FISH (hibridarea fluorescentă in situ) este o metodă indispensabilă în diagnosticul cancerului. Cu ajutorul sondelor fluorescente specifice, această metodă face posibilă identificarea prezenței rearanjamentelor genomice, adică clarificarea diagnosticului, clarificarea prognosticului și selectarea terapiei adecvate, în funcție de cazul specific. În primul rând, această abordare este utilizată în bolile oncohematologice. Anterior, cariotipul convențional a fost folosit în aceste scopuri, dar dacă celulele pacientului nu prezintă o creștere pronunțată în cultură, acest lucru complică serios diagnosticul prin această metodă. În aceste cazuri, utilizarea FISH extinde semnificativ posibilitățile de diagnosticare de laborator. În plus, rearanjamentele cromozomiale complexe sunt mai ușor de interpretat folosind FISH.

Laboratorul folosește sonde pentru centromeri, regiuni specifice ale cromozomilor și gene. Sondele cu două culori sunt selectate pentru a căuta translocări în așa fel încât, dacă fragmentele a două gene care sunt în mod normal situate în părți diferite ale genomului sunt în apropiere, două semnale diverse culori- câte una din fiecare sondă, se îmbină într-una care diferă ca lumină de cele originale. Deci, de exemplu, sunt detectate translocații BCR-ABL comune în rândul leucemiilor de diferite tipuri. Genele precum MLL, TEL și RARα se pot rearanja pentru a forma gene himerice cu secvențe diferite. În acest caz, două sonde sunt abordate la capete diferite ale genei. Dacă gena este intactă, va exista câte un punct în fiecare nucleu de pe preparat; dacă este ruptă, vor exista două puncte de culori diferite. Datorită acestui fapt, FISH este o tehnică mai flexibilă pentru detectarea translocațiilor cromozomiale decât PCR. Sonda va sta pe cromozom, indiferent de modul în care exact ruperea și atașarea unui fragment al altui cromozom au avut loc într-o anumită regiune, spre deosebire de oligonucleotidele utilizate în PCR, care recunosc rearanjamente specifice, deși comune.

Panoul de markeri detectați de FISH permite evaluarea prognosticului în leucemia limfoidă cronică. Delețiile 11q și 17p sunt asociate cu un prognostic prost, în timp ce o deleție 13q, ca un cariotip normal, este asociată cu un prognostic favorabil. Cu trisomia pe cromozomul 12, cazul poate fi atribuit unui grup de risc intermediar.

Categoria de risc de mielom este, de asemenea, asociată cu o combinație de deleții și translocații, translocațiile t(4;14), t(14;16) și deleția 17p sunt asociate cu un prognostic slab. Astfel de studii de diagnostic sunt efectuate pe biopsiile de măduvă osoasă roșie după îmbogățire. O uşoară inversare, însoţită de formarea genei himerice EML4-ALK, este caracteristică cancerului pulmonar cu celule non-mici. Produsul genei himerice este ținta terapiei țintite. O astfel de rearanjare poate fi detectată și prin metoda FISH. Amplificarea HER2 este adesea evaluată printr-un semn indirect - o creștere a nivelului de exprimare, folosind metoda imunohistochimiei pentru aceasta, cu toate acestea, în unele țări se recomandă utilizarea FISH în acest scop, sau cel puțin utilizarea acestei metode pentru confirmare.

Răspuns scurt: Metoda de hibridizare fluorescență in situ (FISH - hibridizare fluorescență in situ) implică utilizarea unor secvențe de nucleotide ADN unice ca sondă pentru a căuta secvențele de ADN dorite în materialul obținut de la pacient. Metoda se bazează pe legarea complementară a unei sonde ADN la ADN-ul cromozomilor metafazici sau al celulelor de interfază. Sonda ADN și ADN-ul test sunt denaturate pentru a forma ADN monocatenar. Sonda ADN este adăugată la preparatul cromozomial și incubată pentru un anumit timp. Prezența sau absența unei sonde marcate cu fluorocrom în ADN după hibridizare este determinată prin examinarea cromozomilor utilizând microscopia cu fluorescență.

