FISH (fluorescencijska in situ hibridizacija) je nezamjenjiva metoda u dijagnostici raka. Uz pomoć specifičnih fluorescentnih sondi, ova metoda omogućava utvrđivanje prisutnosti genomskih preuređivanja, odnosno pojašnjavanje dijagnoze, pojašnjavanje prognoze i odabir odgovarajuće terapije, ovisno o konkretnom slučaju. Prije svega, ovaj pristup se koristi kod onkohematoloških bolesti. Ranije se u te svrhe koristila konvencionalna kariotipizacija, ali ako stanice pacijenta ne pokazuju izražen rast u kulturi, to ozbiljno otežava dijagnozu ovom metodom. U ovim slučajevima upotreba FISH-a značajno proširuje mogućnosti laboratorijske dijagnostike. Osim toga, složene kromosomske preuređenja je lakše interpretirati korištenjem FISH-a.

Laboratorija koristi sonde za centromere, specifične regije hromozoma i gena. Dvobojne sonde se biraju da traže translokacije na način da ako su u blizini fragmenti dva gena koji se inače nalaze u različitim dijelovima genoma, dva signala razne boje- po jedan iz svake sonde, spojite u onu koja se po svjetlu razlikuje od originalnih. Tako se, na primjer, otkrivaju BCR-ABL translokacije uobičajene među leukemijama različitih tipova. Geni kao što su MLL, TEL i RARα mogu se preurediti kako bi formirali himerne gene sa različitim sekvencama. U ovom slučaju, dvije sonde se približavaju različitim krajevima gena. Ako je gen netaknut, na preparatu će biti jedna tačka u svakom jezgru; ako je polomljen, biće dvije tačke različite boje. Zbog toga je FISH fleksibilnija tehnika za detekciju kromosomskih translokacija od PCR-a. Sonda će sjediti na hromozomu, bez obzira na to kako je tačno došlo do prekida i vezivanja fragmenta drugog hromozoma unutar određenog regiona, za razliku od oligonukleotida koji se koriste u PCR-u, koji prepoznaju specifične, iako uobičajene, preraspodjele.

Panel markera koje detektuje FISH omogućava procjenu prognoze kronične limfoidne leukemije. Delecije 11q i 17p su povezane sa lošom prognozom, dok je 13q delecija, poput normalnog kariotipa, povezana sa povoljnom prognozom. Sa trizomijom na hromozomu 12, slučaj se može pripisati grupi srednjeg rizika.

Kategorija rizika od mijeloma je takođe povezana sa kombinacijom delecija i translokacija, t(4;14), t(14;16) translokacije i 17p delecija su povezane sa lošom prognozom. Takve dijagnostičke studije se izvode na biopsijama crvene koštane srži nakon obogaćivanja. Lagana inverzija, praćena formiranjem himernog EML4-ALK gena, karakteristična je za karcinom pluća ne-malih ćelija. Produkt himernog gena je meta ciljane terapije. Takvo preuređenje se može otkriti i FISH metodom. Amplifikacija HER2 se često procjenjuje indirektnim znakom - povećanjem nivoa ekspresije, koristeći za to metodu imunohistohemije, međutim, u nekim zemljama se preporučuje korištenje FISH-a u tu svrhu ili barem korištenje ove metode za potvrdu.

Kratak odgovor: Metoda fluorescencione in situ hibridizacije (FISH - fluorescence in situ hybridization) uključuje upotrebu jedinstvenih DNK nukleotidnih sekvenci kao sonde za traženje željenih DNK sekvenci u materijalu dobijenom od pacijenta. Metoda se zasniva na komplementarnom vezivanju DNK sonde za DNK metafaznih hromozoma ili interfaznih ćelija. DNK sonda i test DNK su denaturirani kako bi se formirala jednolančana DNK. DNK sonda se dodaje u preparat hromozoma i inkubira određeno vreme. Prisustvo ili odsustvo sonde označene fluorohromom u DNK nakon hibridizacije utvrđuje se ispitivanjem hromozoma pomoću fluorescentne mikroskopije.

