlijevanje, mikrotomija, stavljanje reza na predmetno staklo i deparafinizacija. Pri pripremi citološkog pripravka koriste se posebne otopine za taloženje i centrifugiranje, što omogućuje dobivanje koncentrirane stanične suspenzije.

2. Predtretman (ako je potrebno).
Preparat se obrađuje proteazama kako bi se eliminiralo prisustvo proteina koji ometaju hibridizaciju.

3. Primjena DNA sonde na preparat i naknadna denaturacija.
Kako bi se denaturirala sonda i uzorak DNA, tretiraju se formamidom i zagrijavaju na temperaturu od oko 85-90°C.

4. Hibridizacija.
Nakon denaturacije, lijek se ohladi na određenu temperaturu (37°C u slučaju kliničkih studija) i inkubira u vlažnoj komori nekoliko sati (trajanje inkubacije naznačeno je u svakom pojedinom protokolu). Trenutno se za denaturaciju i hibridizaciju koriste automatski hibridizatori.

5. Pranje.
Nakon što je hibridizacija dovršena, nevezane sonde moraju se isprati, što bi inače stvorilo pozadinu koja otežava procjenu rezultata FISH-a. Za ispiranje se obično koristi otopina koja sadrži citrat i natrijev klorid (SSC).

6. Protubojanje.
Uz pomoć fluorescentnih boja (DAPI - 4,6-diamidin-2-fenilindol; propidij jodid) boji se sva jezgrina DNA.

7. Analiza rezultata pomoću fluorescentnog mikroskopa. Rutinske operacije (deparafinizacija, prethodna obrada, pranje) mogu se automatizirati.

* - Materijal je pripremljen na temelju informacija iz otvorenih izvora.

Metoda određivanja fluorescentna in situ hibridizacija.

Materijal koji se proučava Vidi u opisu

Moguć kućni posjet

Studija se koristi za odabir pojedinačne adjuvantne kemoterapije za rak dojke ili rak želuca.

Rak dojke (BC) zauzima prvo mjesto među onkološkim bolestima u žena. Stanice raka dojke mogu sadržavati različiti tipovi receptore koji su osjetljivi na određene tvari (hormone ili druge biološki aktivne molekule). Ovisno o prisutnosti hormonskih receptora (estrogena i progesterona) ili receptora humanog epidermalnog faktora rasta tipa 2 (Human Epidermal Growth Factor Receptor 2, HER2) u tumorskim stanicama, izdvajaju se hormon-receptor-pozitivan, HER2-pozitivan i trostruko negativan rak dojke . To je važno uzeti u obzir pri individualnom odabiru terapije i predviđanju uspjeha liječenja.

HER2 je receptor koji je prisutan u tkivima i normalno sudjeluje u regulaciji diobe i diferencijacije stanica. Njegov višak na površini tumorskih stanica (hiperekspresija) unaprijed određuje brzi nekontrolirani rast tumora, visok rizik od metastaza i nisku učinkovitost nekih vrsta liječenja. Hiperekspresija HER2 u nekim podtipovima raka dojke dovodi do povećane proliferacije i angiogeneze, kao i do disregulacije apoptoze (genetski programiranog samouništenja stanica). Trenutno postoje lijekovi koji ciljaju na HER2 receptor. To je, posebice, Herceptin (trastuzumab), koji je monoklonsko protutijelo protiv HER2/neu receptora.

Amplifikacija i prekomjerna ekspresija onkogena HER2 (ErbB-2) relativno su specifični događaji za karcinom dojke i praktički se ne pojavljuju u tumorima drugih lokalizacija. Rak želuca (GC) jedna je od rijetkih iznimaka: aktivacija HER2 zabilježena je u oko 10-15% slučajeva malignih neoplazmi ovog organa i korelira s agresivnim tijekom bolesti. Kod HER2 pozitivnog raka dojke, višak HER2 receptora može biti prisutan na površini tumorskih stanica (nazivaju se HER2 pozitivnim ili Hercept pozitivnim). Ovaj fenomen se opaža kod 15-20% žena koje boluju od raka dojke. Procjena statusa HER2 važna je za određivanje taktike liječenja.

Glavne standardizirane metode za otkrivanje prekomjerne ekspresije HER2/neu i/ili pojačanja gena HER2/neu su imunohistokemijska (IHC) metoda i fluorescentna in situ hibridizacija (FISH). Obje studije se provode na histološkim preparatima (presjeci tumorskog materijala uklopljeni u parafin) pomoću poliklonskih antitijela (IHC), fluorescentnih sondi (FISH) i različitih sustava za oslikavanje.