Răspuns detaliat: Metoda de hibridizare fluorescentă in situ vă permite să identificați cromozomii individuali sau secțiunile lor individuale pe preparate ale cromozomilor metafazici sau nucleelor ​​de interfază pe baza interacțiunii complementare a unei sonde ADN conjugată cu o etichetă fluorescentă și locul dorit de pe cromozom. Pentru a vizualiza compușii peptido-nucleici de pe cromozom, se folosesc sonde PNA bazate pe un produs proteic.
Metoda se bazează pe legarea complementară a unei sonde ADN la ADN-ul cromozomilor metafazici sau al celulelor de interfază și include următorii pași:
1. Denaturarea ADN-ul sondei dublu catenar și ADN-ul țintă la monocatenar sub influența temperaturii ridicate sau a agenților chimici.
2. Hibridizare Sondă ADN cu țintă ADN conform principiului complementarității cu formarea unei molecule hibride dublu catenar
3. Spălare post-hibridare pentru a elimina sonda ADN nehibridată
4. Analiză semnale de hibridizare cu un microscop fluorescent

Avantaje Metodele de diagnostic genetic molecular FISH includ analiza rapidă un numar mare celule, sensibilitate și specificitate ridicate, capacitatea de a studia celulele necultivabile și nedivizabile.
Defecte metoda sunt incapacitatea de a obține informații despre condiție fizică ADN-ul sau regiunea cromozomală în studiu.
FISH este utilizat în diagnosticul genetic molecular prenatal și pentru caracterizarea tumorilor; în practica pediatrică, este folosit, de regulă, pentru identificarea delețiilor submicroscopice asociate cu malformații specifice. Sindroamele bazate pe microdeleții erau considerate anterior boli cu etiologie necunoscută, deoarece ștergerile și rearanjamentele cromozomiale care provoacă dezvoltarea acestor boli nu sunt de obicei vizualizate cu metode tradiționale analiza cromozomiala. Astfel de mici deleții în anumite regiuni ale cromozomilor pot fi detectate cu mare precizie de către FISH. Bolile cauzate de deleții submicroscopice includ Prader-Willi, Angelman, Williams, Miller-Dieker, sindroame Smith-Magenis și sindrom velocardiofacial. FISH facilitează diagnosticul acestor sindroame în cazurile atipice, mai ales în copilărie, când multe semne semnificative din punct de vedere diagnostic ale bolii sunt încă absente. Utilizarea acestei metode de diagnostic genetic molecular este recomandată și în adolescență și la vârsta adultă, când semnele clinice tipice ale bolii, caracteristice copilăriei, suferă modificări.

121. sonde ADN. Utilizarea lor în determinarea bolilor ereditare.

Scurtă recenzie

Sonda ADN este un fragment scurt de ADN conjugat cu fluoresceină, o enzimă sau un izotop radioactiv, care este utilizat pentru a hibridiza cu regiunea complementară a moleculei de ADN țintă.

Parte principală

Sisteme de diagnostic ADN

Informațiile despre întreaga varietate de proprietăți ale unui organism sunt conținute în materialul său genetic. Astfel, patogenitatea bacteriilor este determinată de prezența unei anumite gene sau a unui set de gene în ele, iar o boală genetică ereditară apare ca urmare a deteriorării unei anumite gene. Segmentul de ADN care determină această trăsătură biologică are o secvență de nucleotide strict definită și poate servi ca marker de diagnostic.

Multe metode de diagnosticare rapide și fiabile se bazează pe hibridizare acizi nucleici- împerecherea a două segmente complementare ale diferitelor molecule de ADN. Procedura în termeni generali este următoarea.

1. Fixarea unei ținte ADN monocatenar pe un filtru membranar.

2. Aplicarea unei sonde ADN monocatenar marcate, care, în anumite condiții (temperatură și putere ionică), se împerechează cu ADN-ul țintă.