Detaljan odgovor: Metoda fluorescentne hibridizacije in situ omogućava vam da identifikujete pojedinačne hromozome ili njihove pojedinačne delove na preparatima metafaznih hromozoma ili interfaznih jezgara na osnovu komplementarne interakcije DNK sonde konjugirane sa fluorescentnom oznakom i željenog mesta na hromozomu. Za vizualizaciju peptidno-nukleinskih spojeva na hromozomu koriste se PNA sonde na bazi proteinskog proizvoda.
Metoda se zasniva na komplementarnom vezivanju DNK sonde za DNK metafaznih hromozoma ili interfaznih stanica i uključuje sljedeće korake:
1. Denaturacija Dvolančana probna DNK i ciljna DNK do jednolančane pod uticajem visoke temperature ili hemijskih agenasa.
2. Hibridizacija DNK sonda sa DNK metom po principu komplementarnosti sa formiranjem dvolančane hibridne molekule
3. Pranje nakon hibridizacije za uklanjanje nehibridizovane DNK sonde
4. Analiza hibridizacijskim signalima sa fluorescentnim mikroskopom

Prednosti FISH molekularne genetičke dijagnostičke metode uključuju brzu analizu veliki brojćelije, visoka osjetljivost i specifičnost, sposobnost proučavanja ćelija koje se ne uzgajaju i koje se ne dijele.
Nedostaci metoda su nemogućnost dobijanja informacija o psihičko stanje DNK ili hromozomska regija koja se proučava.
FISH se koristi u prenatalnoj molekularnoj genetičkoj dijagnostici i za karakterizaciju tumora; u pedijatrijskoj praksi se u pravilu koristi za identifikaciju submikroskopskih delecija povezanih sa specifičnim malformacijama. Sindromi bazirani na mikrodelecijama ranije su se smatrali bolestima nepoznate etiologije, budući da se hromozomska brisanja i rearanžmani koji uzrokuju razvoj ovih bolesti obično ne vizualiziraju kod tradicionalne metode hromozomska analiza. Takve male delecije u specifičnim regijama hromozoma mogu se otkriti sa velikom preciznošću pomoću FISH-a. Bolesti uzrokovane submikroskopskim brisanjem uključuju Prader-Willi, Angelman, Williams, Miller-Dieker, Smith-Magenis sindrom i velokardiofacijalni sindrom. FISH olakšava dijagnozu ovih sindroma u atipičnim slučajevima, posebno u djetinjstvu, kada još uvijek nema mnogo dijagnostički značajnih znakova bolesti. Upotreba ove metode molekularne genetičke dijagnoze preporučljiva je i u adolescenciji i odrasloj dobi, kada se mijenjaju tipični klinički znaci bolesti, karakteristični za djetinjstvo.

121. DNK sonde. Njihova upotreba u određivanju nasljednih bolesti.

Kratka recenzija

DNK sonda jeste kratki fragment DNK konjugiran sa fluoresceinom, enzimom ili radioaktivnim izotopom, koji se koristi za hibridizaciju sa komplementarnom regijom ciljne DNK molekule.

Glavni dio

DNK dijagnostički sistemi

Informacije o čitavom nizu svojstava organizma sadržane su u njegovom genetskom materijalu. Dakle, patogenost bakterija određena je prisustvom određenog gena ili skupa gena u njima, a nasljedna genetska bolest nastaje kao posljedica oštećenja određenog gena. Segment DNK koji određuje ovu biološku osobinu ima strogo definiranu sekvencu nukleotida i može poslužiti kao dijagnostički marker.

Mnoge brze i pouzdane dijagnostičke metode temelje se na hibridizaciji nukleinske kiseline- uparivanje dva komplementarna segmenta različitih molekula DNK. Općenito, procedura je sljedeća.

1. Fiksacija jednolančane DNK mete na membranskom filteru.

2. Primena obeležene jednolančane DNK sonde, koja se, pod određenim uslovima (temperatura i jonska snaga), uparuje sa ciljnom DNK.

