ČINNOSŤ č. 4
TÉMA: FYZIOLÓGIA MIKROORGANIZMOV. BAKTERIOLOGICKÁ (KULTÚRNA) METÓDA VÝSKUMU. BIOCHEMICKÉ VLASTNOSTI MIKROORGANIZMOV.
KONTROLNÝ ZOZNAM
Výživa baktérií. Živiny sú zdrojom uhlíka a dusíka. Klasifikácia baktérií podľa druhov výživy Autotrofy a chemoorganotrofy
Rastové faktory a ich zdroje. Zdroje minerálnych prvkov.
Spôsoby a mechanizmy prenosu živín cez membránu.
Energetické nároky baktérií. Spôsoby získavania energie v autotrofoch (fotosyntéza, chemosyntéza). Zdroje a spôsoby získavania energie v chemoorganotrofoch.
Aeróbne a anaeróbne typy biologickej oxidácie v baktériách. Aeróbne, anaeróbne, fakultatívne anaeróbne a mikroaerofilné baktérie. Spôsoby vytvárania anaeróbnych podmienok.
Úlohy, etapy, výhody a nevýhody bakteriologickej (kultúrnej) výskumnej metódy.
Rast a rozmnožovanie mikroorganizmov. Reprodukčné metódy. Binárne (jednoduché) štiepenie, mechanizmus. Reprodukcia bakteriálnych populácií.
Princípy a metódy kultivácie baktérií. Výživové potreby mikróbov.
Živné médiá na kultiváciu baktérií. požiadavky na živiny. Klasifikácia živných médií.
Podmienky a techniky kultivácie baktérií. Technika sejby na živné pôdy. Zákonitosti a charakter rastu baktérií na hustých a tekutých živných pôdach.
Metódy izolácie čistých kultúr aeróbnych a anaeróbnych baktérií.
Vlastnosti používané na identifikáciu izolovaných plodín.
NEZÁVISLÁ A LABORATORNÁ PRÁCA
Bakteriologická metóda(fázy):
1 1. etapa izolácia čistej kultúry aeróbnych baktérií: A) Mikroskopia patologického materiálu.
Gramovo farbenie náterov z patologického materiálu. Náčrt lieku.
B) Osvojenie si pod vedením pedagóga techniky výsevu patologického materiálu bakteriologickou slučkou a špachtľou na platňové živné pôdy.Inokulácia patologického materiálu bakteriologickou slučkou na lamelárny mäsovo-peptónový agar (MPA) na získanie izolovaných kolónií.
Klasifikácia kultivačných médií(uveďte oblasti použitia)
1. Podľa konzistencie:kvapalina (mäsovo-peptónový bujón, žlč, cukrový bujón), hutné (2-3% agar) a polotekuté (0,15-0,7% agar) médiá.
2. Podľa pôvodu:prirodzené - z mlieka, mäsa. vajcia, zemiaky, ľudské krvné sérum, živočíšne a iné produkty; umelé - 1) prírodné vyvážené zmesi živín v koncentráciách a kombináciách potrebných pre rast a rozmnožovanie mikroorganizmov, univerzálny zdroj dusíka a uhlíka - peptóny - produkty neúplného rozkladu bielkovín pomocou pepsínu alebo rôznych hydrolyzátov (ryby, kazeín, kvasnice a pod.) . 2) syntetický cpresné chemické zloženie Soton pre mykobaktérie, 199 pre bunky.
3. V zložení: jednoduché kultúrne médiá (mäso-peptónový bujón-MPB, mäsovo-peptónový agar-MPA) a s nepravda (KA = MPA + 5-10 % zvieracej krvi)
4. Podľa dohody:
ALE) všeobecný účel - univerzálny, určený na kultiváciu akýchkoľvek mikroorganizmov (MPA, KA)
B ) Špeciálnepre pestovanie mikroorganizmov, ktoré nerastú na univerzálnych médiách, diferenciáciu druhov a selektívnu izoláciu určitých typov mikroorganizmov:
voliteľný (výberový) na izoláciu určitých druhov mikroorganizmov a potlačenie rastu príbuzných - (soľný agar na stafylokoky).
diferenciálna diagnostika (DDS)-prostredia, ktoré umožňujú rozlíšiť medzi typmi baktérií enzymatickou aktivitou; Oni S vlastniť: 1) univerzálne živné médium (MPA, KA); 2) diferenciačný faktor - chemický substrát (napríklad uhľohydrát), ku ktorému je rôzny vzťah diagnostickým znakom pre daný mikrób 3) Indikátor, ktorého zmena farby indikuje biochemickú reakciu. (prostredia Endo, Ploskirev, Giss a iné).
diferenciálne selektívne (DS) - prostredia, ktoré umožňujú prideliť baktérie určitého druhu podľa ich fyziologických vlastností a odlíšiť sa od iných druhov podľa enzymatickú aktivitu Obsahujú: 1) MPA 2) voliteľné chemický substrát, ktorý inhibuje rast iných druhov baktérií . 3) rozlišovací faktor - substrát ku ktorému je diagnostický znak pre tento mikrób;) 4.) Indikátor, ktorého zmena farby indikuje biochemickú reakciu. (stredy na stafylokoky, ICA na salmonely, Ploskirev na šigely a salmonely).
B) Obohacovanie média na rozmnožovanie a akumuláciu baktérií určitého typu v klinickom materiáli (krv v 20 % žlčovom bujóne = salmonela, výtok z hrdla v 10 % sére + 2 % teluritu = korynebaktérie.)
D) Doprava médium na odber a dodávku (konzerváciu) klinického materiálu = 48 hodín (Amiesovo médium - polotekutý agar + aktívne uhlie).)
Živné médiá(príklady):
Streda Endo Stredný typ diferenciálna diagnostika enterobaktérií Nutričná báza MPA diferenciačný faktor laktóza 1% Indikátor zásaditý fuchsín odfarbený siričitanom sodným. E.s oli rozkladajú laktózu na kyselinu - kolónie sú červené s kovovým leskom, patogénne bezfarebné;
Soľný agar Stredný typ selektívne na izoláciu stafylokokov Nutričná báza MPA voliteľný faktor chlorid sodný 10%
Streda Ploskirev Stredný typ diferenciálne selektívnepre enterobaktérie
Nutričná báza MPA voliteľný faktor Žlčové soli diferenciačný faktor laktóza
Indikátor neutrálna červená
Žĺtkovo-soľný agar Stredný typ diferenciálne selektívne pre S . aureus _
Nutričná báza MPA voliteľný faktor chlorid sodný 10%
diferenciačný faktor žĺtok
Indikátor Nie
2 2. fáza bakteriologická výskumná metóda (izolácia čistej kultúry):
A) Štúdium izolovaných kolónií (escherichia, stafylokok) na lamelárnej MPA.
|
Študoval kultúrne vlastnosti |
1 typ kolónií |
2 typ kolónie |
|
tvar kolónie |
Pravidelný tvar, okrúhly |
Správna forma |
|
Dôslednosť |
homogénne |
homogénne |
|
Veľkosť kolónie |
stredná (veľkosť 2-4 mm) | |
|
Povaha okraja |
s hladkými okrajmi |
s hladkými okrajmi |
|
Povrchová povaha |
konvexné |
B) Príprava náterov z vybraných kolónií (Gramovo farbenie).
