एक बैक्टीरियोलॉजिकल अध्ययन एक सूक्ष्मजीवविज्ञानी निदान करने के लिए उनके गुणों को अलग करने और उनका अध्ययन करने के लिए डिज़ाइन किया गया एक अध्ययन है।

परीक्षण सामग्री को रोगाणुहीन बर्तनों में सड़न रोकनेवाला परिस्थितियों में लिया जाना चाहिए और यथाशीघ्र प्रयोगशाला में पहुंचाया जाना चाहिए। यदि आवश्यक हो, तो नमूनों को रेफ्रिजेरेटेड संग्रहित किया जाना चाहिए। नमूना लेने की तकनीक वस्तु, रोग की प्रकृति और सूक्ष्मजीव के गुणों पर निर्भर करती है। बैक्टीरियोलॉजिकल शोध के सबसे सामान्य तरीकों में से एक बैक्टीरियोस्कोपी है।

गैर-स्थिर जीवाणुओं का अध्ययन करने के लिए, दो विधियों का उपयोग किया जाता है: कुचल (स्लाइड और कवरस्लिप के बीच) ड्रॉप और। यह याद रखना चाहिए कि गैर-स्थिर जीवाणुओं की तैयारी संक्रामक होती है।

स्मीयर का उपयोग निश्चित तैयारी के बैक्टीरियोस्कोपी के लिए किया जाता है। उन्हें तैयार करने के लिए, परीक्षण तरल की एक बूंद कांच की स्लाइड की सतह पर फैली हुई है और फिर सूख गई है। दवा को ठीक करने का सबसे आम तरीका इसे गैस बर्नर की लौ के माध्यम से ले जाना है। कुछ मामलों में, फिक्सिंग यौगिकों का उपयोग किया जाता है। निश्चित तैयारी आमतौर पर दागदार होती है (सूक्ष्मजीवों का धुंधला देखें)। संख्या के लिए आवश्यक तत्वबैक्टीरियोलॉजिकल अध्ययनों में बैक्टीरियल लूप या पाश्चर पिपेट द्वारा उत्पादित इनोक्यूलेशन और उपसंस्कृति शामिल हैं। लूप को फ्लेम रोस्टिंग द्वारा निष्फल किया जाता है, फिर असिंचित अगर के एक क्षेत्र को छूकर या बाँझ तरल में रिंस करके ठंडा किया जाता है। पाश्चर पिपेट का उपयोग करते समय, इसकी नोक को चिमटी से तोड़ दिया जाता है, पिपेट को बर्नर की लौ के माध्यम से कई बार ले जाया जाता है और ठंडा होने दिया जाता है। बुवाई के समय, तरल और ठोस पोषक माध्यम का उपयोग किया जाता है। तिरछी अगर पर बुवाई करते समय, बैक्टीरिया की संस्कृति को अगर की सतह पर एक लूप के साथ रगड़ा जाता है। जब एक अगर या जिलेटिन कॉलम की मोटाई में बुवाई करते हैं, तो पोषक माध्यम को टेस्ट ट्यूब के नीचे एक लूप या एक विशेष सुई के साथ छेद दिया जाता है। तरल माध्यम में बुवाई करते समय, यह सुनिश्चित करना आवश्यक है कि तरल बाहर न गिरे और परखनली और स्टॉपर्स के किनारों को गीला न करें। गैस बर्नर की लौ के पास टीकाकरण और उपसंस्कृति की जानी चाहिए, टेस्ट ट्यूब लंबे समय तक खुली नहीं रहनी चाहिए, संस्कृति के साथ लूप या पाश्चर पिपेट कुछ भी नहीं छूना चाहिए; ट्यूब को बंद करने से पहले इसके किनारों को जला देना चाहिए। इनोक्यूलेटेड ट्यूबों को तुरंत लेबल किया जाना चाहिए।

बैक्टीरियोलॉजिकल रिसर्च में सबसे महत्वपूर्ण कदम है पहचान - एक शुद्ध संस्कृति के रूप में प्राप्त बैक्टीरिया की प्रजातियों या प्रकार का निर्धारण। बैक्टीरिया की पहचान करते समय, उनके शारीरिक और जैव रासायनिक गुणों, विष निर्माण का अध्ययन किया जाता है। बैक्टीरिया की पहचान के लिए सीरोलॉजिकल तरीके व्यापक रूप से उपयोग किए जाते हैं (प्रतिक्रियाएं और)। कई मामलों में, परीक्षण सामग्री के साथ प्रयोगशाला जानवरों के संक्रमण या बैक्टीरिया की परिणामी संस्कृति और जानवरों में विशिष्ट रोग परिवर्तनों की पहचान के आधार पर सूक्ष्मजीवों की पहचान की जैविक विधि प्रभावी होती है।

शुद्ध संस्कृतियों को अलग करने के लिए यांत्रिक और जैविक विधियों का उपयोग किया जाता है। एक यांत्रिक विधि का एक उदाहरण: परीक्षण सामग्री की एक बूंद को घने सतह पर एक ही बाँझ रंग या जीवाणु पाश के साथ रगड़ दिया जाता है। तरक्की का जरिया, क्रमिक रूप से पहले, दूसरे और तीसरे में। एक शुद्ध संस्कृति का अलगाव विकसित व्यक्तिगत उपनिवेशों से किया जाता है और इसमें एक ताजा पोषक माध्यम पर उनका अध्ययन और स्क्रीनिंग शामिल होती है। शुद्ध संस्कृतियों को अलग करने के लिए जैविक तरीके पृथक सूक्ष्म जीव की एक या दूसरी संपत्ति को ध्यान में रखते हुए आधारित होते हैं, जो इसे अध्ययन के तहत सामग्री में मौजूद अन्य रोगाणुओं से अलग करता है।

जैविक विधि में, इस प्रकार के पोषक माध्यम का उपयोग किया जाता है, जिसमें ऐसी परिस्थितियाँ निर्मित होती हैं जो एक निश्चित प्रकार के रोगाणुओं के विकास के लिए अनुकूल होती हैं। जैविक विधियों में प्रयोगशाला पशुओं का संक्रमण भी शामिल है जो पृथक प्रकार के जीवाणुओं के प्रति संवेदनशील होते हैं।

जीवाणु अनुसंधान एक रोगी में, वाहक में या पर्यावरणीय वस्तुओं पर रोगजनक सूक्ष्मजीवों का पता लगाने के तरीकों का एक समूह है। जीवाणु संबंधी अध्ययनउनका उपयोग सशर्त रूप से रोगजनक और सैनिटरी-संकेतक रोगाणुओं का पता लगाने के लिए भी किया जाता है जो एक निश्चित वातावरण (वस्तु) के माइक्रोबियल परिदृश्य का अध्ययन करने के लिए बाहरी वातावरण के प्रदूषण की डिग्री की विशेषता रखते हैं। वैज्ञानिक अनुसंधान के लिए, किसी व्यक्ति के आस-पास के पर्यावरण की स्वच्छता और स्वच्छता संबंधी विशेषताओं के निदान के लिए, संक्रामक रोगों की रोकथाम के लिए बैक्टीरियोलॉजिकल शोध का उपयोग किया जा सकता है।

बैक्टीरियोलॉजिकल अनुसंधान की सामग्री और विधि विश्लेषण के उद्देश्य, पर्यावरण की स्थिति, रोगजनन और रोग के पाठ्यक्रम पर निर्भर करती है। बैक्टीरिया की उपस्थिति में, रक्त संस्कृति द्वारा सूक्ष्म जीव का पता लगाया जाता है। गंभीर स्थानीय घावों के मामलों में, रोगज़नक़ को प्रभावित अंग (डिप्थीरिया, पेचिश, सूजाक, आदि) के निर्वहन या स्राव में देखा जाना चाहिए। अंत में, एक जटिल पाठ्यक्रम वाले रोगों में, जब (जैसे, उदाहरण के लिए, टाइफाइड बुखार में) जीवाणु को छोटी आंतों के घावों से बदल दिया जाता है, प्रत्येक चरण में एक उपयुक्त शोध पद्धति का उपयोग किया जाता है: रक्त संस्कृतियों को पहले सप्ताह के दौरान किया जाता है। रोग, और सीरोलॉजिकल परीक्षण दूसरे में सबसे विश्वसनीय है, तीसरे सप्ताह से शुरू होने पर मल बोने पर सकारात्मक परिणाम प्राप्त होता है; बाद की विधि का उपयोग नियंत्रण अध्ययन के रूप में भी किया जाता है ताकि दीक्षांत समारोह में बैक्टीरिया वाहक का पता लगाया जा सके और उनकी निगरानी की जा सके।

इनमें से किसी भी कार्य का कार्यान्वयन सूक्ष्मजीवों को अलग करने और पहचानने के लिए डिज़ाइन किए गए तरीकों का उपयोग करके किया जाता है। सूक्ष्म जीव की विशेषताओं के आधार पर, विधियों के पूरे परिसर या उसके भागों का उपयोग किया जाता है।

सामग्री की सूक्ष्म जांच के आधार पर बैक्टीरियोस्कोपी सबसे सुलभ तकनीक है। जब ताजा तैयारियों की माइक्रोस्कोपी की जाती है, तो कोई कुछ सूक्ष्म रासायनिक प्रतिक्रियाओं (उदाहरण के लिए, लुगोल के घोल के साथ आयोडोफिलिक बैक्टीरिया का धुंधलापन) या बैक्टीरिया के विभिन्न संरचनात्मक भागों के चयनात्मक धुंधलापन का उपयोग कर सकता है।