3. Spălarea filtrului pentru a îndepărta excesul de sondă ADN marcată nelegată.

4. Detectarea moleculelor hibride sondă/țintă.

În testele de diagnostic bazate pe hibridizarea acidului nucleic, trei componente sunt cheie: o sondă ADN, o țintă ADN și o metodă de detectare a semnalului de hibridizare. Sistemul de detectare trebuie să fie introdus cel mai înalt grad specifice și foarte sensibile.

* Fluoresceină (dioxifluoran, uranină A) - compus organic, colorant fluorescent. În chimia analitică, fluoresceina este utilizată ca indicator acido-bazic luminescent. în biochimie şi biologie moleculara derivați izotiocianați ai fluoresceinei ca coloranți biologici pentru determinarea antigenelor și anticorpilor.

* Detectarea este detectarea, identificarea, găsirea a ceva.

*conjugare=conjugare

*Dacă un amestec de ADN, de exemplu, uman și șoarece, este topit și recoapt într-o „eprubetă”, atunci unele secțiuni ale lanțurilor de ADN de șoarece se vor recombina cu secțiuni complementare ale lanțurilor de ADN uman pentru a forma hibrizi. Numărul de astfel de situri depinde de gradul de înrudire a speciei. Cu cât speciile sunt mai aproape una de cealaltă, cu atât sunt mai multe regiuni de complementaritate a catenelor de ADN. Acest fenomen se numește Hibridarea ADN-ADN.

122. Metode și condiții de utilizare a diagnosticului direct ADN.

Scurtă recenzie:

Folosind metode directe, sunt detectate tulburări ale secvenței primare de nucleotide a ADN-ului (mutații și tipurile acestora). Metodele directe se caracterizează prin precizie care atinge aproape 100%.

Scopul diagnosticului direct este de a identifica alelele mutante (anomalii ale secvenței primare de nucleotide ADN, mutații și tipurile acestora).

Dezavantajul diagnosticului direct al ADN-ului este necesitatea de a cunoaște locația exactă a genei și spectrul mutațiilor acesteia. Metodele de diagnostic direct ADN sunt indicate pentru boli precum fenilcetonuria (mutația R408W), fibroza chistică - (cea mai frecventă mutație delF508), coreea Huntington (expansiunea repetărilor trinucleotidelor-repetări CTG) etc.

Raspuns complet:

Folosind metode directe, sunt detectate tulburări ale secvenței primare de nucleotide a ADN-ului (mutații și tipurile acestora). Metodele directe se caracterizează prin precizie care atinge aproape 100%. Cu toate acestea, în practică, aceste metode pot fi aplicate în anumite condiții:

1) localizarea citogenetică cunoscută a genei responsabile de dezvoltarea unei boli ereditare,

2) gena bolii trebuie donată și secvența sa de nucleotide trebuie cunoscută.

Scopul diagnosticului direct este de a identifica alelele mutante (anomalii ale secvenței primare de nucleotide ADN, mutații și tipurile acestora). Precizia ridicată a metodei de diagnostic direct ADN în majoritatea cazurilor nu necesită o analiză ADN a tuturor membrilor familiei, deoarece detectarea unei mutații în gena corespunzătoare face posibilă confirmarea diagnosticului cu o acuratețe de aproape 100% și determinarea genotipului. toți membrii familiei unui copil bolnav, inclusiv purtătorii heterozigoți.

Dezavantajul diagnosticului direct al ADN-ului este necesitatea de a cunoaște locația exactă a genei și spectrul mutațiilor acesteia.

Metodele de diagnostic direct ADN sunt indicate pentru boli precum fenilcetonuria (mutația R408W), fibroza chistică - (cea mai frecventă mutație delF508), coreea Huntington (expansiunea repetărilor trinucleotidelor-repetări CTG) etc.