C) Prenos izolovaných kolónií do šikmej MPA na akumuláciu čistej kultúry.
3 Izolácia čistej kultúry anaeróbnych baktérií: inokulácia pôdnej suspenzie na Kitta-Tarozzi médium na izoláciu patogénnych klostrídií
Kitt-Tarozziho médium pozostáva zo živného bujónu, 0,5 % glukózy a kúskov pečene alebo mletého mäsa na absorbovanie kyslíka z média. Pred výsevom sa médium zahrieva vo vriacom vodnom kúpeli počas 20-30 minút, aby sa z média odstránil vzduch. Po zasiatí sa živné médium ihneď naplní vrstvou parafín
Metódy na vytvorenie anaerobiózy:
1.fyzické- odčerpanie vzduchu, zavedenie špeciálnej zmesi plynov bez kyslíka (zvyčajne N 2 - 85 % CO 2 - 10 %, H 2 - 5%), predbežné prevarenie živného média, očkovanie do hlbokého stĺpca agaru, plnenie média vazelínovým olejom na zníženie prístupu kyslíka, použitie hermeticky uzavretých fľaštičiek a skúmaviek, striekačiek a laboratórneho skla s inertným plynom, použitie tesne uzavretých exsikátorov s horiacou sviečkou
2. Chemické - používajú sa chemické lapače kyslíka.
3. Biologické - spoločná kultivácia prísnych aeróbov a anaeróbov (aeróby absorbujú kyslík a vytvárajú podmienky pre rozmnožovanie anaeróbov - Fortnerova metóda).
Streda Kitt - Tarozzi pozostáva z živného vývaru, 0,5% glukózy a kúskov pečene alebo mletého mäsa na absorbovanie kyslíka z prostredia. Pred výsevom sa médium zahrieva vo vriacom vodnom kúpeli počas 20-30 minút, aby sa z média odstránil vzduch. Po zasiatí sa živné médium ihneď naplní vrstvouparafín alebo vazelínový olej na izoláciu od prístupu kyslíka.
4. Zmiešané - použiť niekoľko rôznych prístupov.
Na vytváranie anaeróbnych podmienok sa používajú špeciálne zariadenia - anaerostaty. V súčasnosti najjednoduchšie a najefektívnejšie zariadenie na vytváranie anaeróbnych a mikroaerofilných podmienok je chemická metóda so špeciálnymi vreckami fungujúcimi na princípe pohlcovania vzdušného kyslíka v hermeticky uzavretých nádobách .
Wilsonovo-Blairovo médium (tuby, poháre):
Nutričná báza MPA Respiračný substrát glukózy
Redukujúci faktor siričitan sodný a chlorid železitý siričitan sodnýNa 2 SO 3 → Na 2 S
Pre prostredie Wilson-Blair je základ agar s prídavkom glukózy , Clostridia forme na tomto médiu kolónie čierna farba v dôsledku reštaurovania siričitan predtým sulfid - anión , ktorý je spojený s katiónov žľaza (II) poskytuje čiernu soľ. Typicky čierna na tomto vzdelávacom médiu kolónie , objaví sa v hĺbke agarového stĺpca .
Tioglykolové médium (médium na kontrolu sterility): (rúrky):
Nutričná báza BCH Respiračný substrát glukózy Redukujúci faktor tioglykolát sodný
Indikátor resazurín
Zeisslerov agar s glukózou v krvi: (poháre): Nutričná báza MPA, krv
Respiračný substrát glukózy Redukujúci faktor hemoglobínu
Bol zavedený pojem „anaeróby“.Louis Pasteurktorý objavil v roku 1861baktériemaslová fermentácia.
ALEPrednáška 3 Fyziológia mikroorganizmov. Metabolizmus baktérií .
Fyziológia mikroorganizmov zahŕňa :
druhy potravín;
typy dýchania;
kultivácia (podmienky, prostredie, charakter a rýchlosť rastu);
biochemická aktivita;
variabilita;
uvoľňovanie biologicky aktívnych látok, toxínov a iných faktorov patogenity;
citlivosť na antibiotiká, bakteriofágy, bakteriocíny;
iné biologické vlastnosti.
Metabolizmus baktérií - súbor fyzikálnych a chemických procesov (chemických premien a reakcií) zameraných na reprodukciu štruktúr a zabezpečenie životne dôležitých funkcií mikrobiálnej bunky, ako sú:
rast a reprodukcia;
ukladanie rezervného potravinového materiálu;
transport živín do mikrobiálnej bunky;
uvoľňovanie metabolických produktov (toxíny, enzýmy, antibiotiká a iné biologicky aktívne látky);
premávka;
tvorba spór;
adhézia na citlivé receptory hostiteľských buniek a penetrácia do nich;
rôzne adaptívne reakcie na zmeny vonkajšieho prostredia.
Anabolizmus- súbor biochemických reakcií, ktoré uskutočňujú syntézu bunkových zložiek.
Katabolizmus- súbor reakcií, ktoré bunke dodávajú energiu.
Schéma štúdie metabolizmu - fázy:
1. Počiatočný (periférny) metabolizmus - prienik látok zvonku do bunky a rozpad na medziprodukty.
2. Amfibolizmus (intermediárny metabolizmus) - tvorba medziproduktov metabolizmu spoločných pre katabolické a anabolické dráhy.
3. Záverečné, prísne špecializované štádiá konštruktívneho metabolizmu (vedú k výstavbe bunkových štruktúr) a energetického metabolizmu (tvorba ATP).
Mechanizmy prenikania živín do bunky:
Jednoduchá difúzia (pre skutočné riešenia). energeticky nezávislý proces.
Uľahčená difúzia („para downstream“) – v smere koncentračného gradientu za účasti nosných proteínov. energeticky závislý proces.