दाग वाली तैयारी में बैक्टीरिया को अधिक स्पष्ट रूप से पहचाना जा सकता है। परीक्षण सामग्री को कांच की स्लाइड पर एक पतली और यथासंभव एक परत में लगाया जाता है। तैयारी को हवा में सूखने दें और इसे आम तौर पर स्वीकृत तरीकों में से एक द्वारा ठीक करें, लेकिन अधिकतर ज्वलन द्वारा, यानी, दो या तीन बार जल्दी से बर्नर की लौ पर तैयारी को पकड़कर रखें ताकि गिलास गर्म हो, लेकिन गर्म न हो। तैयारी, निर्धारण के बाद ठंडा किया जाता है, एक साधारण या अंतर दाग के साथ दाग दिया जाता है (सूक्ष्मजीवों का धुंधला देखें)। फ्लोरोसेंट माइक्रोस्कोपी में, देशी और सूखी दोनों तरह की तैयारी का उपयोग किया जाता है। इस मामले में, कुछ रंगों के साथ उपचार के कारण सूक्ष्म जीव या संपूर्ण सूक्ष्म जीव की संरचनाएं पराबैंगनी या छोटी नीली किरणों में चमकने लगती हैं। एक अन्य संशोधन में, रोगाणुओं को फ्लोरोसेंट (रंग) के साथ लेबल किए गए विशिष्ट सीरा के साथ इलाज किया जाता है। सीरम के अनुरूप बैक्टीरिया चमकेंगे क्योंकि उन पर लेबल वाला सीरम जमा हो जाता है। विषम जीवाणु नहीं चमकेंगे।

बैक्टीरियोस्कोपी की विधि का व्यापक रूप से कुछ संक्रामक रोगों (सूजाक, तपेदिक, आवर्तक बुखार) के बैक्टीरियोलॉजिकल निदान के लिए उपयोग किया जाता है, साथ ही साथ एक अंग (टॉन्सिल, योनि), उत्पाद या अन्य वस्तु के माइक्रोफ्लोरा के पूरे परिसर के अध्ययन में।

बीजारोपण विधि, यानी वांछित सूक्ष्मजीव की शुद्ध संस्कृति का अलगाव, बैक्टीरियोस्कोपी की तुलना में बैक्टीरियोलॉजिकल निदान का एक अधिक सटीक और विश्वसनीय तरीका है। पेट्री डिश में डाले गए घने पोषक माध्यम की सतह पर ताजा सामग्री को लिप्त किया जाता है। प्राथमिक टीकाकरण पारंपरिक मीडिया पर किया जाता है जो किसी दिए गए सूक्ष्म जीव के अनुकूल होता है, अंतर या चयनात्मक मीडिया पर। पोषक माध्यम का चुनाव (देखें), साथ ही बुवाई के लिए ताजी सामग्री के पूर्व-उपचार की विधि, सहवर्ती बाहरी माइक्रोफ्लोरा के साथ इसके संदूषण की डिग्री पर निर्भर करती है। 24-48 घंटे के बाद। किसी दिए गए सूक्ष्म जीव के लिए इष्टतम तापमान पर थर्मोस्टेट में सामग्री, कप की जांच की जाती है और मीडिया पर संदिग्ध कॉलोनियों को टीका लगाया जाता है जो इस रोगजनक के प्रजनन को बढ़ावा देते हैं। इस प्रकार, सजातीय बैक्टीरिया की एक संस्कृति प्राप्त की जाती है, जिसे पहचाना जाना चाहिए।

एक सूक्ष्म जीव की पहचान चित्रित तैयारी में और सूक्ष्म जीवों के एक रूप की परिभाषा और उनकी गतिशीलता के लिए एक कुचल बूंद (देखें) में इसके आकारिकी के अध्ययन के साथ शुरू होती है। अगला कदम प्रत्येक प्रजाति के लिए विशिष्ट संयोजनों में कार्बोहाइड्रेट, अमीनो एसिड और यूरिया को तोड़ने के लिए बैक्टीरिया की एंजाइमेटिक क्षमता का अध्ययन करना है। बैक्टीरिया में सबसे अधिक अध्ययन की जाने वाली चीनी और प्रोटियोलिटिक एंजाइम होते हैं।

प्रत्येक जीनस और सूक्ष्मजीवों की प्रजातियों की विशेषता वाले अन्य गुणों के अध्ययन द्वारा एक सूक्ष्म जीव की पहचान को पूरक किया जाना चाहिए। इन गुणों में विभिन्न जानवरों (हेमोलिसिस) के एरिथ्रोसाइट्स को चुनिंदा रूप से भंग करने, रक्त प्लाज्मा (प्लाज्मा जमावट) को जमा करने, फाइब्रिन क्लॉट (फाइब्रिनोलिसिस) को भंग करने आदि की क्षमता शामिल है। बैक्टीरिया की इन सभी विशेषताओं का उपयोग अंतर संकेतों के रूप में उनकी पहचान में किया जा सकता है।

कुछ प्रजातियों के रोगाणुओं की अंतिम पहचान, मुख्य रूप से आंतों के परिवार के रोगजनक बैक्टीरिया में सीरोलॉजिकल पहचान (माइक्रोबियल पहचान देखें) शामिल है। आमतौर पर इसके लिए एक एग्लूटिनेशन रिएक्शन का उपयोग किया जाता है, अर्थात, उसी नाम के इम्यून सीरम के प्रभाव में बैक्टीरिया के संचय का पता लगाया जाता है। किसी विशेष प्रजाति के खिलाफ सीरम में रोगाणुओं का एकत्रीकरण उस प्रजाति से संबंधित होने का संकेत देता है। आमतौर पर, एग्लूटिनेशन प्रतिक्रिया लगभग कांच पर और सीरम कमजोर पड़ने के साथ टेस्ट ट्यूब में अंतिम निर्धारण के लिए रखी जाती है।

वर्णित तरीके से कई रोगाणुओं को पूरी तरह से निर्धारित नहीं किया जा सकता है। फिर पहचान को प्रयोगशाला जानवरों के संक्रमण द्वारा पूरक किया जाना चाहिए, क्योंकि कुछ बैक्टीरिया रोगजनकता या विषाक्तता की विशेषता रखते हैं, जो जानवरों के संक्रमित होने पर प्रकट होता है। कुछ मामलों में, जानवरों का संक्रमण रोगजनक रोगाणुओं के संचय की एक विधि के रूप में भी कार्य करता है।

आकृति विज्ञान, जैव रासायनिक, सीरोलॉजिकल, और जहां आवश्यक हो, इसके जैविक गुणों के अध्ययन के दौरान एकत्र की गई संस्कृति की सभी विशेषताओं की तुलना ही पहचान के लिए आधार प्रदान कर सकती है। अध्ययन के सकारात्मक परिणाम के साथ उत्तर मुश्किल नहीं है यदि पृथक सूक्ष्म जीव विशिष्ट है। इस मामले में, जीनस, प्रजातियों और, यदि निर्धारित किया जाता है, तो जीवाणु के प्रकार का संकेत दिया जाता है। एक विशिष्ट विशेषता से कुछ गुणों में विचलन करने वाले सूक्ष्म जीव को अलग करते समय, विचलन विशेषता को इंगित करने वाला एक उत्तर दिया जाता है। इस मामले में, अध्ययन को दोहराने के लिए उपयोगी है यदि रोग का कोर्स या सामग्री संग्रह की शर्तें अनुमति देती हैं। अन्य, अधिक जटिल विधियों द्वारा अतिरिक्त अध्ययन के लिए एटिपिकल रोगाणुओं की संस्कृति के अधीन होना भी उपयोगी है।

एक बैक्टीरियोलॉजिकल अध्ययन के नकारात्मक परिणाम सापेक्ष महत्व के हैं और केवल यह दिखाते हैं कि सामग्री के अध्ययन किए गए हिस्से में वांछित रोगाणु नहीं थे या व्यवहार्य नहीं थे। हालाँकि, वे एक अलग हिस्से में मौजूद हो सकते हैं। इसलिए, उदाहरण के लिए, जब बेसिलस वाहक (टाइफाइड बुखार, पेचिश, डिप्थीरिया) की जांच की जाती है, तो बार-बार अध्ययन की आवश्यकता होती है।

उनमें कुछ बैक्टीरिया की उपस्थिति के विश्लेषण का अध्ययन करने के लिए, बैक्टीरियोस्कोपिक विधि सहित विभिन्न नैदानिक ​​विधियों का उपयोग किया जाता है। इस लेख में इस पद्धति की विशेषताओं के साथ-साथ बैक्टीरियोलॉजिकल शोध पद्धति पर चर्चा की जाएगी।

बैक्टीरियोस्कोपिक निदान पद्धति का सार

एक नमूने की जांच करने की बैक्टीरियोस्कोपिक विधि का उद्देश्य परीक्षण पदार्थ में सूक्ष्मजीवों की पहचान करना है, साथ ही इन सूक्ष्मजीवों के गुणों का विस्तार से अध्ययन करना, विचाराधीन माध्यम में उनकी संख्या और व्यवहार को स्पष्ट करना है। विश्लेषण के अध्ययन की इस पद्धति के लाभ सरलता, गति और पहुंच हैं। इसे कम से कम उपकरणों और रसायनों का उपयोग करके लगभग किसी भी प्रयोगशाला में किया जा सकता है। इसके नुकसान में रोगाणुओं के व्यवहार की पूरी तस्वीर प्राप्त करने की असंभवता शामिल है।

शोध के लिए आवश्यक सामग्री

बैक्टीरियोस्कोपिक विधि द्वारा विश्लेषण का अध्ययन करने के लिए, निम्नलिखित उपकरणों की आवश्यकता होती है:

1. धातु का लूप।
2. फिसलना। यह आइटम साफ होना चाहिए, क्योंकि कोई भी संदूषण नमूने की स्थिति को प्रभावित कर सकता है।
3. चिमटी।
4. फिल्टर पेपर।

नई स्लाइड्स को 1% सोडा के घोल से साफ किया जाता है। इस तरह के घोल में उबालने के बाद, कांच को आसुत जल से धोया जाता है, एक कमजोर घोल हाइड्रोक्लोरिक एसिड केऔर फिर फिर से आसुत जल के साथ। प्रयुक्त ग्लास को कई चरणों में साफ किया जाता है: पहले उन्हें 60-120 मिनट के लिए सल्फ्यूरिक एसिड के घोल में रखा जाता है, फिर उन्हें सोडा के घोल में उबाला जाता है, जिसके बाद गिलास को पानी से धोया जाता है। उसके बाद, ग्लास को मेडिकल अल्कोहल में डुबोया जाता है।