Cu toate acestea, până în prezent, genele multor boli nu au fost cartografiate, organizarea lor exon-intron este necunoscută, iar multe boli ereditare sunt caracterizate printr-o eterogenitate genetică pronunțată, ceea ce nu permite utilizarea deplină a metodelor directe de diagnosticare ADN. Prin urmare, conținutul informațional al metodei de diagnosticare directă a ADN variază foarte mult. Deci, în diagnosticul de coree Huntington, acondroplazie, este de 100%, cu fenilcetonurie, acidoză chistică, sindrom adrenogenital - de la 70 la 80% și cu boala Wilson-Konovalov și miopatia Duchenne / Becker - 45-60%. În acest sens, se folosesc metode indirecte de diagnostic genetic molecular al bolilor ereditare.

Microscoapele standard nu fac posibilă examinarea celulelor la nivel molecular. O creștere puternică nu este suficientă aici. Sunt necesare imagini digitale, reactivi suplimentari și alte materiale și instrumente. Pentru analiza ADN-ului și ARN-ului se utilizează în prezent o metodă, care se numește hibridizare in situ. Deoarece implică colorarea probelor urmată de analiza radiațiilor, se mai numește hibridizare fluorescentă sau FISH.

Hibridizarea in situ fluorescentă este utilizată pe scară largă în cercetarea genetică, diagnosticarea cancerului, managementul sarcinii și multe alte domenii ale științei. Metoda, după cum sugerează și numele, se bazează pe proprietatea moleculelor de ADN și ARN de a forma legături stabile cu sonde, adică de a forma molecule hibride. Cuvintele „In situ” înseamnă că toate observațiile sunt făcute „in situ”, adică direct, fără utilizarea unui mediu suplimentar.

Sondele ADN (sondele) sunt complementare cu moleculele din proba de testat. Acestea includ nucleozide, care sunt marcate cu fluorofori (substanțe care conferă moleculei proprietatea de fluorescență). Această metodă se numește etichetare directă; dacă se folosesc ca markeri molecule conjugate hibride, se obține marcarea indirectă. Cu etichetare directă, hibridizarea poate fi observată la microscop cu fluorescență imediat după finalizarea acesteia. Pentru etichetarea indirectă se efectuează o altă procedură de colorare. Separă moleculele conjugate de probele studiate după culoare.

Metoda de hibridizare cu etichetare indirectă necesită mai mult timp și reactivi, dar vă permite să obțineți rezultate mai fiabile. Nivelul semnalului în acest caz va fi mai mare și, în plus, este posibilă și amplificarea sa în trepte. Secvențele de ADN donate (produse PCR, ADN genomic, oligonucleotide marcate și altele) sunt utilizate ca sonde de marcare. Etichetarea sondei se realizează în mai multe moduri. Metodele comune sunt translația nick și reacția în lanț a polimerazei (PCR) cu nucleotide marcate.

Ordinea procedurii

Metoda in situ începe cu faza pregătitoare- proiectarea sondelor. Dimensiunile sondelor nu trebuie să fie suficient de mari pentru a interfera cu procesul de cercetare. Sondele prea mici sunt, de asemenea, nedorite, deoarece nu garantează rezultate fiabile. Prin urmare, pentru cercetare sunt luate sonde de până la 1.000 bp. Dacă sonda este ADN dublu catenar, atunci acidul este denaturat înainte de hibridizare. Când se obține rezultatul dorit (anumite regiuni ale cromozomilor sau toți cromozomii sunt colorați), hibridizarea ulterioară a sondelor ADN cu secvențe repetate este blocată. Pentru a face acest lucru, la amestecul de hibridizare sunt adăugate molecule repetate de ADN nemarcate.

Următoarea etapă a cercetării este pregătirea preparatelor de nuclee interfazice sau cromozomi metafazici. Celulele sunt fixate în substrat pe sticlă, după care ADN-ul este denaturat. Pentru a reduce temperatura de denaturare și a păstra morfologia nucleelor ​​și a cromozomilor, denaturarea se realizează cu adăugarea de formadidă. După aceea, sondele sunt adăugate la material și hibridizarea se efectuează timp de câteva ore. La finalizarea sa, se efectuează o spălare în mai multe etape pentru a îndepărta sondele care nu s-au conectat cu moleculele probei.

metoda de hibridizare in situ* (în loc, lat.) se bazează pe capacitatea ADN-ului sau ARN-ului de a forma molecule hibride stabile cu sonde ADN/ARN direct pe preparate de cromozomi fixați și nuclee de interfază. Folosind această metodă, puteți determina locația exactă a aproape oricărei secvențe de ADN sau ARN direct în celulă, nucleul celulei sau cromozomi.