Aktívny transport je proti koncentračnému a elektrochemickému gradientu za účasti permeáz (amino-, hydroxy-kyselina, iónová atď.). Proces prebieha s výdajom energie ATP, závisí od náboja látok a ich premeny v procese prenosu.
Mikroorganizmy sú rozdelené do dvoch skupín podľa ich schopnosti absorbovať zdroje uhlíka: autotrofy (lat. autá - seba, trofej - výživa) syntetizujú všetky zložky bunky obsahujúce uhlík z CO 2 ako jediného zdroja uhlíka a heterotrofov (lat. heteros - druhý, „kŕmenie na úkor iných“), používajú rôzne organické zlúčeniny obsahujúce uhlík.
V závislosti od zdrojov energie sa mikroorganizmy delia aj na fototrofy (fotosyntetické), schopné využívať slnečnú energiu, a chemotrofy (chemosyntetické), prijímajúce energiu prostredníctvom redoxných reakcií.
V závislosti od použitých donorov elektrónov sa baktérie delia na litotrofy (s použitím anorganických donorov elektrónov) a organotrofy (s použitím organických zlúčenín).
Prototrofy- mikroorganizmy schopné syntetizovať všetky organické zlúčeniny, ktoré potrebujú, z glukózy a amónnych solí.
Auxotrofy- mikroorganizmy neschopné syntetizovať akékoľvek organické zlúčeniny. Získajú tieto zlúčeniny pripravené z životné prostredie alebo ľudské telo.
Enzýmy(z gréc. fermentum-sourdough) - vysoko špecifické proteínové katalyzátory prítomné vo všetkých živých bunkách, bez ktorých nie je možný život a rozmnožovanie. Enzýmy rozpoznávajú svoje príslušné metabolity (substráty), interagujú s nimi a urýchľujú chemické reakcie. Enzýmy sú bielkoviny.
Enzýmové zloženie mikroorganizmu je určené genómom a je pomerne stabilnou vlastnosťou. Stanovenie enzýmov sa široko používa na biochemickú identifikáciu baktérií.
Endoenzýmy katalyzujú metabolizmus v bunke.
Exoenzýmy sú vylučované bunkou do prostredia.
Konštitutívny enzýmy sa neustále syntetizujú v určitých koncentráciách.
indukovateľný enzýmy sú enzýmy, ktorých koncentrácia sa zvyšuje s príjmom zodpovedajúceho substrátu.
Enzýmy agresie: hyaluronidáza, fibrinolyzín, neuraminidáza, kolagenáza, lecitináza (licitovitelláza), koaguláza, ureáza, dekarboxylázy aminokyselín, deoxyribonukleáza.
pestovanie- získavanie kultúr mikroorganizmov v umelom živnom médiu.
Kultivačné ciele:
získanie čistých kultúr patogénnych mikroorganizmov a ich identifikácia;
akumulácia biomasy výrobcov BAS (vitamíny, hormóny, aminokyseliny, antibiotiká atď.);
získavanie diagnostických a profylaktických prípravkov (vakcíny, diagnostika);
uchovávanie referenčných múzejných kultúr;
v sanitárnej mikrobiológii na určovanie sanitárno-indikačných mikroorganizmov - indikátorov znečistenia životného prostredia.
kultúra- populácia mikroorganizmov pestovaná na živnom médiu.
čistá kultúra- populácia jedného druhu mikroorganizmov vypestovaná z izolovanej kolónie na živnom médiu.
Väčšina patogénnych mikróbov sa pestuje na živnom médiu pri 37 °C počas 1-2 dní.
Klasifikácia kultivačných médií
Podľa konzistencie: tekutý, polotekutý, hustý.
Pôvod: prírodné (mlieko, zemiaky), umelé, polosyntetické, syntetické
V zložení: jednoduché (MPA, MPB, zelenina, mlieko), komplexné (1% glukóza, 10-20% sérum, 20-30% ascitická tekutina, 5-10% defibrinovaná krv).
Podľa dohody:
univerzálne - médiá, na ktorých dobre rastú mnohé druhy baktérií. Patria sem mäsovo-peptónový vývar (MPB) a mäsovo-peptónový agar (MPA);
špeciálne - médiá špeciálne pripravené na získanie rastu baktérií, ktoré nerastú na univerzálnych médiách;
diferenciálna diagnostika - prostredia, ktoré umožňujú rozlíšiť jeden typ baktérií od iných enzymatickou aktivitou;
selektívne - médiá obsahujúce látky používané mikroorganizmami určitých druhov a zabraňujúce rastu iných mikroorganizmov. Selektívne médiá vám umožňujú vybrať určité typy baktérií zo študovaného materiálu;
diferenciálno-selektívne - prostredia, ktoré kombinujú vlastnosti diferenciálne diagnostického a selektívneho prostredia;
konzervačný prostriedok;
sústredenie.
Rozmnožovanie baktérií na tekutých a hustých živných médiách.
rast koordinovaná reprodukcia všetkých zložiek bakteriálnej bunky a zvýšenie jej biomasy. reprodukcie- rozmnožovanie a zvyšovanie počtu buniek, čo vedie k vytvoreniu bakteriálnej populácie.
Baktérie sa vyznačujú vysokou mierou reprodukcie. Rýchlosť rozmnožovania závisí od druhu, zloženia rastové médium, pH, teplota, prevzdušňovanie.
Na hustých živných médiách baktérie tvoria zhluky buniek nazývané kolónie. Kolónie rôznych druhov sa líšia veľkosťou, tvarom, konzistenciou, farbou, povahou okrajov, povahou povrchu, priehľadnosťou.
Charakter rastu na tekutých živných pôdach: filmový (tvorba filmu na povrchu živného média), difúzny zákal, blízko dna (zrážky).
Fázy vývoja bakteriálnej populácie
Počiatočná stacionárna fáza (~ 1-2 hodiny). Počet baktérií sa nezvyšuje, bunky nerastú.
Fáza oneskorenia alebo fáza oneskorenia rozmnožovania (~ 2 hodiny).
Log-fáza - logaritmická alebo exponenciálna fáza (~ 3-5h). Populácia sa delí maximálnou rýchlosťou a počet jedincov pribúda exponenciálne.
Fáza negatívneho zrýchlenia (~ 2 hodiny). Súvisí s vyčerpaním limitujúceho metabolitu alebo akumuláciou toxických metabolických produktov.
Stacionárna fáza maxima. Počet vytvorených a odumierajúcich buniek je rovnaký.