3. Ispiranje filtera da se ukloni višak nevezane označene DNK sonde.

4. Detekcija hibridnih molekula sonde/cilja.

U dijagnostičkim testovima zasnovanim na hibridizaciji nukleinske kiseline ključne su tri komponente: DNK sonda, DNK meta i metoda detekcije signala hibridizacije. Sistem za detekciju mora biti uključen najviši stepen specifična i vrlo osjetljiva.

* Fluorescein (dioksifluoran, uranin A) - organsko jedinjenje, fluorescentna boja. U analitičkoj hemiji, fluorescein se koristi kao luminiscentni acid-bazni indikator. u biohemiji i molekularna biologija izotiocijanatni derivati ​​fluoresceina kao biološke boje za određivanje antigena i antitijela.

* Detekcija je otkrivanje, identifikacija, pronalaženje nečega.

*konjugacija=konjugacija

*Ako se mješavina DNK, na primjer, ljudske i mišje, otopi i žari u jednoj "epruveti", tada će se neki dijelovi mišjeg DNK lanaca rekombinovati s komplementarnim dijelovima lanaca ljudske DNK i formirati hibride. Broj takvih mjesta ovisi o stepenu srodnosti vrsta. Što su vrste bliže jedna drugoj, to je više regiona komplementarnosti lanaca DNK. Ovaj fenomen se zove DNK-DNK hibridizacija.

122. Metode i uslovi za upotrebu direktne DNK dijagnostike.

Kratka recenzija:

Direktnim metodama otkrivaju se poremećaji u primarnoj sekvenci nukleotida DNK (mutacije i njihovi tipovi). Direktne metode karakteriziraju preciznost koja dostiže gotovo 100%.

Svrha direktne dijagnostike je identifikacija mutantnih alela (abnormalnosti u primarnoj sekvenci nukleotida DNK, mutacije i njihovi tipovi).

Nedostatak direktne DNK dijagnostike je potreba da se zna tačna lokacija gena i spektar njegovih mutacija. Metode direktne DNK dijagnostike su indicirane za bolesti kao što su fenilketonurija (mutacija R408W), cistična fibroza - (najčešća mutacija delF508), Huntingtonova horeja (ekspanzija trinukleotidnih ponavljanja-CTG ponavljanja) itd.

Potpuni odgovor:

Direktnim metodama otkrivaju se poremećaji u primarnoj sekvenci nukleotida DNK (mutacije i njihovi tipovi). Direktne metode karakteriziraju preciznost koja dostiže gotovo 100%. Međutim, u praksi se ove metode mogu primijeniti pod određenim uvjetima:

1) poznata citogenetska lokalizacija gena odgovornog za nastanak nasljedne bolesti,

2) gen bolesti mora biti kloniran i poznata njegova nukleotidna sekvenca.

Svrha direktne dijagnostike je identifikacija mutantnih alela (abnormalnosti u primarnoj sekvenci nukleotida DNK, mutacije i njihovi tipovi). Visoka tačnost direktne DNK dijagnostičke metode u većini slučajeva ne zahtijeva analizu DNK svih članova porodice, jer otkrivanje mutacije u odgovarajućem genu omogućava da se sa gotovo 100% tačnosti potvrdi dijagnoza i odredi genotip. svi članovi porodice bolesnog djeteta, uključujući heterozigotne nosioce.

Nedostatak direktne DNK dijagnostike je potreba da se zna tačna lokacija gena i spektar njegovih mutacija.

Metode direktne DNK dijagnostike su indicirane za bolesti kao što su fenilketonurija (mutacija R408W), cistična fibroza - (najčešća mutacija delF508), Huntingtonova horeja (ekspanzija trinukleotidnih ponavljanja-CTG ponavljanja) itd.

Međutim, do danas geni mnogih bolesti nisu mapirani, njihova egzon-intronska organizacija je nepoznata, a mnoge nasljedne bolesti karakterizira naglašena genetska heterogenost, što ne dozvoljava puno korištenje direktnih dijagnostičkih metoda DNK. Stoga, sadržaj informacija metode direktne DNK dijagnostike uvelike varira. Dakle, u dijagnozi Huntingtonove horeje, ahondroplazije, ona je 100%, kod fenilketonurije, cistične acidoze, adrenogenitalnog sindroma - od 70 do 80%, a kod Wilson-Konovalovove bolesti i Duchenne/Beckerove miopatije - 45-60%. U tom smislu koriste se indirektne metode molekularne genetske dijagnoze nasljednih bolesti.