Pentru hibridizare. in situ preparate citologice sau histologice adecvate ale celulelor oricăror țesuturi sau organe, preparate conform metodelor standard. Într-un laborator de citogenetică clinică, se folosesc preparate din limfocite din sângele periferic cultivate, celule citotrofoblaste epiteliale coriale, celule cultivate și necultivate ale lichidului amniotic, diferite țesuturi din material de avort, precum și frotiuri de epiteliu bucal și celule sanguine.

metoda de hibridizare in situ are o importanță deosebită pentru citogenetica practică datorită dezvoltării unei variante non-izotopice bazată pe utilizarea sondelor marcate cu nucleotide modificate neradioactive. Variantele non-izotopice de hibridizare pe preparate (în special cele fluorescente) au o serie de avantaje în comparație cu cele izotopice: rezoluție mare, care este egală cu rezoluția unui microscop (0,1 - 0,2 μm), nu este nevoie de prelucrarea statistică a rezultatelor, rapiditate și siguranță pentru cercetătorii în domeniul sănătății

În plus, combinația de eșantioane modificate diferit detectate folosind sisteme diferite detectarea, vă permite să determinați simultan locația a două sau mai multe secvențe de ADN într-o celulă sau pe o placă de metafază. Și utilizarea secvențelor repetitive marcate cu fluorocromi ca sonde ADN reduce timpul de procedură la 7-9 ore (hibridarea clasică non-izotopică durează două zile, variantele izotopice de la o săptămână la o lună), ceea ce este deosebit de important pentru diagnosticul prenatal. Utilizare Metoda FISHîn diagnosticul citogenetic, permite identificarea rearanjamentelor cromozomiale structurale, stabilirea naturii cromozomilor marker, analizarea încălcărilor numerice ale setului de cromozomi, atât pe cromozomii metafazici, cât și în nucleele interfazice.

Principiul metodei FISH

In nucleu Metoda FISH constă reacția de hibridizare dintre o sondă de ADN creată artificial și secvența sa de nucleotide complementară a ADN-ului nuclear. Molecula de ADN este formată din două lanțuri de nucleotide conectate elicoidal, iar hibridizarea este posibilă numai dacă lanțurile se separă. Pentru a deconecta lanțurile de nucleotide ADN, se folosește denaturarea (pentru hibridizarea ulterioară trebuie denaturate atât ADN-ul din nucleele probei studiate, cât și sonda de ADN în sine). După denaturare, sonda ADN hibridizează la secvența sa de nucleotide complementară și poate fi detectată folosind un microscop fluorescent.

În acest fel, forma generala protocol pentru setare PEŞTE poate fi prezentat sub următoarea formă:

1. Prepararea unui preparat histologic sau citologic.
Pregătirea unui preparat histologic se realizează conform schemei standard: tăiere, marcare, cablare, turnare, microtomie, așezarea tăieturii pe o lamă de sticlă și deparafinizare. La prepararea unui preparat citologic se folosesc soluții speciale de precipitare și centrifugare, ceea ce face posibilă obținerea unei suspensii celulare concentrate.

2. Pretratament (dacă este necesar).
Preparatul este procesat de proteaze pentru a elimina prezența proteinelor care împiedică hibridizarea.

3. Aplicarea unei sonde ADN la preparat și denaturarea ulterioară.
Pentru a denatura sonda și proba de ADN, acestea sunt tratate cu formamidă și încălzite la o temperatură de aproximativ 85-90°C.

4. Hibridarea.
După denaturare, medicamentul este răcit la o anumită temperatură (37°C în cazul studiilor clinice) și incubat într-o cameră umedă timp de câteva ore (durata de incubare este indicată în fiecare protocol specific). În prezent, hibridizatorii automati sunt utilizați pentru denaturare și hibridizare.