Fáza zrýchlenej smrti (~ 3 hodiny).
Logaritmická fáza smrti (~5).
Fáza znižovania miery úmrtnosti – zostávajúce živé jedince prechádzajú do kľudového stavu.
Energetický metabolizmus baktérií
Aeróby- mikroorganizmy, ktoré využívajú aeróbny (oxidačný) typ biologickej oxidácie substrátov. Metabolizmus aeróbov prebieha len za prítomnosti vysokej koncentrácie voľného kyslíka v biotope, ktorý pôsobí ako konečný akceptor elektrónov odoberaných zo substrátu. Kultivácia aeróbov sa uskutočňuje na médiách s plným prístupom k atmosférickému kyslíku.
povinných anaeróbov- mikroorganizmy využívajúce anaeróbny typ biologická oxidácia(fermentácia). Metabolizmus sa vyskytuje iba v prostrediach s nízkym redoxným potenciálom v neprítomnosti kyslíka.
Zvýšenie koncentrácie kyslíka v prostredí vedie k smrti vegetatívnych foriem.
Množstvo energie extrahovanej počas fermentácie je malé, preto sú povinné anaeróby nútené fermentovať veľké množstvo substrátu.
Fakultatívne anaeróby- mikroorganizmy schopné získavať energiu zo substrátov aeróbnymi (oxidačnými) a anaeróbnymi (fermentatívnymi) cestami biologickej oxidácie. Metabolizmus sa môže uskutočňovať za podmienok plného prístupu kyslíka do prostredia, ako aj za podmienok anaerobiózy.
Metódy vytvárania anaerobiózy
Fyzické
siatie v stĺpci cukru MPA;
varenie (regenerácia) tekutých živných médií s následným potiahnutím olejom;
mechanické odstraňovanie kyslíka v anaerostatoch;
nahradenie kyslíka indiferentným plynom;
Rúry Veillon-Vignal.
Chemický
aparát Aristovského;
sviečka Omelyansky ( alkalický roztok pyrogalol);
použitie chemických akceptorov kyslíka: glukóza, kyselina pyrohroznová, sodná soľ kyseliny mravčej atď.
Biologické
Streda Kitta-Tarozzi
Fortnerova metóda
Anaeróby - organizmy, ktoré získavajú energiu bez prístupu kyslík podľa substrátu fosforylácia , konečné produkty neúplnej oxidácie substrátu môžu byť oxidované väčšou energiou vo formeATP v prítomnosti terminálneho akceptora protónov organizmami, ktoré .
Anaeróbne dýchanie- agregát biochemické reakcie, vyskytujúce sa v bunkách živých organizmov, keď sa používa ako konečný akceptor protónov, nie kyslík a iné látky (napr. dusičnany) a odkazuje na procesy energetický metabolizmus(katabolizmus,disimilácia), ktoré sa vyznačujú oxidáciasacharidy,lipidy a aminokyseliny na zlúčeniny s nízkou molekulovou hmotnosťou.
ALE 
aeróbne a anaeróbne baktérie sa predbežne identifikujú v tekutom živnom médiu pomocou gradientu koncentrácie O2:
1. povinný aeróbny baktérie (potrebujúce kyslík) sa zhromažďujú hlavne v hornej časti skúmavky, aby absorbovali maximálne množstvo kyslíka. (Výnimka: mykobaktérie - rast filmu na povrchu v dôsledku voskovo-lipidovej membrány.)
2. obligátne anaeróbne baktérie sa zhromažďujú na dne, aby sa vyhli kyslíku (alebo nerástli). 3. Fakultatívne baktérie sa zhromažďujú hlavne v hornej časti ( Oxidačná fosforylácia je výhodnejšia ako glykolýza), možno ich však nájsť v celom médiu, pretože nezávisia od O2. štyri . mikroaerofily sa zhromažďujú v hornej časti trubice, ale ich optimum je nízka koncentrácia kyslíka. 5. Aerotolerantný anaeróby nereagujú na koncentrácie kyslíka a sú rovnomerne rozložené v skúmavke.
D 
na meranie potenciál prostredia M. Clark navrhol použiť hodnotu pH20 – zápornú logaritmusčiastočný tlak plynný vodík. Rozsah charakterizuje všetky stupne nasýtenia vodného roztoku vodíkom a kyslíkom. Aeróby rastú pri vyššom potenciáli, fakultatívne anaeróby a tie povinné pri najnižšom.)
Klasifikácia anaeróbov, rozlišovať:
Fakultatívne anaeróby
Kapneistické anaeróby a mikroaerofily
Aerotolerantné anaeróby
Stredne prísne anaeróby
povinných anaeróbov
Ak je organizmus schopný prejsť z jednej metabolickej dráhy na druhú (napríklad z anaeróbneho dýchania na aeróbne a naopak), potom sa podmienečne označuje ako fakultatívne anaeróby .
Do roku 1991 sa v mikrobiológii rozlišovala trieda kapneistických anaeróbov, ktoré si vyžadovali zníženú koncentráciu kyslík a zvýšená koncentrácia oxidu uhličitého (Brucella bovinný typ - B. abortus)
Metóda kultúrneho výskumu je izolácia zo živného média baktérií určitého typu kultiváciou s ich následnou druhovou identifikáciou. Typ baktérií sa určuje s prihliadnutím na ich štruktúru, kultúrne a environmentálne údaje, ako aj genetické, biochemické a biologické ukazovatele. Na bakteriologickú diagnostiku sa používajú schémy, ktoré schvaľuje ministerstvo zdravotníctva.
Nové druhy baktérií pochádzajúce zo živného média, ktorých vlastnosti ešte neboli stanovené, sú tzv čistá kultúra. Po konečnej identifikácii ich vlastností dostanú baktérie pochádzajúce z určitého miesta a v určitom čase meno. kmeň. V tomto prípade je povolený mierny rozdiel vo vlastnostiach, mieste alebo čase izolácie kmeňa jedného druhu.
Účel metódy:
1. Etiologická diagnostika, to znamená izolácia a identifikácia čistej kultúry baktérií.
2. Stanovenie počtu mikroorganizmov a ich špeciálnych vlastností. Napríklad špecifická reakcia na antibiotiká.
3. Identifikácia intragenerických rozdielov mikroorganizmov na základe ich epidemiologických a genetických komponentov. Je to potrebné na určenie zhody mikroorganizmov izolovaných na rôznych miestach a rôznych podmienkach, čo je dôležité pre epidemiologické účely.