इंस्ट्रूमेंट ग्लास को या तो अल्कोहल में या कसकर बंद कंटेनर में रखें। और बाद के मामले में, कांच सूखा होना चाहिए।

इस अध्ययन के लिए, आपको निम्नलिखित रासायनिक अभिकर्मकों की भी आवश्यकता होगी:

• शराब;
• लुगोल का समाधान;
• रंग।

सबसे अधिक इस्तेमाल की जाने वाली डाई ज़ीहल मैजेंटा, मेथिलीन ब्लू और कार्बोलिक जेंटियन वायलेट हैं। अंतिम डाई पांच प्रतिशत कार्बोलिक पानी में साधारण फुकसिन का घोल है।

अनुसंधान प्रगति

आप संस्कृति को उसके मूल और चित्रित दोनों रूपों में देख सकते हैं। बाद के मामले में, सूक्ष्मजीवों और एकल बैक्टीरिया के दोनों उपनिवेश मर जाएंगे, जिससे इन सरल जीवों की संरचना से बेहतर परिचित होना संभव हो जाता है। अपने मूल रूप में दवा का अध्ययन करते समय, प्रयोगशाला सहायक को रोगाणुओं की गतिविधि के बारे में अधिक जानकारी प्राप्त होती है। दोनों ही मामलों में, माइक्रोस्कोप का उपयोग करके दवा की जांच की जाती है।

माध्यम का धुंधलापन दो चरणों में किया जाता है, पहले प्रक्रिया के लिए तैयारी तैयार की जाती है और उसके बाद ही इसे दाग दिया जाता है। नमूना तैयार करने की प्रक्रिया इस प्रकार है:

1. अनुसंधान के लिए अभिप्रेत नमूना एक वृत्त या अंडाकार के रूप में इंस्ट्रूमेंट ग्लास पर समान रूप से वितरित किया जाता है। यदि सामग्री में विदेशी अशुद्धियाँ हैं (उदाहरण के लिए, मवाद), तो परीक्षण के नमूने को जोड़ने से पहले गिलास में 1-2 बूंद पानी डाला जाता है।
2. उसके बाद, परिणामस्वरूप स्मीयर सूख जाना चाहिए।
3. जैसे ही धब्बा सूख जाता है, इसे बर्नर से लौ के साथ तय किया जाना चाहिए।

इस तरह से ठीक करने के लिए, इंस्ट्रुमेंट ग्लास को लौ के ऊपर तीन बार रखा जाता है। यदि स्मीयर को पर्याप्त रूप से ठीक किया जाता है, तो प्रयोग करने वाले प्रयोगशाला सहायक को उंगलियों में जलन महसूस होगी।

इस प्रक्रिया के अंत में, नमूना दागदार होता है।

नमूना धुंधला तरीके

एक ही डाई का उपयोग करके, रंग सरल हो सकता है। और जटिल, जिसमें, उनमें से एक या दूसरे के अनुसार जीवाणु कोशिकाओं को सटीक रूप से अलग करने के लिए विशेषताएँकई अलग-अलग धुंधला रसायनों को क्रमिक रूप से नमूने पर लागू किया जाता है। जटिल धुंधलापन का एक उदाहरण ग्राम और ज़ीहल-नील्सन विधियाँ हैं।

ग्राम विधि

ग्राम विधि आपको यह निर्धारित करने की अनुमति देती है रासायनिक संरचनाकोशिका झिल्ली। इस पद्धति के लिए धन्यवाद, ग्राम के अनुसार बैक्टीरिया का वर्गीकरण पेश किया गया था: ग्राम-पॉजिटिव बैक्टीरिया (जिसमें कई बीमारियों के प्रेरक एजेंट शामिल हैं) धुंधला होने के बाद एक गहरे बैंगनी रंग का हो जाता है, और ग्राम-नेगेटिव बैक्टीरिया एक विशेषता लाल रंग का हो जाता है। ग्राम विधि में निम्नलिखित चरण होते हैं:

1. सबसे पहले, दवा को एक मिनट के लिए लुगोल के समाधान के साथ इलाज किया जाता है।
2. लुगोल के साथ उपचार के बाद, नमूना शराब से रंगा हुआ है।
3. फिर तैयारी को आसुत जल से धोया जाता है और इसके अलावा फुकसिन के साथ दाग दिया जाता है।

ज़ीहल-नील्सन विधि

Ziehl-Nielsen विधि का उपयोग एसिड-संवेदनशील बैक्टीरिया को निर्धारित करने के लिए किया जाता है, जिनकी कोशिका झिल्ली में बड़ी मात्रा में लिपिड होते हैं, उदाहरण के लिए, तपेदिक रोगजनक। इस पद्धति पर काम पाँच चरणों में किया जाता है:

1. एक कांच की स्लाइड पर एक फिल्टर पेपर रखा जाता है, जिस पर ज़ील के फुकसिन की थोड़ी मात्रा लगाई जाती है।
2. कांच की स्लाइड को तब तक गर्म किया जाता है जब तक कि एक विशिष्ट वाष्प प्रकट न हो जाए। भाप आने के बाद गिलास को ठंडा होने दें। इस प्रक्रिया को दो बार और दोहराया जाता है, जिसके बाद गिलास को फिर से ठंडा होने दिया जाता है।
3. उसके बाद, कागज को हटाने के बाद, आसुत जल से फ्यूकसिन को इंस्ट्रूमेंट ग्लास से धोया जाता है।
4. फिर कांच को हाइड्रोक्लोरिक या सल्फ्यूरिक एसिड के घोल में तब तक रखा जाता है जब तक कि नमूने का रंग पूरी तरह से नष्ट न हो जाए।
5. अंत में, मैथिलीन ब्लू का एक घोल फीका पड़ा हुआ तैयारी पर लगाया जाता है, कांच को आसुत जल से धोया जाता है और माइक्रोस्कोप के तहत परिणामी तैयारी की आगे की जांच के लिए सूखने की अनुमति दी जाती है।

लेफ़लर विधि

सरल धुंधला विधियों में लेफ़लर विधि है। इसके साथ, सभी जीवाणु प्राप्त करते हैं नीला रंग. यह विधि दो चरणों में काम करती है:

1. स्मीयर पर एक फिल्टर पेपर रखा जाता है, जिस पर मेथिलीन ब्लू लेफ्लर का घोल लगाया जाता है। इस अवस्था में, दवा को 3-5 मिनट के लिए छोड़ दिया जाता है।
2. इस अवधि के बाद, तैयारी को पानी से धोया जाता है और सुखाया जाता है, जिसके बाद माइक्रोस्कोप के तहत इसकी जांच की जा सकती है।

बैक्टीरियोस्कोपिक विधि से, कम से कम दो तैयारियों को दाग दिया जाता है, और उनमें से एक को दाग दिया जाता है सरल विधिऔर एक जटिल है।

बैक्टीरियोलॉजिकल विधि

अक्सर, विश्लेषण की जांच करते समय, किसी विशेष दवा के लिए रोगज़नक़ की संवेदनशीलता को निर्धारित करना आवश्यक हो जाता है। इस मामले में, नमूने की जांच बैक्टीरियोलॉजिकल विधि द्वारा की जाती है। यह विधिनिम्नलिखित चरणों से मिलकर बनता है:

• सबसे पहले, आपको विशिष्ट प्रकार के रोगाणुओं की पहचान करने के लिए संस्कृति को साफ करने की आवश्यकता है। ऐसा करने के लिए, नमूना को ऐसे वातावरण में रखा जाना चाहिए जिसमें बैक्टीरिया के विकास का पता लगाने की सबसे अधिक संभावना हो। इसके टीकाकरण के दौरान जैव सामग्री को यांत्रिक रूप से अलग करना भी संभव है।
• एक शुद्ध कल्चर प्राप्त करने के बाद, एक बैक्टीरियोस्कोपिक विधि का उपयोग करके उससे लिए गए नमूनों की जांच की जाती है।

सूक्ष्मजीवों का पता लगाने के लिए उपयोग किए जाने वाले मीडिया के उदाहरण निम्नलिखित हैं:

• Elschnig का माध्यम, जिसमें एक तिहाई हॉर्स सीरम और दो-तिहाई शोरबा होता है।
• लोफ्लर का सीरम, जिसका उपयोग डिप्थीरिया रोगजनकों का पता लगाने के लिए किया जाता है। इस माध्यम में 3/4 हॉर्स या गोजातीय सीरम और 1/4 1% ग्लूकोज शोरबा होता है।
• ब्लड एगर स्ट्रेप्टोकोकी का पता लगाने और जीवाणुरोधी दवाओं के प्रभाव के लिए उनकी संवेदनशीलता का परीक्षण करने के लिए उपयोग किया जाता है। इस माध्यम में 5-10% पशु सीरम और अगर होते हैं।

बैक्टीरियोस्कोपी विश्लेषण के प्रकार

मल परीक्षण की बैक्टीरियोस्कोपी

फेकल विश्लेषण की बैक्टीरियोस्कोपिक परीक्षा के लिए, रोगी के विश्लेषण के नमूने की आवश्यकता होती है। यदि आंतों के माइक्रोफ्लोरा का विश्लेषण करना आवश्यक है, तो उल्लंघन जिसमें डिस्बैक्टीरियोसिस या पाचन तंत्र के संक्रामक रोगों की उपस्थिति का संकेत मिलता है, नमूना एक लूप का उपयोग करके लिया जाता है जिसे गुदा में लगभग 10 सेंटीमीटर गहरा डाला जाता है।

मल के नमूने की जांच करते समय, निम्नलिखित खतरनाक सूक्ष्मजीवों का पता लगाया जा सकता है:

• स्टेफिलोकोसी।
• क्लेबसिएला, जिसकी उपस्थिति बृहदान्त्र को नुकसान का संकेत देती है।
• स्यूडोमोनास एरुगिनोसा जो विषाक्त पदार्थों को छोड़ता है जो मनुष्यों के लिए बेहद खतरनाक हैं।