5. Spălarea.
Odată ce hibridizarea este completă, sondele nelegate trebuie spălate, ceea ce altfel ar crea un fundal care face dificilă evaluarea rezultatelor FISH. Pentru spălare, se utilizează de obicei o soluție care conține citrat și clorură de sodiu (SSC).

6. Contra-colorare.
Cu ajutorul coloranților fluorescenți (DAPI - 4,6-diamidin-2-fenilindol; iodură de propidiu), tot ADN-ul nuclear este colorat.

7. Analiza rezultatelor folosind un microscop fluorescent. Operațiunile de rutină (deparafinare, pretratare, spălare) pot fi automatizate.

* - Materialul a fost pregătit pe baza informațiilor din surse deschise.

Metoda de determinare hibridizare fluorescentă in situ.

Material în studiu Vezi in descriere

Vizita la domiciliu disponibila

Studiul este utilizat pentru a selecta chimioterapia adjuvantă individuală pentru cancerul de sân sau cancerul gastric.

Cancerul de sân (BC) ocupă primul loc printre bolile oncologice la femei. Celulele canceroase de sân pot conține tipuri diferite receptori care sunt sensibili la anumite substante (hormoni sau alte molecule biologic active). În funcție de prezența receptorilor hormonali (estrogen și progesteron) sau a receptorului factorului de creștere epidermic uman de tip 2 (Human Epidermal Growth Factor Receptor 2, HER2) în celulele tumorale, cancerul de sân hormono-receptor-pozitiv, HER2-pozitiv și triplu negativ este izolat. . Acest lucru este important de luat în considerare în selecția individuală a terapiei și pentru prezicerea succesului tratamentului.

HER2 este un receptor care este prezent în țesuturi și, în mod normal, participă la reglarea diviziunii și diferențierii celulare. Excesul său pe suprafața celulelor tumorale (hiperexpresie) predetermina creșterea rapidă necontrolată a tumorii, riscul mare de metastază și eficacitatea scăzută a unor tipuri de tratament. Hiperexpresia HER2 în unele subtipuri de cancer de sân duce la creșterea proliferării și angiogenezei, precum și la dereglarea apoptozei (autodistrugerea programată genetic a celulelor). În prezent, există medicamente care vizează receptorul HER2. Acesta, în special, este Herceptin (trastuzumab), care este un anticorp monoclonal împotriva receptorilor HER2/neu.

Amplificarea și supraexprimarea oncogenei HER2 (ErbB-2) sunt evenimente relativ specifice pentru carcinomul de sân și practic nu apar în tumorile de alte localizări. Cancerul gastric (GC) este una dintre puținele excepții: activarea HER2 este observată în aproximativ 10-15% din cazurile de neoplasme maligne ale acestui organ și se corelează cu evoluția agresivă a bolii. În cancerul de sân HER2-pozitiv, pe suprafața celulelor tumorale poate fi prezent un exces de receptori HER2 (denumit HER2 pozitiv sau Hercept pozitiv). Acest fenomen se observă la 15-20% dintre femeile care suferă de cancer mamar. Evaluarea statusului HER2 este importantă pentru determinarea tacticilor de tratament.

Principalele metode standardizate pentru detectarea supraexpresiei HER2/neu și/sau amplificarea genei HER2/neu sunt metoda imunohistochimică (IHC) și hibridizarea fluorescentă in situ (FISH). Ambele studii sunt efectuate pe preparate histologice (secțiuni ale materialului tumoral înglobate în parafină) folosind anticorpi policlonali (IHC), sonde fluorescente (FISH) și diferite sisteme imagistice.