Táto výskumná metóda má určitý počet fáz, ktoré sa líšia pre aeróbne, fakultatívne a obligátne aeróbne baktérie.
Šľachtenie čistej kultúry pre aeróbne a fakultatívne aeróbne baktérie.
1. fáza
ALE) Prípravné činnosti. Táto fáza zahŕňa zber, skladovanie a prepravu materiálu. V prípade potreby môže byť tiež spracovaný v závislosti od vlastností študovaných baktérií. Napríklad pri skúmaní materiálu na tuberkulózu sa na identifikáciu mikrobaktérií odolných voči kyselinám používajú alkalické alebo kyslé roztoky.
B) Obohacovanie. Táto fáza je voliteľná a vykonáva sa, ak počet baktérií v testovanom materiáli nestačí na vykonanie plnohodnotnej štúdie. Napríklad pri izolácii krvnej kultúry sa testovaná krv umiestni do média v pomere 1 ku 10 a uchováva sa jeden deň pri teplote 37 °C.
AT) Mikroskopia. Náter testovaného materiálu sa farbí a skúma sa pod mikroskopom - skúma sa mikroflóra, jej vlastnosti a množstvo. V budúcnosti je potrebné z primárneho náteru oddelene izolovať všetky mikroorganizmy v ňom.
G) Vytváranie samostatných kolónií. Materiál sa nanáša na pohár so špeciálnym selektívnym médiom, na to sa používa slučka alebo špachtľa. Potom postavte pohár hore dnom, aby ste chránili kolónie pred kondenzáciou, a uložte do termostatu na približne 20 hodín pri udržiavaní teploty 37 o.
Dôležité! Malo by sa pamätať na to, že v procese výskumu je potrebné dodržiavať pravidlá izolácie. Na jednej strane na ochranu testovaného materiálu a baktérií, ktoré sa majú odstrániť, a na druhej strane na zabránenie kontaminácii okolitých osôb a vonkajšieho prostredia.
Pokiaľ ide o podmienečne patogénne mikroorganizmy, pri ich odstránení záleží na ich kvantitatívnych charakteristikách. V tomto prípade sa uskutočňuje kvantitatívne naočkovanie, pri ktorom sa uskutoční niekoľko stonásobné zriedenie materiálu v izotonickom roztoku chloridu sodného. Potom sa výsev uskutoční do Petriho misiek s objemom 50 μl.
2. fáza
ALE ) Štúdium morfologické vlastnosti kolónie v médiách a ich mikroskopia. Misky sa skúmajú a zaznamenávajú sa vlastnosti mikroorganizmov, ich počet, rýchlosť rastu a najvhodnejšie živné médium. Pre štúdium je najlepšie vybrať kolónie umiestnené bližšie k stredu a ak sa vytvorí niekoľko typov čistých kultúr, potom študovať každú samostatne.Na štúdium morfotypovej čistoty kultúry sa používa náter z kolónií, je zafarbený (zvyčajne používa sa Gramova metóda alebo akákoľvek iná) a starostlivo mikroskopické.
B) Akumulácia čistej kultúry. K tomu sa kolónie všetkých morfotypov umiestnia do samostatných skúmaviek so živným médiom a udržiavajú sa v termostate pri určitej teplote (pre väčšinu mikroorganizmov je vhodná teplota 37 o, v niektorých prípadoch však môže byť iná).
Ako živná pôda na akumuláciu sa často používa Kliglerova pôda, ktorá má „šikmý“ vzhľad v skúmavkách, kde 2/3 jej častí sú v tvare stĺpca a 1/3 je skosený povrch, sfarbený do svetločervena . zlúčenina:
· MPA
· 0,1 % glukózy
· 1% laktózy
· Špeciálne činidlo pre sírovodík
· Fenolický červený indikátor.
3. fáza
ALE) Úroveň rastu a čistoty kultúry. Vo všeobecnom poradí má odvodená čistá kultúra rovnomerný rast a pri mikroskopickom skúmaní majú bunky rovnakú morfologickú a farbivovú štruktúru. Existujú však niektoré typy baktérií s výrazným pleoforizmom, zatiaľ čo existujú bunky, ktoré majú inú morfologickú štruktúru.
Ak sa ako živné médium použilo Kliglerovo médium, potom sa biochemické charakteristiky určujú zmenou farby stĺpca a skosenej časti. Napríklad, ak sa laktóza rozkladá, skosená časť zožltne, ak glukóza - žltnutie stĺpca; pri produkcii sírovodíka dochádza k sčerneniu v dôsledku prechodu síranu na sulfid železa.
Ako môžete vidieť na obrázku, médium Kligler má tendenciu meniť svoju farbu. Je to spôsobené tým, že k rozkladu dusíkatých látok baktériami a tvorbe alkalických produktov dochádza nehomogénne ako v kolóne (anaeróbne podmienky), tak aj na šikmej ploche (aeróbne podmienky).
V aeróbnom prostredí (šikmý povrch) sa pozoruje aktívnejšia tvorba alkálií ako v anaeróbnom prostredí (stĺpec). Preto pri rozklade glukózy sa kyselina na šikmej ploche ľahko neutralizuje. Ale pri rozklade laktózy, ktorej koncentrácia je oveľa vyššia, sa kyselina nedá neutralizovať.
Čo sa týka anaeróbneho prostredia, vzniká veľmi málo alkalických produktov, takže tu môžete pozorovať, ako prebieha fermentácia glukózy.
Ryža. Kliglerova živná pôda:
1 - počiatočné prostredie,
2 - rast E. coli
3 - rast S. paratyphi B,
4 - rast S. Typhi.
E.coli- podporuje rozklad glukózy a laktózy s tvorbou plynov, neprodukuje vodík . Spôsobuje žltnutie celého média s diskontinuitami.
S. paratyphi - podporuje rozklad glukózy s tvorbou plynov, laktóza-negatívny. Skosená časť nemení farbu, stĺpec zožltne.
S. paratyphi A- neprodukuje sírovodík.
S. paratyphi B - vzniká sírovodík (pri injekcii sa objaví čierna farba).
S. typhi - glukóza sa rozkladá bez tvorby plynov, vzniká sírovodík, odpudzujúci laktózu. Skosená časť nemení farbu, stĺpec zožltne a médium počas vstrekovania sčernie.
Shigella spp.- laktóza-negatívna, glukóza-pozitívna, sírovodík sa nevytvára. Stĺpec získa žltý odtieň a skosená časť zostane rovnaká.
B) Konečná identifikácia čistej kultúry a jej odpoveď na antibiotiká. Na tejto fázeštudujú sa biochemické, biologické, sérologické a genetické vlastnosti kultúry.