मानव शरीर में स्यूडोमोनास एरुगिनोसा की उपस्थिति से रक्त विषाक्तता और मेनिन्जाइटिस हो सकता है - ऐसे रोग जो घातक हो सकते हैं।

मूत्र परीक्षण की बैक्टीरियोस्कोपी

बैक्टीरियोस्कोपिक परीक्षा के लिए एक मूत्र परीक्षण दिया जाता है यदि मूत्र प्रणाली की सूजन का संदेह होता है और पाइलोनफ्राइटिस और सिस्टिटिस जैसे रोगों की उपस्थिति होती है, जिसके प्रेरक एजेंट क्रमशः एस्चेरिचिया कोलाई और यौन संचारित रोगों के कुछ रोगजनक हैं। इस तरह के अध्ययन के लिए, 50 से 100 मिलीलीटर मूत्र की आवश्यकता होती है, और मूत्र को एक बाँझ कंटेनर में संग्रहित किया जाना चाहिए। विश्लेषण पास करने से पहले, अच्छी तरह से धोना आवश्यक है ताकि मूत्र में तीसरे पक्ष की अशुद्धियाँ कम हों। मासिक धर्म के दौरान पेशाब करने की सलाह नहीं दी जाती है।

शिशुओं में मूत्र प्रणाली के रोगों का पता लगाने के लिए मूत्र का बैक्टीरियोस्कोपिक विश्लेषण अपरिहार्य है। इस मामले में, मूत्र को एक कैथेटर के माध्यम से एक बाँझ कंटेनर में एकत्र किया जाता है। मूत्र के नमूने का अध्ययन जल्द से जल्द किया जाना चाहिए, अन्यथा रोगजनकों का पता लगाना मुश्किल होगा।

थूक बैक्टीरियोस्कोपी

थूक का विश्लेषण करते समय, दो स्मीयरों की जांच की जाती है। उनमें से एक का अध्ययन कोच के बेसिली - तपेदिक के प्रेरक एजेंट की उपस्थिति के लिए किया जा रहा है। दूसरे अध्ययन के परिणामों के आधार पर, थूक में अन्य रोगाणुओं की उपस्थिति के बारे में निष्कर्ष निकाला जाता है।

तपेदिक के लिए थूक का विश्लेषण करने के लिए, नमूने को ज़ीहल-नील्सन विधि के अनुसार दाग दिया जाता है।

अन्य रोगाणुओं की उपस्थिति का विश्लेषण करने के लिए, ग्राम विधि का उपयोग करके नमूने को दाग दिया जाता है। ग्राम स्टेनिंग का उपयोग करके बैक्टीरियोस्कोपिक विधि का उपयोग करके, न्यूमोकोकस की पहचान करना संभव है, एक जीवाणु जो निमोनिया का कारण बनता है। इसके अलावा, इस योजना के अनुसार एक नमूने के साथ काम करते समय, थूक में स्ट्रेप्टोकोकी की उपस्थिति का पता लगाना संभव है - एनजाइना के प्रेरक एजेंट, साथ ही साथ स्टैफिलोकोकस ऑरियस। उत्तरार्द्ध सूक्ष्मजीव मानव स्वास्थ्य के लिए एक विशेष खतरा बन गया है। यह प्युलुलेंट प्रक्रियाओं और फोड़े के गठन को भड़काता है, जिसमें शामिल हैं आंतरिक अंग.

उपसंहार

बैक्टीरियोस्कोपिक डायग्नोस्टिक पद्धति सूक्ष्म जीव विज्ञान में मुख्य शोध विधियों में से एक है। कमियों के बावजूद, इस पद्धति का व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है आधुनिक दवाईरोगों की एक विस्तृत विविधता के निदान के लिए, जिनमें से कुछ, उदाहरण के लिए, तपेदिक, मनुष्यों के लिए एक विशेष खतरा पैदा करते हैं।

बैक्टीरियोलॉजिकल रिसर्च मेथड (बीएलएमआई)- पोषक मीडिया पर खेती द्वारा बैक्टीरिया की शुद्ध संस्कृतियों के अलगाव और सूक्ष्मजीवों की रूपात्मक, सांस्कृतिक, जैव रासायनिक, आनुवंशिक, सीरोलॉजिकल, जैविक, पारिस्थितिक विशेषताओं के अध्ययन के आधार पर प्रजातियों के लिए उनकी पहचान पर आधारित एक विधि।

स्वास्थ्य मंत्रालय द्वारा अनुमोदित मानक नैदानिक ​​​​योजनाओं का उपयोग करके संक्रमण का बैक्टीरियोलॉजिकल निदान किया जाता है।

शुद्ध संस्कृति -एक ही प्रजाति के जीवाणु, पोषक माध्यम पर उगाए जाते हैं, जिनके गुणों का अध्ययन किया जा रहा है।

तनाव- एक विशिष्ट समय पर एक विशिष्ट स्रोत से पृथक एक ही प्रजाति के सूक्ष्मजीवों की पहचान की गई शुद्ध संस्कृति। एक ही प्रजाति के उपभेद जैव रासायनिक, आनुवंशिक, सीरोलॉजिकल, जैविक और अन्य गुणों के साथ-साथ अलगाव के स्थान और समय में बहुत भिन्न हो सकते हैं।

बीएलएमआई के लक्ष्य:

1. एटियलॉजिकल निदान: सूक्ष्मजीवों की शुद्ध संस्कृति का अलगाव और इसकी पहचान।

2. अतिरिक्त गुणों का निर्धारण, उदाहरण के लिए, एंटीबायोटिक दवाओं और बैक्टीरियोफेज के लिए सूक्ष्मजीव की संवेदनशीलता।

3. सूक्ष्मजीवों की संख्या का निर्धारण (यूपीएम के कारण होने वाले संक्रमणों के निदान में महत्वपूर्ण)।

4. सूक्ष्मजीवों की टाइपिंग, यानी अध्ययन के आधार पर अंतर-विशिष्ट अंतरों का निर्धारण जेनेटिकतथा महामारी विज्ञान(फागोवर और सेरोवर) मार्करइसका उपयोग महामारी विज्ञान के उद्देश्यों के लिए किया जाता है, क्योंकि यह आपको विभिन्न अस्पतालों, भौगोलिक क्षेत्रों में विभिन्न रोगियों और बाहरी वातावरण की विभिन्न वस्तुओं से पृथक सूक्ष्मजीवों की समानता स्थापित करने की अनुमति देता है।

BLMI में कई चरण शामिल हैं,ऐरोबेस, ऐच्छिक अवायवीय तथा बाध्यकारी अवायवीय जीवों के लिए भिन्न।

I. एरोबिक्स और वैकल्पिक अवायवीय जीवों की शुद्ध संस्कृति के अलगाव में BLMI के चरण।

मंच।

ए सामग्री का संग्रह, परिवहन, भंडारण, पूर्व उपचार।कभी-कभी, बुवाई से पहले, पृथक सूक्ष्मजीव के गुणों को ध्यान में रखते हुए, सामग्री का चयनात्मक प्रसंस्करण किया जाता है। उदाहरण के लिए, एसिड प्रतिरोधी माइकोबैक्टीरियम ट्यूबरकुलोसिस की उपस्थिति के लिए थूक या अन्य सामग्री की जांच करने से पहले, सामग्री को एसिड या क्षार समाधान के साथ इलाज किया जाता है।

बी. संवर्धन माध्यम में सीडिंग(यदि आवश्यक हो) यह तब किया जाता है जब परीक्षण सामग्री में बैक्टीरिया की एक छोटी मात्रा होती है, उदाहरण के लिए, रक्त संस्कृति को अलग करते समय। ऐसा करने के लिए, बड़ी मात्रा में बुखार की ऊंचाई पर लिया गया रक्त (वयस्कों में 8-10 मिलीलीटर, बच्चों में 4-5 मिलीलीटर) को 1:10 के अनुपात में माध्यम में टीका लगाया जाता है (रक्त जीवाणुनाशक की क्रिया को दूर करने के लिए) कारक); बुवाई 18-24 घंटों के लिए 37 0 C के तापमान पर की जाती है।

बी परीक्षण सामग्री की माइक्रोस्कोपी।परीक्षण सामग्री से एक स्मीयर तैयार किया जाता है, जिसे ग्राम या अन्य विधि से दाग दिया जाता है और सूक्ष्मदर्शी किया जाता है। वर्तमान माइक्रोफ्लोरा, इसकी मात्रा का आकलन करें। आगे के शोध के दौरान प्राथमिक स्मीयर में मौजूद सूक्ष्मजीवों को अलग किया जाना चाहिए।

छ. पृथक कालोनियों को प्राप्त करने के लिए पोषक माध्यमों पर बुवाई।पृथक कॉलोनियों को प्राप्त करने के लिए सामग्री को एक अंतर निदान या चयनात्मक माध्यम के साथ एक प्लेट पर यांत्रिक पृथक्करण द्वारा लूप या स्पैटुला के साथ टीका लगाया जाता है। बुवाई के बाद, पकवान को उल्टा कर दिया जाता है (संक्षेपण तरल की बूंदों के साथ कालोनियों को धब्बा से बचने के लिए), हस्ताक्षरित और थर्मोस्टेट में 37 0 सी के तापमान पर 18-24 घंटों के लिए रखा जाता है।

यह याद रखना चाहिए कि सूक्ष्मजैविक संस्कृतियों की बुवाई और पुनर्रोपण करते समय, कार्यकर्ता का ध्यान पोषक माध्यमों के संदूषण को रोकने और दूसरों के संक्रमण और आत्म-संक्रमण को रोकने के लिए सड़न रोकनेवाला नियमों के अनुपालन की ओर आकर्षित किया जाना चाहिए!