La evaluarea rezultatelor reacției IHC, expresia este luată în considerare numai în componenta invazivă a tumorii. Rezultatele reacției sunt evaluate folosind o scală de notare: 0, 1+, 2+, 3+, dezvoltată de producătorul testului și aprobată de experți. Statutul Hercept, evaluat ca 0 și 1+, ar trebui considerat negativ - nu există supraexprimare a proteinei, care se corelează cu absența amplificării genei sale. Starea Hercept, evaluată 3+, este pozitivă, adică este prezentă supraexprimarea proteinei, în concordanță cu prezența amplificării genei. Statutul Hercept 2+ este considerat nedeterminat, adică expresia proteinei determinată pe baza unei reacții imunohistochimice nu poate fi judecată cu încredere pe baza amplificarii genei, prin urmare, este necesar un studiu care să dezvăluie în mod direct prezența sau absența amplificării. Metoda FISH este utilizată pe secțiuni din aceeași probă (bloc) pe care a fost efectuat studiul imunohistochimic. În hibridizarea FISH, prezența amplificării genei HER2 este evaluată prin numărarea raportului dintre semnalele fluorescente roșii (corespunzând genelor HER2 marcate) și semnalele fluorescente verzi care etichetează regiunea centromerică a cromozomului al 17-lea. Un raport mai mare de 2 indică prezența amplificării HER2. Metoda FISH este mai sensibilă decât IHC, deoarece permite o evaluare directă a prezenței sau absenței amplificării.

Material pentru cercetare: bloc de parafină cu biopsie tumorală.

Atenţie! NECESAR:

• lamă de sticlă cu colorare IHC cu anticorpi la HER2/neu
• o trimitere de la un medic sau un extras cu rezultatele unui studiu histologic și IHC cu anticorpi la Her-2/neu

Literatură

• Zavalishina L.E., Frank G.A. Studiu morfologic al statusului HER2. Metodologie și atlas. - M.: Ed. Media Medica. 2006:98.
• Boli maligne în Rusia în 2011 (morbiditate și mortalitate). Ed. IN SI. Chissova, V.V. Starinsky, G.V. Petrova. - M.: FGBU „MNIOI-i. P.A. Herzen" de la Ministerul Sănătății al Rusiei. 2013:289.
• Oncologie. Ghiduri clinice. Asociația Oncologilor din Rusia. Ed. IN SI. Chissova, S.L. Daryalova. - M.: Ed. „GEOTAR-Media”. 2008:702.
• Bang Y.J., Van Cutsem E., Feyereislova A., Chung H.C., Shen L., Sawaki A. et al. Trastuzumab în combinație cu chimioterapie versus chimioterapie în monoterapie pentru tratamentul cancerului avansat de joncțiune gastrică sau gastro-esofagiană (ToGA) HER2-pozitiv: un studiu de fază 3, deschis, controlat, randomizat. Lancet. 2010;376:687-697.
• Dabbs D.J. Imunohistochimie de diagnostic: aplicații teranostice și genomice. Elsevier, ediția a IV-a. 2013:960.
• Ferlay J., Shin H.R., Bray F., Forman D., Mathers C., Parkin D.M. GLOBOCAN 2008, Cancer Incidence and Mortality Worldwide: IARC Cancer Base No. 10. Lyon, Franta: International Agency for Research on Cancer; 2010. Disponibil la: http://globocan.iarc.fr.
• Goldhirsch A., Glick J.H., Gelber R.D., Coates A.S., Thurlimann B., Senn H.J. Repere ale întâlnirii: Consensul experților internaționali privind terapia primară a cancerului de sân precoce 2005. Analele de oncologie. 2005;16(10):1569-1583.
• Kurman R.J., Carcangiu M.L., Herrington C.S., Young R.H. Clasificarea OMS a tumorilor organelor reproductive feminine. OMS Press, ediția a 4-a. 2014;4:316.
• NordiQC. http://www.nordiqc.org.
• Park D.I., Yun J.W., Park J.H. et al. Amplificarea Her2/neu este un factor de prognostic independent în cancerul gastric. Boli și științe digestive. 2006;51(8):1371-1379.
• Slamon D. şi colab. Trastuzumab adjuvant în cancerul de sân HER2-pozitiv. New England Journal of Medicine. 2011;365:1273-1283.