Vo výskumnej praxi nie je potrebné študovať celú škálu vlastností mikroorganizmov. Na zistenie, či mikroorganizmy patria k určitému druhu, stačí použiť najjednoduchšie testy.
CIEĽ:
1. Študijné metódy na izoláciu čistých kultúr baktérií
2. Ovládať bakteriologickú metódu diagnostiky infekčných ochorení.
TEORETICKÝ ODKAZ
Bakteriologická metóda je hlavnou metódou diagnostiky infekčných chorôb. Jeho podstatou je určenie typu infekčného agens, preto na základe výsledkov bakteriologickej metódy možno stanoviť etiologickú (konečnú) diagnózu. Hlavnou nevýhodou metódy je trvanie štúdie - od 3 do 5 dní av niektorých prípadoch aj viac.
Úspech bakteriologickej metódy do značnej miery závisí od predbežného štádia, vrátane odberu vzoriek testovaného materiálu a jeho prepravy, a návrhu odporúčania do bakteriologického laboratória. V tomto prípade je potrebné dodržiavať niekoľko pravidiel.
1. Plot testovaného materiálu sa musí vykonať pred začiatkom antibiotickej liečby alebo 8-10 hodín po poslednej dávke antibiotika. Aby sa zabránilo kontaminácii vzorky mikroflórou prostredia, je potrebné dodržiavať najprísnejšiu asepsu. K tomu použite sterilný materiál: a) vatové tampóny na odber materiálu z rany, zo slizníc (oči, hltan, nos); b) drôtená slučka na odber materiálu z vagíny, konečníka; c) injekčná striekačka na odber krvi, hnisu; d) sterilné misky na priamy zber moču, spúta, výkalov do nej.
2. Doprava Prijatý materiál by mal byť vyrobený čo najskôr (2-3 hodiny) v špeciálnych bicykloch alebo peračníkoch.
3. Smer priložený ku klinickej vzorke ako sprievodný dokument. Obsahuje základné informácie potrebné na vykonanie mikrobiologickej štúdie:
Priezvisko, meno, priezvisko, vek pacienta;
Navrhovaná diagnóza ochorenia;
Predchádzajúca antimikrobiálna liečba;
Povaha materiálu;
dátum a čas prevzatia materiálu;
Účel štúdie;
Názov zdravotníckeho zariadenia, číslo oddelenia, oddelenia;
Podpis lekára.
Bakteriologická metóda sa uskutočňuje v dvoch fázach (obr. 2.1.):
1. Izolácia čistej kultúry patogénu (1-2 dni);
2. Identifikácia čistej kultúry (1-3 dni).
V prvej fáze sa testovaný materiál vysieva na tuhé alebo tekuté živné médium, hodnotia sa kultivačné vlastnosti, vyberajú sa podozrivé kolónie a skrínujú sa na šikmom agare. Identifikačná fáza zahŕňa povinnú štúdiu morfológie, biochemických vlastností a antigénnej štruktúry izolovanej čistej kultúry, ako aj ďalšie štúdie na stanovenie citlivosti na antibiotiká, citlivosti na fágy, typizácie fágov, patogenity a perzistentných vlastností.
OTÁZKY NA PRÍPRAVU:
1. Pravidlá pre odber a prepravu testovaného materiálu na bakteriologické vyšetrenie.
2. Pravidlá vydávania odporúčania na bakteriologické vyšetrenie.
3. Metódy izolácie čistých kultúr mikroorganizmov.
4. Bakteriologická diagnostická metóda. Cieľ. Etapy. diagnostická hodnota.
NEZÁVISLÝ PRACOVNÝ PLÁN:
1. Preštudujte si tabuľky "Metódy na izoláciu čistých kultúr baktérií" a "Izolácia a identifikácia čistých kultúr".
2. Izolujte čistú kultúru zo zmesi baktérií a vykonajte jej identifikáciu - osvojte si bakteriologickú diagnostickú metódu (Práca 1)
TÉMA: Sterilizácia, asepsa, antisepsa, dezinfekcia.
Princípy, metódy kultivácie mikroorganizmov a izolácia čistých kultúr.
Bakteriologická výskumná metóda. 1. fáza
1. Oboznámte sa s hlavnými metódami dezinfekcie a sterilizácie používanými v mikrobiológii a medicíne.
2. Poznať charakteristiku metabolizmu mikroorganizmov, princípy ich kultivácie v laboratóriu.
3. Majstrovské štádium 1 bakteriologickej metódy na diagnostiku infekčných ochorení.
1. Spôsoby, prístroje a spôsoby sterilizácie živných médií, laboratórneho skla, lekárskych nástrojov.
2. Hlavné skupiny dezinfekčných prostriedkov, ich mechanizmus účinku, oblasť a spôsob aplikácie.
3. Určenie živných pôd v mikrobiologickej praxi.
4. Princíp získavania čistých kultúr mikroorganizmov a podstata bakteriologickej metódy ako „zlatého štandardu“ v diagnostike infekčných ochorení.
5. Účel a postupnosť vykonania 1. etapy bakteriologickej metódy izolácie čistých kultúr mikroorganizmov.
1. Zvoľte prostriedky, režim sterilizácie a dezinfekcie v súlade so špecifickými úlohami.
2. Popíšte navrhované živné pôdy používané v mikrobiologickej praxi.
3. Vykonajte 1. etapu bakteriologickej metódy izolácie čistých kultúr aeróbnych mikroorganizmov.
1. Bakteriostatický a baktericídny účinok nízkych a vysokých teplôt na mikroorganizmy.
2. Vplyv chemikálií rôzne triedy na mikroorganizmy. Antiseptiká a dezinfekčné prostriedky.
3. Pojmy: sterilizácia, dezinfekcia, asepsa, antisepsa.
4. Spôsoby, zariadenia a spôsoby sterilizácie, ich výber v závislosti od vlastností predmetu, ktorý sa má sterilizovať.
5. Hlavné skupiny dezinfekčných prostriedkov a taktiky ich použitia v zdravotníckych zariadeniach.
6. Princípy a metódy kultivácie mikroorganizmov.
7. Živné médiá: pojem; požiadavky na ne; klasifikácia.
8. Pojem druh, kmeň, kolónia, čistá kultúra mikroorganizmov.
9. Podstata bakteriologickej metódy a rozsah jej aplikácie.
10. Účel a postupnosť 1. etapy bakteriologickej metódy na izoláciu aeróbov.