अवसरवादी सूक्ष्मजीवों के कारण संक्रमण के मामले में, जहां रोग संबंधी सामग्री में मौजूद सूक्ष्मजीवों की संख्या मायने रखती है, सामग्री का एक मात्रात्मक टीकाकरण किया जाता है, जिसके लिए सामग्री के 100 गुना कमजोर पड़ने (आमतौर पर 3 कमजोर पड़ने) की एक श्रृंखला तैयार की जाती है। टेस्ट ट्यूब में एक बाँझ आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड समाधान में। उसके बाद, पेट्री डिश में पोषक तत्व मीडिया पर प्रत्येक कमजोर पड़ने के 50 μl बोया जाता है।

मंच।

A. मीडिया पर कॉलोनी के आकारिकी का अध्ययन, उनकी माइक्रोस्कोपी।वे व्यंजनों को देखते हैं और इष्टतम पोषक माध्यम, विकास दर और सूक्ष्मजीवों के विकास की प्रकृति को नोट करते हैं। अध्ययन के लिए चुनें केंद्र के करीब, स्ट्रोक के साथ स्थित पृथक कॉलोनियां।यदि कई प्रकार की कॉलोनियां बढ़ती हैं, तो प्रत्येक की अलग से जांच की जाती है। कालोनियों के संकेतों का आकलन करें (तालिका। 7)। यदि आवश्यक हो, फसलों के साथ व्यंजन एक आवर्धक कांच के माध्यम से या कम आवर्धन लेंस और एक संकुचित एपर्चर के साथ एक माइक्रोस्कोप का उपयोग करके देखा जाता है। वे विभिन्न प्रकार की कॉलोनियों के टिंकटोरियल गुणों का अध्ययन करते हैं, इसके लिए अध्ययनाधीन कॉलोनी का एक भाग तैयार किया जाता है। धब्बा,ग्राम या अन्य विधियों से सना हुआ, सूक्ष्म रूप से और संस्कृति की शुद्धता की आकृति विज्ञान का निर्धारण। यदि आवश्यक हो, डाल कांच पर सांकेतिक आरएपॉलीवलेंट सीरम के साथ।

बी शुद्ध संस्कृति का संचय।एक शुद्ध संस्कृति को संचित करने के लिए, सभी आकारिकी की अलग-अलग कॉलोनियों को तिरछी अगर या किसी अन्य पोषक माध्यम के साथ अलग-अलग टेस्ट ट्यूब में उपसंस्कृत किया जाता है और थर्मोस्टेट में +37 0 C पर ऊष्मायन किया जाता है (यह तापमान अधिकांश सूक्ष्मजीवों के लिए इष्टतम है, लेकिन यह अलग हो सकता है, उदाहरण के लिए, के लिए कैम्पिलोबैक्टीरियम एसपीपी।- +42 0 सी, कैंडिडा एसपीपी। और यर्सिनिया पेस्टिस- +25 0 सी)।

क्लिगलर का माध्यम आमतौर पर एंटरोबैक्टीरिया के संचय माध्यम के रूप में उपयोग किया जाता है।

क्लिगलर माध्यम की संरचना:एमपीए, 0.1% ग्लूकोज, 1% लैक्टोज, हाइड्रोजन सल्फाइड अभिकर्मक (आयरन सल्फेट + सोडियम थायोसल्फेट + सोडियम सल्फाइट), फिनोल रेड इंडिकेटर। माध्यम का प्रारंभिक रंग रास्पबेरी-लाल है, माध्यम टेस्ट ट्यूबों में "तिरछा" है: इसमें एक स्तंभ (2/3) और एक बेवल सतह (1/3) है।

Kligler के माध्यम में बुवाई सतह पर एक स्ट्रोक और एक स्तंभ में एक इंजेक्शन द्वारा की जाती है।

मंच।

ए. संचय माध्यम पर विकास के लिए लेखांकन, संस्कृति की शुद्धता का आकलनएक ग्राम स्मीयर में। विकास पैटर्नपृथक शुद्ध संस्कृति। दृष्टि से स्वच्छ संस्कृति एक समान वृद्धि की विशेषता है। पर सूक्ष्मदर्शी द्वारा परीक्षणइस तरह की संस्कृति से तैयार एक सना हुआ धब्बा, रूपात्मक और टिंकटोरियल रूप से सजातीय कोशिकाओं को देखने के विभिन्न क्षेत्रों में पाया जाता है। हालांकि, कुछ प्रकार के जीवाणुओं में निहित स्पष्ट फुफ्फुसीयता के मामले में, शुद्ध संस्कृति से स्मीयर में विभिन्न आकारिकी वाली कोशिकाएं एक साथ हो सकती हैं।

यदि Kligler संकेतक माध्यम का उपयोग संचय माध्यम के रूप में किया गया था, तो कॉलम और बेवल वाले भाग में इसके रंग में परिवर्तन का मूल्यांकन किया जाता है, जिसके अनुसार जैव रासायनिक गुण निर्धारित किए जाते हैं: ग्लूकोज का किण्वन, लैक्टोज और हाइड्रोजन सल्फाइड का उत्पादन। जब लैक्टोज विघटित होता है, तो माध्यम का ढलान वाला हिस्सा पीला हो जाता है; जब ग्लूकोज विघटित होता है, तो स्तंभ पीला हो जाता है। शर्करा के अपघटन के दौरान CO2 के निर्माण के साथ, गैस के बुलबुले या स्तंभ में एक विराम बनता है। हाइड्रोजन सल्फाइड उत्पादन के मामले में, फेरस सल्फेट को फेरस सल्फाइड में बदलने के कारण इंजेक्शन के साथ कालापन देखा जाता है।

Kligler माध्यम (चित्र 23) के रंग में परिवर्तन की प्रकृति को सूक्ष्मजीवों द्वारा नाइट्रोजनयुक्त पदार्थों के टूटने की असमान तीव्रता और एरोबिक (ढलान सतह पर) और अवायवीय (एक में) के तहत क्षारीय उत्पादों के गठन द्वारा समझाया गया है। कॉलम) शर्तें।

एरोबिक स्थितियों के तहत, एक मध्यम स्तंभ की तुलना में ढलान वाली सतह पर अधिक तीव्र क्षार निर्माण होता है। इसलिए, माध्यम में मौजूद ग्लूकोज के कम मात्रा में अपघटन के दौरान, बेवल वाली सतह पर बनने वाला एसिड जल्दी से बेअसर हो जाता है। वहीं, लैक्टोज के अपघटन के दौरान, जो उच्च सांद्रता में एक माध्यम में मौजूद होता है, क्षारीय उत्पाद एसिड को बेअसर करने में सक्षम नहीं होते हैं।

स्तंभ में अवायवीय स्थितियों के तहत, क्षारीय उत्पाद नगण्य मात्रा में बनते हैं, इसलिए यहां ग्लूकोज किण्वन का पता लगाया जाता है।

चावल। 23.क्लिगलर संकेतक माध्यम:

1 - प्रारंभिक,

2 - वृद्धि के साथ ई कोलाई

3- वृद्धि के साथ एस. पैराटाइफी बी,

4 - वृद्धि के साथ एस टाइफीस

ई कोलाईगैस बनाने के साथ ग्लूकोज और लैक्टोज को विघटित करें, हाइड्रोजन सल्फाइड का उत्पादन न करें। वे मीडिया ब्रेक के साथ कॉलम और बेवल वाले हिस्से के पीलेपन का कारण बनते हैं।

एस. पैराटाइफीगैस के निर्माण के साथ ग्लूकोज को विघटित करें, लैक्टोज-नकारात्मक। वे टूटने के साथ स्तंभ के पीलेपन का कारण बनते हैं, बेवल वाला हिस्सा रंग नहीं बदलता है और रास्पबेरी रहता है। जिसमें एस. पैराटाइफी बीहाइड्रोजन सल्फाइड का उत्पादन (इंजेक्शन के दौरान एक काला रंग दिखाई देता है), एस. पैराटाइफी एहाइड्रोजन सल्फाइड का उत्पादन नहीं होता है।

एस टाइफीसगैस बनने के बिना ग्लूकोज को विघटित करें, लैक्टोज-नकारात्मक, हाइड्रोजन सल्फाइड का उत्पादन करें। वे स्तंभ को बिना टूटे पीले होने का कारण बनते हैं, बेवल वाला हिस्सा रंग नहीं बदलता है और रास्पबेरी रहता है, इंजेक्शन के दौरान काला रंग दिखाई देता है।

शिगेला एसपीपी।ग्लूकोज-पॉजिटिव, लैक्टोज-नेगेटिव, हाइड्रोजन सल्फाइड का उत्पादन नहीं करते हैं। वे स्तंभ के पीलेपन का कारण बनते हैं (सेरोवर के आधार पर या बिना विराम के), बेवल वाला भाग रंग नहीं बदलता है और लाल रंग का रहता है।

बी शुद्ध संस्कृति की अंतिम पहचान(प्रजातियों या प्रकार के स्तर तक पृथक सूक्ष्मजीव की व्यवस्थित स्थिति का निर्धारण) और एंटीबायोटिक दवाओं के लिए पृथक संस्कृति के संवेदनशीलता स्पेक्ट्रम का निर्धारण।

इस स्तर पर एक शुद्ध संस्कृति की पहचान करने के लिए जैव रासायनिक, आनुवंशिक, सीरोलॉजिकल और जैविक विशेषताओं का अध्ययन किया जाता है (तालिका 8)।

नियमित प्रयोगशाला अभ्यास में, पहचान के दौरान सभी गुणों का अध्ययन करने की आवश्यकता नहीं होती है। सूचनात्मक, सुलभ, का उपयोग करें सरल परीक्षण, पृथक सूक्ष्मजीव की प्रजातियों (संस्करण) संबद्धता को निर्धारित करने के लिए पर्याप्त है।