Standardni mikroskopi ne omogućavaju ispitivanje ćelija na molekularnom nivou. Samo snažno povećanje ovdje nije dovoljno. Potrebna je digitalna slika, dodatni reagensi i drugi materijali i instrumenti. Za analizu DNK i RNK trenutno se koristi metoda koja se zove In situ hibridizacija. Budući da uključuje bojenje uzoraka nakon čega slijedi analiza zračenja, naziva se i fluorescentna hibridizacija ili FISH.

Fluorescentna in situ hibridizacija se široko koristi u genetskim istraživanjima, dijagnostici raka, upravljanju trudnoćom i mnogim drugim područjima nauke. Metoda se, kao što naziv kaže, zasniva na svojstvu molekula DNK i RNK da formiraju stabilne veze sa sondama, odnosno da formiraju hibridne molekule. Riječi "In situ" znače da se sva opažanja vrše "in situ", odnosno direktno bez upotrebe dodatnog medija.

DNK sonde (sonde) su komplementarne molekulima u uzorku za testiranje. Oni uključuju nukleozide, koji su označeni fluoroforima (supstance koje daju molekulu svojstvo fluorescencije). Ova metoda se naziva direktno označavanje; ako se hibridni konjugirani molekuli koriste kao markeri, dobiva se indirektno obilježavanje. Sa direktnim obeležavanjem, hibridizacija se može posmatrati pod fluorescentnim mikroskopom odmah nakon njenog završetka. Za indirektno označavanje izvodi se još jedan postupak bojenja. Odvaja konjugirane molekule od proučavanih uzoraka po boji.

Metoda hibridizacije s indirektnim označavanjem zahtijeva više vremena i reagensa, ali omogućava postizanje pouzdanijih rezultata. Nivo signala će u ovom slučaju biti veći, a osim toga moguće je i njegovo postupno pojačanje. Klonirane DNK sekvence (PCR proizvodi, genomska DNK, obilježeni oligonukleotidi i drugi) se koriste kao sonde za obilježavanje. Označavanje sonde se izvodi na nekoliko načina. Uobičajene metode su nick translacija i lančana reakcija polimeraze (PCR) s obilježenim nukleotidima.

Redosled postupka

In situ metoda počinje sa pripremna faza- projektovanje sondi. Dimenzije sondi ne bi trebale biti dovoljno velike da ometaju proces istraživanja. Sonde koje su premale su takođe nepoželjne, jer ne garantuju pouzdane rezultate. Stoga se za istraživanje uzimaju sonde veličine do 1.000 bp. Ako je sonda dvolančana DNK, tada se kiselina denaturira prije hibridizacije. Kada se dobije željeni rezultat (određeni regioni hromozoma ili svi hromozomi su obojeni), dalja hibridizacija DNK sondi sa sekvencama koje se ponavljaju se blokira. Da bi se to postiglo, neobilježeni ponovljeni molekuli DNK se dodaju hibridizacijskoj smjesi.

Sljedeća faza istraživanja je priprema preparata interfaznih jezgara ili metafaznih hromozoma. Ćelije se fiksiraju u supstratu na staklu, nakon čega se DNK denaturira. Da bi se smanjila temperatura denaturacije i očuvala morfologija jezgara i hromozoma, denaturacija se provodi uz dodatak formadida. Nakon toga se u materijal dodaju sonde i hibridizacija se izvodi nekoliko sati. Po završetku, vrši se višestepeno pranje kako bi se uklonile sonde koje nisu povezane s molekulama uzorka.

metoda hibridizacije in situ* (na mestu, lat.) zasniva se na sposobnosti DNK ili RNK da formiraju stabilne hibridne molekule sa DNK/RNA sondama direktno na preparatima fiksnih hromozoma i interfaznih jezgara. Koristeći ovu metodu, možete odrediti tačnu lokaciju gotovo bilo koje DNK ili RNK sekvence direktno u ćeliji, ćelijskom jezgru ili kromosomima.