Úlohy vykonávané počas lekcie (UIRS):
1. Oboznámte sa s prístrojmi používanými na sterilizáciu v lekárskej a mikrobiologickej praxi: parný sterilizátor (autokláv), Pasteurova pec.
2. Vybrať zariadenia a spôsoby sterilizácie živných médií, laboratórneho skla, lekárskych nástrojov.
3. Oboznámte sa s dezinfekčnými prostriedkami používanými v lekárskej a mikrobiologickej praxi. Vyberte dezinfekčné prostriedky a režim dezinfekcie pre navrhované objekty.
4. Oboznámte sa s rôznymi živnými médiami používanými v mikrobiologickej praxi, charakterizujte ich z hľadiska zloženia, konzistencie a účelu.
5. Vykonajte 1. stupeň bakteriologickej metódy na izoláciu čistých kultúr aeróbov:
5.1. Pripravte fixný prípravok z testovaného materiálu, zafarbite ho mikroskopicky podľa Grama a identifikujte identifikované mikroorganizmy podľa morfologických a farbiacich vlastností.
5.2. Skúšobný materiál zasiate metódou "zdvih s plošinou".
5.3. Skúšobný materiál zasiať Drygalského metódou (ukážka).
6. Oboznámte sa so sadou nástrojov na zber a transport patologických materiálov.
Smernice k výskumnej úlohe:
1. Oboznámenie sa s prístrojmi používanými na sterilizáciu: parný sterilizátor (autokláv), Pasteurova pec.
1.1. Parný sterilizátor (autokláv) - sterilizácia parou pod tlakom.
Najspoľahlivejšou a univerzálnou metódou sterilizácie v lekárskej a mikrobiologickej praxi je tlaková parná sterilizácia. Vyrába sa v autokláve, v ktorom sa predmety určené na sterilizáciu zahrievajú nasýtenou parou pri tlaku nad atmosférickým tlakom. Medzi údajmi na manometri a teplotou nasýtenej pary je nasledujúci vzťah:
Nulový tlak sa považuje za normálny atmosférický tlak (760 mm Hg).
Sterilizáciu je možné dosiahnuť len vtedy, ak je autokláv plne funkčný a správne obsluhovaný špeciálne vyškoleným personálom. Preto je potrebné neustále sledovať sterilizačný režim, ktorý sa vykonáva fyzikálnymi (maximálny teplomer a pod.), biologickými (biotest so spórami testovacích kultúr mikroorganizmov) a chemickými (chemické testy, indikátory ako IS) metódami.
Vykonáva sa kontrola režimu sterilizácie autoklávov chemickými prostriedkami pri každom naplnení autoklávu. Chemický test - sklenená skúmavka s chemický s určitou teplotou topenia: antipyrín, rezorcinol - 110 ± 1 °, kyselina benzoová - 120 ± 2 °, benzamid - 126 ± 1 °, močovina, nikotínamid, D (+)-manóza - 132 ± 2 °. Časť chemické testy zavedie sa anilínové farbivo (purpurová, genciánová violeť atď.), ktoré látku pri roztavení rovnomerne zafarbí. V súčasnosti sa častejšie používajú indikátory typu IS (Vinar, Rusko), ktoré predstavujú pás papiera s nanesenou vrstvou indikátorovej zmesi a sú určené na operatívnu vizuálnu kontrolu nielen teploty, ale aj času sterilizácie (IS- 120, IS-132). Sterilizačný režim sa monitoruje štvrťročne pomocou biologického testu so spórami testovanej kultúry Bacillus stearotermophilus BKM B-718.
1.2. Pasteurova pec - sterilizácia suchým teplom.
V Pasteurovej peci sa sterilizujú výrobky zo skla, kovov a gumy na báze silikónovej gumy. Režim sterilizácie: 160 °C - 150 min; 180 °C - 60 min. Riadenie režimu sterilizácie v každom cykle sa vykonáva pomocou indikátorov sterilizácie IS-160, IS-180; štvrťročne – pomocou biotestu so spórami testovacej kultúry Bacillus licheniformis PCS. G BKM B-1711 D.
2. Vyplňte doma stôl číslo 1.
Stôl 1.
Sterilizácia
3. Oboznámte sa s dezinfekčnými prostriedkami a naplňte v triede tabuľka č.2, s použitím aplikácií č.1,2.
Tabuľka 2
Dezinfekcia
4. Oboznámte sa so živnými pôdami a naplňte v triede tabuľka č. 3 "Živné médiá".
Tabuľka 3
5. Klinická mikrobiológia ako odbor lekárskej mikrobiológie rieši dve hlavné úlohy: etiologickú diagnostiku infekčného ochorenia a racionálnu voľbu etiotropnej liečby.
Hlavná metóda mikrobiologickej diagnostiky na vyriešenie týchto problémov je bakteriologická metóda. Podstatou bakteriologickej metódy je izolácia čistej kultúry patogénu, určenie jej typu a citlivosti na antimikrobiálne lieky.
Výber študovaného materiálu závisí od typu ochorenia a prevládajúcej lokalizácie patogénu v určitom štádiu jeho vývoja (patogenézy). Materiálom môže byť krv, cerebrospinálny mok, výtok z rany, spútum, výkaly, moč atď. veľký význam pri dosahovaní spoľahlivých výsledkov.
Úspešnosť izolácie čistej kultúry je určená správnosťou výber živného média a kultivačných podmienok. Neexistuje univerzálne živné médium, ktorého použitie umožní izolovať akékoľvek mikroorganizmy z akéhokoľvek testovaného materiálu. Preto, berúc do úvahy fyziologické vlastnosti možných patogénov, sa materiál vysieva na špecifické živné médium alebo komplex živných médií (špeciálne, elektívne, diferenciálne diagnostické). Niektoré mikroorganizmy vyžadujú aj špeciálne kultivačné podmienky (anaeróbne, mikroaerofilné, s vysokým obsahom oxidu uhličitého).
Patologický materiál od pacienta je často zmesou mikroorganizmov. V tejto súvislosti je úlohou ich oddeliť a získanie izolovaných kolónií. Izolovaná kolónia, ako výsledok reprodukcie jednej mikrobiálnej bunky a pozostávajúca z jedného typu bunky, je základom pre získanie čistej kultúry. V mikrobiologickej praxi sa na získanie izolovaných kolónií používajú rôzne metódy. Najčastejšie používané sú nasledovné:
1. Výsev testovacieho materiálu metóda „ťah s podložkou“.- skúšobný materiál sa nanesie na povrch hustého živného média na obmedzenej ploche a potom sa rozdelí sejbou s častými paralelnými ťahmi.