5. बैक्टीरिया के मूल रूप

6. संक्रामक रोगों के निदान के लिए सूक्ष्म विधि

7. सरल और जटिल रंग भरने के तरीके

8. ग्राम और ज़ीहल-नीलसन दाग के तंत्र

III. व्यावहारिक कार्य योजना

चतुर्थ। स्थितिजन्य कार्यों के उदाहरण

विषय 2: विशेष धुंधला तरीके। एक जैविक सूक्ष्मदर्शी का उपकरण। प्रकार

I. स्व-अध्ययन के लिए प्रश्न:

द्वितीय. आधार पाठ

1. व्यक्तिगत जीवाणु संरचनाओं की पहचान करने के लिए विशेष धुंधला तरीके

2. प्रो- और यूकेरियोट्स के अलग-अलग समूहों के लिए धुंधला तरीके

3. सूक्ष्मजीवों की गतिशीलता का अध्ययन

4. माइक्रोस्कोपी के प्रकार

5. जैविक सूक्ष्मदर्शी का उपकरण

6. विसर्जन माइक्रोस्कोपी के लिए प्रक्रिया

III. व्यावहारिक कार्य योजना

चतुर्थ। स्थितिजन्य कार्यों के उदाहरण

विषय 3: सूक्ष्मजीवों के अलग-अलग समूहों की आकृति विज्ञान और अल्ट्रास्ट्रक्चर: रिकेट्सिया, क्लैमाइडिया, माइकोप्लाज्मा, एक्टिनोमाइसेट्स, स्पाइरोकेट्स, कवक, प्रोटोजोआ

I. स्व-अध्ययन के लिए प्रश्न:

द्वितीय. आधार पाठ

III. व्यावहारिक कार्य योजना

चतुर्थ। स्थितिजन्य कार्यों के उदाहरण

ज्ञान के सीमा नियंत्रण के लिए सैद्धांतिक प्रश्न

व्यावहारिक कौशल की सूची

मॉड्यूल "सूक्ष्मजीवों का शरीर विज्ञान"

I. स्व-अध्ययन के लिए प्रश्न:

द्वितीय. आधार पाठ

1. पोषक तत्व मीडिया के लिए संरचना और आवश्यकताएं

2. संस्कृति मीडिया का वर्गीकरण

3. सड़न रोकनेवाला और एंटीसेप्सिस की अवधारणाएँ

4. कीटाणुशोधन की अवधारणा, कीटाणुशोधन के तरीके और कीटाणुशोधन की प्रभावशीलता का नियंत्रण

5. नसबंदी की अवधारणा, तरीके, उपकरण और नसबंदी के तरीके

6. नसबंदी की प्रभावशीलता का निर्धारण करने के तरीके

7. एक प्रजाति, नस्ल, उपनिवेश, सूक्ष्मजीवों की शुद्ध संस्कृति की अवधारणा

8. सूक्ष्मजीवों की शुद्ध संस्कृतियों को अलग करने के तरीके

9. संक्रामक रोगों के निदान के लिए बैक्टीरियोलॉजिकल विधि

10. सूक्ष्मजीव टीकाकरण तकनीक

11. अवायवीय जीवाणुओं की खेती की विशेषताएं

III. व्यावहारिक कार्य योजना

चतुर्थ। स्थितिजन्य कार्यों के उदाहरण

संक्रामक रोगों का निदान।

मैं मंच।

द्वितीय चरण। उद्देश्य: शुद्ध संस्कृति का संचय

तृतीय चरण। उद्देश्य: अध्ययन की गई संस्कृति की पहचान

चतुर्थ चरण।

विषय 2: जीवाणुओं का शरीर क्रिया विज्ञान। बैक्टीरिया के पोषण, श्वसन, प्रजनन, चयापचय और एंजाइम सिस्टम। संक्रामक रोगों के निदान के लिए बैक्टीरियोलॉजिकल विधि (दूसरा दिन)।

I. स्व-अध्ययन के लिए प्रश्न:

द्वितीय. आधार पाठ

1. सूक्ष्मजीवों का चयापचय

2. सूक्ष्मजीवों की एंजाइम प्रणाली

4. जीवाणुओं के पोषण की क्रियाविधि

6. श्वसन के प्रकार के अनुसार जीवाणुओं का वर्गीकरण-जैविक ऑक्सीकरण।

7. किण्वन और उसके प्रकार

8. जीवाणुओं की खेती के लिए शर्तें

9. जीवाणुओं की वृद्धि और प्रजनन। जीवाणु प्रजनन के चरण

10. जीवाणु अनुसंधान विधि। एरोबिक्स के अलगाव के लिए बैक्टीरियोलॉजिकल विधि के दूसरे चरण को पूरा करना। बैक्टीरिया के सांस्कृतिक गुण।

III. व्यावहारिक कार्य योजना

4. तालिका भरें "श्वसन के प्रकार द्वारा सूक्ष्मजीवों का वर्गीकरण"

चतुर्थ। स्थितिजन्य कार्यों के उदाहरण

विषय 3: शुद्ध संस्कृतियों की पहचान। जीवाणुओं की जैव रासायनिक गतिविधि। संक्रामक रोगों के निदान के लिए बैक्टीरियोलॉजिकल विधि (3-दिन)।

1. सूक्ष्मजीवों की शुद्ध संस्कृतियों को अलग करने के लिए बैक्टीरियोलॉजिकल विधि के चरण III को पूरा करना। सूक्ष्मजीव पहचान योजना

2. पृथक संस्कृति की शुद्धता का निर्धारण

3. सूक्ष्मजीवों की पहचान के लिए जीवाणुओं की एंजाइमी गतिविधि का उपयोग करना

4. सूक्ष्मजीवों की ग्लाइकोलाइटिक गतिविधि का निर्धारण करने के तरीके

5. जीवाणुओं की प्रोटियोलिटिक गतिविधि का निर्धारण करने के तरीके

6. जीवाणु रेडॉक्स एंजाइम का निर्धारण

7. जीवाणुओं की जैव रासायनिक पहचान के लिए प्रणालियाँ

III. व्यावहारिक कार्य योजना

चतुर्थ। स्थितिजन्य कार्यों के उदाहरण

मॉड्यूल III "जीवाणुरोधी रसायन चिकित्सा के मूल सिद्धांत"

2. सूक्ष्मजीवों पर एंटीबायोटिक दवाओं की क्रिया के तंत्र

3. एंटीबायोटिक दवाओं के दुष्प्रभाव

4. सूक्ष्मजीवों के एंटीबायोटिक प्रतिरोध के तंत्र

5. एंटीबायोटिक दवाओं के प्रति सूक्ष्मजीवों की संवेदनशीलता का निर्धारण करने के तरीके

III. व्यावहारिक कार्य योजना

चतुर्थ। स्थितिजन्य कार्यों के उदाहरण

III मॉड्यूल "संक्रमण और संक्रामक प्रक्रिया"

विषय 2: संक्रामक प्रक्रिया। जीवाणुओं की रोगजनकता के कारक। संक्रामक रोगों के निदान के लिए जैविक विधि

आधार पाठ

1. संक्रमण का सिद्धांत। "संक्रमण" और "संक्रामक रोग" की अवधारणाएं

3. संक्रामक रोगों और संक्रमणों के रूपों का वर्गीकरण

4. एक संक्रामक रोग की अवधि और परिणाम

5. रोगजनकता और पौरूष, पौरुष की इकाइयाँ

6. सूक्ष्मजीवों की रोगजनकता के मुख्य कारक

7. माइक्रोबियल टॉक्सिन्स

8. संक्रामक रोगों के निदान के लिए जैविक विधि

III. व्यावहारिक कार्य योजना

चतुर्थ। स्थितिजन्य कार्यों के उदाहरण

III मॉड्यूल "सूक्ष्मजीवों की पारिस्थितिकी। सेनेटरी माइक्रोबायोलॉजी के फंडामेंटल»

विषय 3: मानव शरीर का माइक्रोफ्लोरा। पानी, हवा, मिट्टी की स्वच्छता और जीवाणु संबंधी जांच

I. स्व-अध्ययन के लिए प्रश्न:

II.मूल पाठ

2. मानव शरीर के सामान्य माइक्रोफ्लोरा के कार्य

3. मानव शरीर के माइक्रोफ्लोरा को निर्धारित करने के तरीके

4. डिस्बैक्टीरियोसिस की अवधारणा की परिभाषा और इसकी घटना के कारण

5. डिस्बैक्टीरियोसिस के निदान और उपचार के सिद्धांत

6. सैनिटरी माइक्रोबायोलॉजी का विषय और सैनिटरी संकेतक सूक्ष्मजीवों के लिए आवश्यकताएं

7. जल, वायु और मिट्टी का माइक्रोफ्लोरा

8. पानी, हवा और मिट्टी के स्वच्छता-सूचक सूक्ष्मजीवों को निर्धारित करने के तरीके

III. व्यावहारिक कार्य योजना

चतुर्थ। स्थितिजन्य कार्यों के उदाहरण

ज्ञान के सीमा नियंत्रण के लिए सैद्धांतिक प्रश्न

व्यावहारिक कौशल की सूची

साहित्य

9. संक्रामक रोगों के निदान के लिए बैक्टीरियोलॉजिकल विधि

सूक्ष्मजीवविज्ञानी निदान की मुख्य विधि और सूक्ष्म जीव विज्ञान का "स्वर्ण मानक" बैक्टीरियोलॉजिकल विधि है।

बैक्टीरियोलॉजिकल विधि का उद्देश्यपरीक्षण सामग्री से रोगज़नक़ की एक शुद्ध संस्कृति को अलग करना, एक शुद्ध संस्कृति को जमा करना और गुणों के एक सेट द्वारा इस संस्कृति की पहचान करना शामिल है: रूपात्मक, टिंक्टोरियल, सांस्कृतिक, जैव रासायनिक, एंटीजेनिक, रोगजनकता, विषाक्तता कारकों की उपस्थिति और इसकी संवेदनशीलता का निर्धारण करना। रोगाणुरोधी दवाओं और बैक्टीरियोफेज के लिए।

बैक्टीरियोलॉजिकल शोध पद्धति में शामिल हैं:

1. पोषक माध्यम में परीक्षण सामग्री का टीकाकरण

2. शुद्ध संस्कृति अलगाव

3. सूक्ष्मजीवों की पहचान (एक प्रजाति से संबंधित का निर्धारण)।

एरोबिक और एनारोबिक बैक्टीरिया की शुद्ध संस्कृतियों के अलगाव और पहचान में निम्नलिखित अध्ययन शामिल हैं:

स्टेज I (देशी सामग्री के साथ काम)

उद्देश्य: पृथक कालोनियों को प्राप्त करना

1. प्रारंभिक माइक्रोस्कोपी माइक्रोफ्लोरा का अनुमानित विचार देता है

2. शोध के लिए सामग्री तैयार करना

3. पृथक कालोनियों को प्राप्त करने के लिए सघन पोषक माध्यमों पर बीज बोना

4. इष्टतम तापमान पर ऊष्मायन, अक्सर 37 डिग्री सेल्सियस, 18-24 घंटों के लिए

द्वितीय चरण

उद्देश्य: एक शुद्ध संस्कृति प्राप्त करना

1. संचरित और परावर्तित प्रकाश में कॉलोनियों का मैक्रोस्कोपिक अध्ययन (आकार, आकार, रंग, पारदर्शिता, स्थिरता, संरचना, समोच्च, कॉलोनियों की सतह की विशेषता)।

2. पृथक कॉलोनियों की सूक्ष्म जांच

3. एरोटोलरेंस के लिए परीक्षण (परीक्षण सामग्री में सख्त अवायवीय की उपस्थिति की पुष्टि करने के लिए)।

4. शुद्ध संस्कृति संचय मीडिया या वैकल्पिक मीडिया और इष्टतम परिस्थितियों में ऊष्मायन पर एक निश्चित प्रजाति की विशेषता कालोनियों की बुवाई।

चरण III

उद्देश्य: पृथक शुद्ध संस्कृति की पहचान

1. जैविक गुणों के एक परिसर द्वारा पृथक संस्कृति की पहचान करने के लिए, निम्नलिखित का अध्ययन किया जाता है:

आकृति विज्ञान और टिंक्टोरियल गुण

सांस्कृतिक गुण (पोषक माध्यम पर वृद्धि की प्रकृति)

जैव रासायनिक गुण (सूक्ष्मजीवों की एंजाइमिक गतिविधि)

सीरोलॉजिकल गुण (एंटीजेनिक)

विषैला गुण (रोगजनक कारक उत्पन्न करने की क्षमता: विषाक्त पदार्थ, एंजाइम, रक्षा और आक्रामकता कारक)

जानवरों के लिए रोगजनकता

फेज लिज़ेबिलिटी (नैदानिक ​​बैक्टीरियोफेज के प्रति संवेदनशीलता)

एंटीबायोटिक दवाओं के प्रति संवेदनशीलता

अन्य व्यक्तिगत गुण

चरण IV (निष्कर्ष)

अध्ययन किए गए गुणों के अनुसार, पृथक संस्कृति के बारे में निष्कर्ष निकाला जाता है

अनुसंधान का पहला चरण।रोग संबंधी सामग्री का अध्ययन माइक्रोस्कोपी से शुरू होता है। सना हुआ देशी सामग्री की माइक्रोस्कोपी अध्ययन की गई वस्तु के माइक्रोबियल परिदृश्य की संरचना, सूक्ष्मजीवों की कुछ रूपात्मक विशेषताओं को स्थापित करना संभव बनाती है। मूल सामग्री की माइक्रोस्कोपी के परिणाम काफी हद तक आगे के शोध के पाठ्यक्रम को निर्धारित करते हैं, और बाद में पोषक मीडिया पर टीकाकरण के दौरान प्राप्त आंकड़ों के साथ उनकी तुलना की जाती है।

नमूने में रोगजनक सूक्ष्मजीवों की पर्याप्त सामग्री के साथ, घने पोषक माध्यम (पृथक कॉलोनियों को प्राप्त करने के लिए) पर बीजारोपण किया जाता है। यदि परीक्षण सामग्री में कुछ बैक्टीरिया हैं, तो तरल पोषक तत्व संवर्धन माध्यम पर टीका लगाया जाता है। पोषक माध्यमों का चयन सूक्ष्मजीवों की आवश्यकताओं के अनुसार किया जाता है।

सूक्ष्मजीवों की खेती तभी संभव है जब उनकी महत्वपूर्ण गतिविधि के लिए अनुकूलतम परिस्थितियों का निर्माण किया जाए और उन नियमों का पालन किया जाए जो परीक्षण सामग्री के संदूषण (विदेशी रोगाणुओं द्वारा आकस्मिक संदूषण) को बाहर करते हैं। कृत्रिम परिस्थितियाँ जो अन्य प्रजातियों द्वारा संस्कृति संदूषण को बाहर करती हैं, एक परखनली, फ्लास्क या पेट्री डिश में बनाई जा सकती हैं। सभी बर्तन और पोषक माध्यम बाँझ होने चाहिए और, माइक्रोबियल सामग्री के टीकाकरण के बाद, बाहरी संदूषण से सुरक्षित होना चाहिए, जो स्टॉपर्स या धातु के ढक्कन और ढक्कन का उपयोग करके प्राप्त किया जाता है। बाहरी वातावरण से सामग्री के संदूषण को बाहर करने के साथ-साथ सुरक्षा नियमों का पालन करने के लिए अल्कोहल लैंप के फ्लेम ज़ोन में परीक्षण सामग्री के साथ हेरफेर किया जाना चाहिए।

पोषक तत्व मीडिया पर सामग्री का टीकाकरण उनके संग्रह के क्षण से 2 घंटे के बाद नहीं किया जाना चाहिए।

अनुसंधान का दूसरा चरण।उपनिवेशों का अध्ययन और शुद्ध संस्कृतियों का अलगाव। ऊष्मायन के एक दिन बाद, प्लेटों पर कॉलोनियां बढ़ती हैं, और पहले स्ट्रोक पर विकास निरंतर होता है, और अगले पर - पृथक कॉलोनियां। एक कॉलोनी एक ही प्रजाति के रोगाणुओं का एक संग्रह है जो एक ही कोशिका से विकसित हुए हैं। चूंकि सामग्री अक्सर रोगाणुओं का मिश्रण होती है, इसलिए कई प्रकार की कॉलोनियां विकसित होती हैं। विभिन्न कॉलोनियों को एक पेंसिल से चिह्नित किया जाता है, उन्हें नीचे की तरफ से एक वृत्त के साथ रेखांकित किया जाता है, और उनका अध्ययन किया जाता है (तालिका 11)। सबसे पहले, कालोनियों का नग्न आंखों से अध्ययन करें: मैक्रोस्कोपिक संकेत। कप को संचरित प्रकाश में नीचे से (बिना खोले) देखा जाता है, कॉलोनियों की पारदर्शिता नोट की जाती है (पारदर्शी अगर यह प्रकाश को नहीं फँसाता है; पारभासी अगर यह आंशिक रूप से प्रकाश को फँसाता है; अपारदर्शी अगर प्रकाश कॉलोनी से नहीं गुजरता है), माप (मिमी में) कालोनियों का आकार। फिर वे ढक्कन के किनारे से कॉलोनियों का अध्ययन करते हैं, आकार (नियमित गोल, अनियमित, सपाट, उत्तल), सतह की प्रकृति (चिकनी, चमकदार, सुस्त, खुरदरी, झुर्रीदार, गीली, सूखी, श्लेष्मा), रंग नोट करते हैं (रंगहीन, रंगहीन)।

तालिका 11. कालोनियों के अध्ययन की योजना

		संभावित कॉलोनी विशेषताएं
		फ्लैट, उत्तल, गुंबद के आकार का, उदास, गोल, रोसेट के आकार का, तारे के आकार का
	आकार, मिमी	बड़ा (4-5 मिमी), मध्यम (2-4 मिमी), छोटा (1-2 मिमी), बौना (< 1 мм)
	सतह प्रकृति	चिकना (एस-आकार), खुरदरा (आर-आकार), घिनौना (एम-आकार), धारीदार, ऊबड़-खाबड़, मैट, चमकदार
		रंगहीन, रंगे हुए
	पारदर्शिता	पारदर्शी, अपारदर्शी, पारभासी
	किनारों की प्रकृति	चिकना, दाँतेदार, झालरदार, रेशेदार, स्कैलप्ड
	आंतरिक ढांचा	सजातीय, दानेदार, विषम
	संगतता	चिपचिपा, घिनौना, टेढ़ा-मेढ़ा
	पानी की एक बूंद में पायसीकरण	अच्छा बुरा

नोट: माइक्रोस्कोप के कम आवर्धन पर 5-7 बिंदुओं का अध्ययन किया जाता है।

जब आप कॉलोनियों को ज़ूम इन करते हैं तो आप कॉलोनियों के बीच के अंतर को और भी बेहतर तरीके से देख सकते हैं। ऐसा करने के लिए, एक बंद डिश को ऑब्जेक्ट टेबल पर उल्टा रखा जाता है, कंडेनसर को थोड़ा नीचे किया जाता है, एक छोटे से उद्देश्य आवर्धन (x8) का उपयोग किया जाता है, डिश को स्थानांतरित करते हुए, उपनिवेशों में सूक्ष्म संकेतों का अध्ययन किया जाता है: किनारे की प्रकृति ( चिकनी, लहराती, दाँतेदार, स्कैलप्ड), संरचना (सजातीय, दानेदार, रेशेदार, सजातीय, या केंद्र में और परिधि के साथ अलग)।

इसके बाद, कालोनियों से माइक्रोबियल कोशिकाओं की आकृति विज्ञान का अध्ययन किया जाता है। ऐसा करने के लिए, ग्राम के अनुसार दागी गई प्रत्येक चिह्नित कॉलोनियों के एक हिस्से से स्मीयर बनाए जाते हैं। कॉलोनियों को लेते समय, संगति पर ध्यान दें (सूखी, अगर कॉलोनी उखड़ जाती है और मुश्किल से ली जाती है; नरम, अगर इसे आसानी से लूप पर ले जाया जाता है; घिनौना, अगर कॉलोनी लूप के लिए पहुंचता है; कठिन, अगर कॉलोनी का हिस्सा है लूप द्वारा नहीं लिया जाता है, केवल पूरी कॉलोनी को हटाया जा सकता है)।