Za hibridizaciju. in situ odgovarajući citološki ili histološki preparati ćelija bilo kojeg tkiva ili organa, pripremljeni prema standardnim metodama. U kliničkoj citogenetskoj laboratoriji koriste se preparati kultiviranih limfocita periferne krvi, ćelija citotrofoblasta korionskog epitela, kultivisane i nekultivisane ćelije amnionske tekućine, različita tkiva iz abortusnog materijala, kao i razmazi bukalnog epitela i krvnih stanica.

metoda hibridizacije in situ je od posebnog značaja za praktičnu citogenetiku zbog razvoja ne-izotopske varijante zasnovane na upotrebi sondi obeleženih neradioaktivnim modifikovanim nukleotidima. Neizotopske varijante hibridizacije na preparatima (posebno fluorescentnim) imaju niz prednosti u odnosu na izotopske: visoka rezolucija, koja je jednaka rezoluciji mikroskopa (0,1 - 0,2 μm), nema potrebe za statističkom obradom rezultata, brzina i sigurnost za zdravstvene istraživače

Osim toga, kombinacija različito modificiranih uzoraka otkrivena korištenjem različiti sistemi detekcija, omogućava vam da istovremeno odredite lokaciju dvije ili više DNK sekvenci u jednoj ćeliji ili na jednoj metafaznoj ploči. A korištenje ponavljajućih sekvenci označenih fluorohromima kao DNK sondi skraćuje vrijeme procedure na 7-9 sati (klasična ne-izotopna hibridizacija traje dva dana, izotopske varijante od tjedan do mjesec dana), što je posebno važno za prenatalnu dijagnozu. Upotreba FISH metoda u citogenetskoj dijagnostici omogućava identifikaciju strukturnih hromozomskih preuređivanja, utvrđivanje prirode markerskih hromozoma i analizu numeričkih poremećaja hromozomskog seta, kako na metafaznim hromozomima tako i u interfaznim jezgrama.

Princip FISH metode

U srži FISH metoda leži u reakciji hibridizacije između umjetno stvorene DNK sonde i njene komplementarne nukleotidne sekvence nuklearne DNK. Molekul DNK se sastoji od dva spiralna nukleotidna lanca, a hibridizacija je moguća samo ako se lanci razdvoje. Da bi se odvojili nukleotidni lanci DNK, koristi se denaturacija (za naknadnu hibridizaciju, i DNK u jezgrima uzorka koji se proučava i sama DNK sonda moraju biti denaturirani). Nakon denaturacije, DNK sonda hibridizira sa svojom komplementarnom sekvencom nukleotida i može se otkriti pomoću fluorescentnog mikroskopa.

Na ovaj način, opšti oblik protokol za podešavanje RIBA može se predstaviti u sljedećem obliku:

1. Priprema histološkog ili citološkog preparata.
Priprema histološkog preparata provodi se prema standardnoj shemi: rezanje, označavanje, ožičenje, izlijevanje, mikrotomija, stavljanje reza na predmetno staklo i deparafinizacija. Prilikom pripreme citološkog preparata koriste se posebne otopine za taloženje i centrifugiranje, što omogućava dobivanje koncentrirane suspenzije stanica.

2. Predtretman (ako je potrebno).
Preparat se obrađuje proteazama kako bi se eliminisalo prisustvo proteina koji ometaju hibridizaciju.

3. Primjena DNK sonde na preparat i naknadna denaturacija.
Da bi se denaturirala sonda i DNK uzorka, oni se tretiraju formamidom i zagrijavaju na temperaturu od oko 85-90°C.

4. Hibridizacija.
Nakon denaturacije, lijek se ohladi na određenu temperaturu (37°C u slučaju kliničkih studija) i inkubira u vlažnoj komori nekoliko sati (trajanje inkubacije je naznačeno u svakom posebnom protokolu). Trenutno se za denaturaciju i hibridizaciju koriste automatski hibridizatori.