Pri procjeni rezultata IHC reakcije ekspresija se uzima u obzir samo u invazivnoj komponenti tumora. Rezultati reakcije ocjenjuju se pomoću bodovne ljestvice: 0, 1+, 2+, 3+, koju je razvio proizvođač testa i odobrili stručnjaci. Status Hercepta, ocijenjen kao 0 i 1+, treba smatrati negativnim - nema prekomjerne ekspresije proteina, što je u korelaciji s odsutnošću amplifikacije njegovog gena. Hercept status, ocijenjen s 3+, je pozitivan, tj. prisutna je prekomjerna ekspresija proteina, što je u skladu s prisutnošću amplifikacije gena. Hercept status 2+ smatra se neodređenim, tj. ekspresija proteina određena na temelju imunohistokemijske reakcije ne može se pouzdano ocijeniti o umnažanju gena, stoga je potrebna studija koja izravno otkriva prisutnost ili odsutnost umnažanja. FISH metoda koristi se na presjecima iz istog uzorka (bloka) na kojem je obavljena imunohistokemijska studija. U hibridizaciji FISH, prisutnost amplifikacije HER2 gena procjenjuje se brojanjem omjera crvenih fluorescentnih (koji odgovaraju označenim HER2 genima) i zelenih fluorescentnih signala koji označavaju centromerno područje 17. kromosoma. Omjer veći od 2 ukazuje na prisutnost amplifikacije HER2. FISH metoda je osjetljivija od IHC metode, jer vam omogućuje izravnu procjenu prisutnosti ili odsutnosti pojačanja.

Materijal za istraživanje: parafinski blok s biopsijom tumora.

Pažnja! OBAVEZNO:

• staklo s IHC-bojanjem s antitijelima na HER2/neu
• uputnica liječnika ili izvadak s rezultatima histološke i IHC studije s protutijelima na Her-2/neu

Književnost

• Zavalishina L.E., Frank G.A. Morfološka studija statusa HER2. Metodologija i atlas. - M.: ur. Media Medica. 2006:98.
• Maligne bolesti u Rusiji u 2011. godini (morbiditet i mortalitet). ur. U I. Chissova, V.V. Starinsky, G.V. Petrova. - M.: FGBU "MNIOI im. godišnje Herzen" Ministarstva zdravlja Rusije. 2013: 289.
• Onkologija. Kliničke smjernice. Udruga onkologa Rusije. ur. U I. Chissova, S.L. Darjalova. - M.: ur. "GEOTAR-Media". 2008:702.
• Bang Y.J., Van Cutsem E., Feyereislova A., Chung H.C., Shen L., Sawaki A. et al. Trastuzumab u kombinaciji s kemoterapijom nasuprot samoj kemoterapiji za liječenje HER2-pozitivnog uznapredovalog raka želuca ili gastroezofagealnog spoja (ToGA): faza 3, otvoreno, randomizirano kontrolirano ispitivanje. Lanceta. 2010;376:687-697.
• Dabbs D.J. Dijagnostička imunohistokemija: Teranostičke i genomske primjene. Elsevier, 4. izdanje. 2013:960.
• Ferlay J., Shin H.R., Bray F., Forman D., Mathers C., Parkin D.M. GLOBOCAN 2008, Učestalost raka i smrtnost u svijetu: IARC Cancer Base br. 10. Lyon, Francuska: Međunarodna agencija za istraživanje raka; 2010. Dostupno na: http://globocan.iarc.fr.
• Goldhirsch A., Glick J.H., Gelber R.D., Coates A.S., Thurlimann B., Senn H.J. Istaknuto sa sastanka: Konsenzus međunarodnih stručnjaka o primarnoj terapiji ranog raka dojke 2005. Annals of Oncology. 2005;16(10):1569-1583.
• Kurman R.J., Carcangiu M.L., Herrington C.S., Young R.H. WHO klasifikacija tumora ženskih reproduktivnih organa. WHO Press, 4. izdanje. 2014;4:316.
• NordiQC. http://www.nordiqc.org.
• Park D.I., Yun J.W., Park J.H. et al. Amplifikacija Her2/neu neovisni je prognostički čimbenik kod raka želuca. Probavne bolesti i znanosti. 2006;51(8):1371-1379.
• Slamon D. i sur. Adjuvant Trastuzumab u HER2-pozitivnom raku dojke. The New England Journal of Medicine. 2011;365:1273-1283.