स्मीयर देखते समय, यह स्थापित किया जाता है कि कॉलोनी का प्रतिनिधित्व एक प्रकार के सूक्ष्म जीव द्वारा किया जाता है, इसलिए, बैक्टीरिया की शुद्ध संस्कृतियों को अलग किया जा सकता है। ऐसा करने के लिए, अध्ययन की गई कॉलोनियों से, एक तिरछी अगर पर पुनर्बीमा किया जाता है। कॉलोनियों से पुन: बोते समय, आस-पास की कॉलोनियों के लूप को छुए बिना, बिल्कुल इच्छित कॉलोनियों को लेने के लिए ध्यान रखा जाना चाहिए। 24 घंटे के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर थर्मोस्टैट में ट्यूबों पर हस्ताक्षर किए जाते हैं और इनक्यूबेट किया जाता है।

अनुसंधान का तीसरा चरण।पृथक संस्कृति की पहचान। रोगाणुओं की पहचान - सामग्री से प्रजातियों और प्रकार के लिए पृथक संस्कृति की व्यवस्थित स्थिति का निर्धारण। पहचान की विश्वसनीयता के लिए पहली शर्त संस्कृति की बिना शर्त शुद्धता है। रोगाणुओं की पहचान करने के लिए, संकेतों के एक सेट का उपयोग किया जाता है: रूपात्मक (आकार, आकार, फ्लैगेला की उपस्थिति, कैप्सूल, बीजाणु, एक स्मीयर में सापेक्ष स्थिति), टिंक्टोरियल (ग्राम दाग या अन्य तरीकों से संबंध), रासायनिक (गुआनिन + साइटोसिन अनुपात में) डीएनए अणु), सांस्कृतिक (पोषक तत्वों की आवश्यकताएं, खेती की स्थिति, विभिन्न पोषक माध्यमों पर विकास दर और प्रकृति), एंजाइमेटिक (विभाजन) विभिन्न पदार्थमध्यवर्ती के गठन के साथ और अंतिम उत्पाद), सीरोलॉजिकल (एंटीजेनिक संरचना, विशिष्टता), जैविक (जानवरों के लिए विषाणु, विषाक्तता, एलर्जी, एंटीबायोटिक दवाओं का प्रभाव, आदि)।

जैव रासायनिक विभेदन के लिए, बैक्टीरिया की क्षमता मध्यवर्ती और . के गठन के साथ कार्बोहाइड्रेट को किण्वित करने के लिए अंत उत्पादों, प्रोटीन और पेप्टोन को नीचा दिखाने की क्षमता, और रेडॉक्स एंजाइम का अध्ययन।

सैक्रोलाइटिक एंजाइमों का अध्ययन करने के लिए, पृथक संस्कृतियों को परखनली में टीका लगाया जाता है जिसमें लैक्टोज, ग्लूकोज और अन्य कार्बोहाइड्रेट युक्त अर्ध-तरल मीडिया होता है और पॉलीहाइड्रिक अल्कोहल. अर्ध-तरल मीडिया पर, माध्यम की गहराई में इंजेक्शन द्वारा टीका लगाया जाता है। इंजेक्शन द्वारा बुवाई करते समय, माध्यम के साथ टेस्ट ट्यूब को एक कोण पर रखा जाता है, स्टॉपर हटा दिया जाता है, और टेस्ट ट्यूब के किनारे को जला दिया जाता है। सामग्री को एक बाँझ लूप के साथ लिया जाता है और पोषक माध्यम के एक स्तंभ को इसके साथ लगभग नीचे तक छेद दिया जाता है।

प्रोटीयोलाइटिक एंजाइमों को निर्धारित करने के लिए, पृथक संस्कृति को पेप्टोन पानी या एमपीबी पर टीका लगाया जाता है। ऐसा करने के लिए, वे टीकाकरण के साथ एक परखनली को अपने करीब ले जाते हैं, और माध्यम के साथ एक परखनली - खुद से और दूर। दोनों परखनलियों को एक ही समय में खोला जाता है, उनके स्टॉपर्स को छोटी उंगली और हथेली के किनारे से पकड़कर, ट्यूबों के किनारों को जला दिया जाता है, एक छोटी सी संस्कृति को कैलक्लाइंड कूल्ड लूप के साथ पकड़ लिया जाता है और दूसरी टेस्ट ट्यूब में स्थानांतरित कर दिया जाता है, टेस्ट ट्यूब की दीवार पर एक तरल माध्यम में ट्राइट्यूरेट किया गया और माध्यम से धोया गया।

बुवाई और बुवाई करते समय, बाँझपन के नियमों के अनुपालन पर ध्यान दिया जाना चाहिए, ताकि आपकी फसलों को विदेशी माइक्रोफ्लोरा से दूषित न किया जाए, और दूषित न हो वातावरण. ट्यूबों को लेबल किया जाता है और एक दिन के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर ऊष्मायन के लिए थर्मोस्टेट में रखा जाता है।

निष्कर्ष

परिणामों के लिए लेखांकन। शोध निष्कर्ष। पहचान के परिणामों को ध्यान में रखा जाता है और प्राप्त आंकड़ों की समग्रता के आधार पर, मैनुअल (बर्गी गाइड, 1994-1996) में वर्णित प्रकार के उपभेदों के वर्गीकरण और विशेषताओं के आधार पर, पृथक संस्कृतियों का प्रकार निर्धारित किया जाता है।

जीवाणु अनुसंधान विधि। एरोबिक बैक्टीरिया की शुद्ध संस्कृति का अलगाव (1-2 चरण)

1. बैक्टीरियोलॉजिकल विधि का सार

3. पृथक कालोनियों को प्राप्त करने के तरीके

4. शुद्ध संस्कृति प्राप्त करने के तरीके

1. कोच और ड्रायगल्स्की विधि द्वारा प्राथमिक बीजाई करें

2. शुद्ध संस्कृति को अलग करें

कार्य योजना:

1. बैक्टीरियोलॉजिकल शोध विधि

2. बैक्टीरियोलॉजिकल विधि के चरण

3. अवधारणा: शुद्ध संस्कृति, तनाव, उपनिवेश

4. पृथक कालोनियों को प्राप्त करने के तरीके

5. एरोबिक बैक्टीरिया की शुद्ध संस्कृति प्राप्त करने के तरीके

संक्रामक रोगों के प्रयोगशाला निदान की मुख्य विधि बैक्टीरियोलॉजिकल विधि है। बैक्टीरियोलॉजिकल विधि का सार अध्ययन के तहत सामग्री और इसकी पहचान (जीनस, प्रजातियों, किस्मों की परिभाषा) से रोगजनकों का अलगाव है।

बैक्टीरियोलॉजिकल विधि आपको यह निर्धारित करने की अनुमति देती है:

1. रोगज़नक़ का प्रकार और रोग का निदान करना

2. एंटीबायोटिक्स जो रोगज़नक़ को मारते हैं और उचित उपचार निर्धारित करते हैं

3. संक्रमण के स्रोत की पहचान करने के लिए रोगज़नक़ के फागोवर और सेरोवर

पहला चरण पृथक कालोनियों को प्राप्त करने के लिए परीक्षण सामग्री का प्राथमिक टीकाकरण है। प्राथमिक बुवाई स्टोरेज मीडिया और डीडीएस (कप मीडिया) पर की जाती है।

दूसरा चरण अलग-अलग कालोनियों का लक्षण वर्णन है और मुख्य माध्यम के एक झुके हुए स्तंभ पर फिर से लगाकर उनसे शुद्ध संस्कृति प्राप्त करना है।

तीसरा चरण एक शुद्ध संस्कृति की पहचान है - जीनस, प्रजातियों, रोगज़नक़ों की किस्मों का निर्धारण, एंटीबायोटिक संवेदनशीलता का निर्धारण, फागोवर का निर्धारण।

सूक्ष्मजीवों की संस्कृति पोषक मीडिया पर उगाए गए बैक्टीरिया हैं। एक शुद्ध संस्कृति पोषक मीडिया पर उगाए जाने वाले बैक्टीरिया की एक प्रजाति है। एक प्रजाति के भीतर, ऐसी किस्में होती हैं जो एक विशेषता में भिन्न होती हैं:

1. Morphovars - आकृति विज्ञान में भिन्न

2. केमोवर - जैव रासायनिक गुणों में भिन्न

3. सेरोवर - एंटीजेनिक गुणों में भिन्न

4. फागोवर - फेज के प्रति संवेदनशीलता में भिन्नता

पहचान, सेरोवर के निर्धारण, फेज, एंटीबायोटिक दवाओं के प्रति संवेदनशीलता के लिए एक शुद्ध संस्कृति आवश्यक है। एक विशिष्ट स्रोत (वोल्गा नदी, बीमार इवानोव, आदि) से पृथक बैक्टीरिया की एक प्रजाति है। कॉलोनी - घने पोषक माध्यम पर एक जीवाणु कोशिका के प्रजनन के दौरान गठित एक ही प्रजाति के जीवाणुओं का एक दृश्य संचय।

अध्ययन का पहला चरण पृथक कालोनियों को प्राप्त करने के लिए परीक्षण सामग्री का प्राथमिक टीकाकरण है। प्रारंभिक टीकाकरण से पहले, परीक्षण सामग्री की माइक्रोस्कोपी की जाती है। परीक्षण सामग्री में आमतौर पर रोगजनकों सहित विभिन्न जीवाणुओं का मिश्रण होता है। रोगज़नक़ को अलग करने के लिए, पोषक माध्यम का चयन करके और विशेष बोने की विधियों का उपयोग करके पृथक कॉलोनियों (एक ही प्रजाति के बैक्टीरिया) को प्राप्त करना आवश्यक है।

पृथक कालोनियों को प्राप्त करने की दो विधियाँ हैं:

1. ड्राईगल्स्की विधि