5. Pranje.
Kada se hibridizacija završi, nevezane sonde moraju biti isprane, što bi inače stvorilo pozadinu koja otežava procjenu FISH rezultata. Za ispiranje se obično koristi otopina koja sadrži citrat i natrijum hlorid (SSC).

6. Protiv bojenje.
Uz pomoć fluorescentnih boja (DAPI - 4,6-diamidin-2-fenilindol; propidijum jodid), sva nuklearna DNK je obojena.

7. Analiza rezultata pomoću fluorescentnog mikroskopa. Rutinske operacije (deparatizacija, predtretman, pranje) mogu se automatizirati.

* - Materijal je pripremljen na osnovu informacija iz otvorenih izvora.

Metoda određivanja fluorescentna in situ hibridizacija.

Materijal koji se proučava Vidi u opisu

Mogućnost kućne posjete

Studija se koristi za odabir individualne adjuvantne kemoterapije za rak dojke ili rak želuca.

Rak dojke (BC) zauzima prvo mjesto među onkološkim bolestima kod žena. Ćelije raka dojke mogu sadržavati različite vrste receptore koji su osjetljivi na određene tvari (hormone ili druge biološki aktivne molekule). Ovisno o prisutnosti hormonskih receptora (estrogena i progesterona) ili receptora humanog epidermalnog faktora rasta tipa 2 (Human Epidermal Growth Factor Receptor 2, HER2) u tumorskim stanicama, izoluju se hormonski receptor pozitivni, HER2 pozitivni i trostruko negativni karcinom dojke. . Ovo je važno uzeti u obzir pri individualnom odabiru terapije i za predviđanje uspjeha liječenja.

HER2 je receptor koji je prisutan u tkivima i normalno, učestvuje u regulaciji diobe i diferencijacije ćelija. Njegov višak na površini tumorskih ćelija (hiperekspresija) predodređuje brzi nekontrolisani rast tumora, visok rizik od metastaza i nisku efikasnost nekih vrsta lečenja. Hiperekspresija HER2 kod nekih podtipova raka dojke dovodi do povećane proliferacije i angiogeneze, kao i do disregulacije apoptoze (genetski programirano samouništenje ćelija). Trenutno postoje lijekovi koji ciljaju na HER2 receptor. To je posebno Herceptin (trastuzumab), koji je monoklonsko antitijelo protiv HER2/neu receptora.

Amplifikacija i prekomjerna ekspresija onkogena HER2 (ErbB-2) su relativno specifični događaji za karcinom dojke i praktično se ne javljaju kod tumora drugih lokalizacija. Rak želuca (GC) je jedan od rijetkih izuzetaka: aktivacija HER2 je zabilježena u otprilike 10-15% slučajeva malignih neoplazmi ovog organa i korelira s agresivnim tokom bolesti. Kod HER2-pozitivnog karcinoma dojke, višak HER2 receptora može biti prisutan na površini tumorskih ćelija (koji se nazivaju HER2 pozitivni ili Hercept pozitivni). Ovaj fenomen se opaža kod 15-20% žena koje boluju od raka dojke. Procjena HER2 statusa je važna za određivanje taktike liječenja.

Glavne standardizovane metode za otkrivanje prekomerne ekspresije HER2/neu i/ili amplifikacije HER2/neu gena su imunohistohemijska (IHC) metoda i fluorescentna in situ hibridizacija (FISH). Obje studije se izvode na histološkim preparatima (presjeci tumorskog materijala ugrađeni u parafin) korištenjem poliklonskih antitijela (IHC), fluorescentnih sondi (FISH) i različitih sistema za snimanje.