2. Drygalského metóda- materiál nanesený na prvý pohár so živným médiom a zasiaty špachtľou sa postupne naočkuje tou istou špachtľou, bez toho, aby bola sterilizovaná, pre ďalšie 1-2 poháre.
3. Metóda sektorovej plodiny– študovaný materiál sa vysieva postupne jednou slučkou na niekoľko sektorov. Zároveň je potrebná určitá technika výsevu (metóda Gould) umožňuje nielen získať izolované kolónie, ale aj určiť počet mikroorganizmov v 1 ml (g) testovaného materiálu, čo je dôležité pri hodnotení etiologickej úlohy oportúnnych mikroorganizmov (OPM).
5.1 Uskutočnenie 1. etapy bakteriologickej metódy na izoláciu aeróbov:
Z testovaného materiálu pripraviť fixovaný prípravok, farbiť podľa Gramovej metódy, mikroskopovať, identifikovať zistené mikroorganizmy podľa morfo-tinktoriálnych vlastností; dávajte pozor na počet mikroorganizmov. Zaznamenajte výsledky do protokolu a urobte záver;
Zasiať testovaný materiál na polovicu šálky s hustým živným médiom metódou „zdvih s plošinou“;
· zasiať testovaný materiál na tri platne so živným médiom metódou Drygalski (ukážka);
Misky označte dátumom očkovania a vložte ich hore dnom do termostatu pri 37 °C na 18-24 hodín.
6. Prostriedky na odber a dodávku patologického materiálu
Poznámka: * - používa sa, ak doba dodania materiálu do laboratória po jeho prijatí presiahne 1,5-2 hodiny.
Otázky na sebakontrolu:
1. Vymenujte a zdôvodnite zásady pestovania mikroorganizmov.
2. Prečo sa na výsev patologického materiálu používajú elektívne, diferenciálne diagnostické a akumulačné médiá?
3. Zdôvodnite princíp získavania čistých kultúr mikroorganizmov.
4. Prečo je bakteriologická metóda „zlatým štandardom“ v mikrobiologickej diagnostike infekčných ochorení?
5. Na čom sú založené chemické a biologické metódy získavania čistých kultúr mikroorganizmov?
6. Aký je rozdiel medzi sterilizáciou a dezinfekciou?
7. Zdôvodnite účel sterilizácie a dezinfekcie v mikrobiologickej a lekárskej praxi.
8. Zdôvodnite výhodnosť použitia tepelných indikátorových systémov na monitorovanie sterilizačného režimu (na príklade IS indikátora z Vinar, Rusko).
Literatúra:
Návody:
1. Borisov L. B. Lekárska mikrobiológia, virológia, imunológia. - M.: MIA LLC, 2002. - S. 26-29, 63-66, 150-159.
2. Pozdeev O. K. Lekárska mikrobiológia / Ed. akad. RAMS V. I. Pokrovskij. - M.: GEOTAR Medicine, 2001. - S. 76-77, 126-130, 253-265.
Doplnková literatúra:
1. Bezpečnosť práce s mikroorganizmami III - IV skupiny patogenity a helmintov: Hygienické predpisy. – M.: federálne centrumŠtátny hygienický a epidemiologický dohľad Ministerstvo zdravotníctva Ruska, 1999. - 107s.
Prednášky z mikrobiológie.
Testy.
Bakteriologická výskumná metóda. Izolácia čistej kultúry aeróbnych baktérií (1-2 stupne)
1. Podstata bakteriologickej metódy
3. Spôsoby získania izolovaných kolónií
4. Spôsoby získania čistej kultúry
1. Vykonajte primárny výsev Kochovou a Drygalského metódou
2. Izolujte čistú kultúru
Pracovný plán:
1. Bakteriologická výskumná metóda
2. Etapy bakteriologickej metódy
3. Koncept: čistá kultúra, kmeň, kolónia
4. Spôsoby získania izolovaných kolónií
5. Spôsoby získania čistej kultúry aeróbnych baktérií
Hlavnou metódou laboratórnej diagnostiky infekčných ochorení je bakteriologická metóda. Podstatou bakteriologickej metódy je izolácia patogénov zo skúmaného materiálu a jeho identifikácia (definícia rodu, druhu, odrôd).
Bakteriologická metóda vám umožňuje určiť:
1. Typ patogénu a stanovenie diagnózy ochorenia
2. Antibiotiká, ktoré zabíjajú patogén a predpisujú vhodnú liečbu
3. Fagovary a sérovary patogénu na identifikáciu zdroja infekcie
Prvým stupňom je primárna inokulácia testovaného materiálu na získanie izolovaných kolónií. Primárny výsev sa vykonáva na pamäťové médiá a DDS (pohárové médiá).
Druhou fázou je charakterizácia izolovaných kolónií a získanie čistej kultúry z nich presadením na šikmý stĺpec hlavného média.
Treťou etapou je identifikácia čistej kultúry – určenie rodu, druhu, odrôd patogénu, stanovenie citlivosti na antibiotiká, stanovenie fagovarov.
Kultúra mikroorganizmov sú baktérie pestované na živných médiách. Čistá kultúra je jeden druh baktérií pestovaných na živných médiách. V rámci druhu existujú odrody, ktoré sa líšia v jednom znaku:
1. Morfovary – líšia sa morfológiou
2. Chemovary – líšia sa biochemickými vlastnosťami
3. Sérovary – líšia sa antigénnymi vlastnosťami
4. Fagovary – líšia sa citlivosťou na fágy
Čistá kultúra je potrebná na identifikáciu, stanovenie sérovarov, fagovarov, citlivosti na antibiotiká. Kmeň je jeden druh baktérie izolovaný zo špecifického zdroja (rieka Volga, chorý Ivanov atď.). Kolónia - viditeľná akumulácia baktérií rovnakého druhu, vytvorená počas reprodukcie jednej bakteriálnej bunky na hustom živnom médiu.
Prvým stupňom štúdie je primárna inokulácia testovaného materiálu na získanie izolovaných kolónií. Pred počiatočnou inokuláciou sa vykoná mikroskopia testovaného materiálu. Testovaný materiál zvyčajne obsahuje zmes rôznych baktérií vrátane patogénov. Na izoláciu patogénu je potrebné získať izolované kolónie (baktérie rovnakého druhu) výberom živného média a použitím špeciálnych metód výsevu.
Existujú dva spôsoby získania izolovaných kolónií:
1. Drygalského metóda