Prilikom procjene rezultata IHC reakcije, ekspresija se uzima u obzir samo u invazivnoj komponenti tumora. Rezultati reakcije se ocjenjuju pomoću bodovne skale: 0, 1+, 2+, 3+, koju je razvio proizvođač testa i odobrili stručnjaci. Hercept status, ocijenjen kao 0 i 1+, treba smatrati negativnim - nema prekomjerne ekspresije proteina, što je u korelaciji s odsustvom amplifikacije njegovog gena. Hercept status, ocijenjen sa 3+, je pozitivan, tj. prisutna je prekomjerna ekspresija proteina, u skladu s prisustvom amplifikacije gena. Hercept status 2+ smatra se neodređenim, tj. ekspresija proteina određena na osnovu imunohistohemijske reakcije ne može se pouzdano suditi o amplifikaciji gena, stoga je potrebna studija koja direktno otkriva prisustvo ili odsustvo amplifikacije. FISH metoda se koristi na rezovima iz istog uzorka (bloka) na kojem je rađena imunohistohemijska studija. U FISH hibridizaciji, prisustvo amplifikacije HER2 gena se procjenjuje prebrojavanjem omjera crvenih fluorescentnih (koja odgovara obilježenim HER2 genima) i zelenih fluorescentnih signala koji obilježavaju centromernu regiju 17. hromozoma. Omjer veći od 2 ukazuje na prisustvo HER2 amplifikacije. FISH metoda je osjetljivija od IHC metode, jer vam omogućava direktnu procjenu prisutnosti ili odsustva amplifikacije.

Materijal za istraživanje: parafinski blok sa biopsijom tumora.

Pažnja! OBAVEZNO:

• stakleni predmet sa IHC bojenjem sa antitelima na HER2/neu
• uputnica od ljekara ili izvod sa rezultatima histološke i IHC studije s antitijelima na Her-2/neu

Književnost

• Zavalishina L.E., Frank G.A. Morfološka studija HER2 statusa. Metodologija i atlas. - M.: Ed. Media Medica. 2006:98.
• Maligne bolesti u Rusiji 2011. (morbiditet i mortalitet). Ed. IN AND. Chissova, V.V. Starinski, G.V. Petrova. - M.: FGBU „MNIOI im. P.A. Herzen" Ministarstva zdravlja Rusije. 2013:289.
• Onkologija. Kliničke smjernice. Udruženje onkologa Rusije. Ed. IN AND. Chissova, S.L. Daryalova. - M.: Ed. "GEOTAR-Media". 2008:702.
• Bang Y.J., Van Cutsem E., Feyereislova A., Chung H.C., Shen L., Sawaki A. et al. Trastuzumab u kombinaciji s kemoterapijom u odnosu na samo kemoterapiju za liječenje HER2-pozitivnog uznapredovalog karcinoma želuca ili gastroezofagealnog spoja (ToGA): faza 3, otvoreno, randomizirano kontrolirano ispitivanje. Lancet. 2010;376:687-697.
• Dabbs D.J. Dijagnostička imunohistohemija: Theranostic and Genomic Applications. Elsevier, 4. izdanje. 2013:960.
• Ferlay J., Shin H.R., Bray F., Forman D., Mathers C., Parkin D.M. GLOBOCAN 2008, Incidencija i smrtnost od raka širom svijeta: IARC baza za rak br. 10. Lyon, Francuska: Međunarodna agencija za istraživanje raka; 2010. Dostupno na: http://globocan.iarc.fr.
• Goldhirsch A., Glick J.H., Gelber R.D., Coates A.S., Thurlimann B., Senn H.J. Izdvajamo sa sastanka: Međunarodni konsenzus stručnjaka o primarnoj terapiji ranog raka dojke 2005. Annals of Oncology. 2005;16(10):1569-1583.
• Kurman R.J., Carcangiu M.L., Herrington C.S., Young R.H. Klasifikacija tumora ženskih reproduktivnih organa SZO. WHO Press, 4. izdanje. 2014;4:316.
• NordiQC. http://www.nordiqc.org.
• Park D.I., Yun J.W., Park J.H. et al. Her2/neu amplifikacija je nezavisni prognostički faktor u karcinomu želuca. Probavne bolesti i nauke. 2006;51(8):1371-1379.
• Slamon D. et al. Adjuvans Trastuzumab u HER2-pozitivnom karcinomu dojke. The New England Journal of Medicine. 2011;365:1273-1283.