गतिविधि #4
विषय:सूक्ष्मजीवों का शरीर क्रिया विज्ञान। बैक्टीरियोलॉजिकल (सांस्कृतिक) अनुसंधान विधि। सूक्ष्मजीवों के जैव रासायनिक गुण।
जांच सूची
जीवाणुओं का पोषण। पोषक तत्व कार्बन और नाइट्रोजन के स्रोत हैं। पोषण के प्रकार द्वारा जीवाणुओं का वर्गीकरण स्वपोषी और रसायन-ऑर्गनोट्रोफ्स
वृद्धि कारक और उनके स्रोत। खनिज तत्वों के स्रोत।
झिल्ली के माध्यम से पोषक तत्वों के हस्तांतरण के तरीके और तंत्र।
बैक्टीरिया की ऊर्जा आवश्यकताएं। स्वपोषी (प्रकाश संश्लेषण, रसायनसंश्लेषण) में ऊर्जा प्राप्त करने के तरीके। कीमोऑर्गनोट्रोफ्स में ऊर्जा प्राप्त करने के स्रोत और तरीके।
जीवाणुओं में एरोबिक और अवायवीय प्रकार के जैविक ऑक्सीकरण। एरोबिक, एनारोबिक, फैकल्टी एनारोबिक और माइक्रोएरोफिलिक बैक्टीरिया। अवायवीय स्थिति बनाने के तरीके।
बैक्टीरियोलॉजिकल (सांस्कृतिक) अनुसंधान पद्धति के कार्य, चरण, फायदे और नुकसान।
सूक्ष्मजीवों की वृद्धि और प्रजनन। प्रजनन के तरीके। बाइनरी (सरल) विखंडन, तंत्र। जीवाणु आबादी का प्रजनन।
जीवाणुओं की खेती के सिद्धांत और तरीके। रोगाणुओं की पोषण संबंधी आवश्यकताएं।
जीवाणुओं की खेती के लिए पोषक माध्यम। पोषक तत्वों की आवश्यकताएं। पोषक माध्यम का वर्गीकरण।
बैक्टीरिया पैदा करने की शर्तें और तकनीकें। पोषक माध्यम पर बुवाई की तकनीक। घने और तरल पोषक माध्यम पर जीवाणु वृद्धि की नियमितता और चरित्र।
एरोबिक और एनारोबिक बैक्टीरिया की शुद्ध संस्कृतियों को अलग करने के तरीके।
पृथक संस्कृतियों की पहचान करने के लिए प्रयुक्त गुण।
स्वतंत्र और प्रयोगशाला कार्य
बैक्टीरियोलॉजिकल विधि(चरण):
1 पहला चरणएरोबिक बैक्टीरिया की शुद्ध संस्कृति का अलगाव: ए) रोग संबंधी सामग्री की माइक्रोस्कोपी।
पैथोलॉजिकल सामग्री से स्मीयरों का ग्राम धुंधला हो जाना। ड्रग स्केच।
बी) मास्टरिंग, एक शिक्षक के मार्गदर्शन में, एक बैक्टीरियोलॉजिकल लूप के साथ रोग संबंधी सामग्री को बोने की तकनीक और प्लेट पोषक मीडिया पर एक स्पैटुला।पृथक कालोनियों को प्राप्त करने के लिए लैमेलर मीट-पेप्टोन अगर (एमपीए) पर बैक्टीरियोलॉजिकल लूप के साथ रोग संबंधी सामग्री का टीकाकरण।
संस्कृति मीडिया का वर्गीकरण(आवेदन के क्षेत्र निर्दिष्ट करें)
1. संगति से:तरल (मांस-पेप्टोन शोरबा, पित्त, चीनी शोरबा), घना (2-3% अगर) और अर्ध-तरल (0.15-0.7% अगर) मीडिया।
2. मूल से:प्राकृतिक - दूध, मांस से। अंडे, आलू, मानव रक्त सीरम, पशु और अन्य उत्पाद; कृत्रिम - 1) सूक्ष्मजीवों के विकास और प्रजनन के लिए आवश्यक सांद्रता और संयोजनों में पोषक तत्वों का प्राकृतिक संतुलित मिश्रण, नाइट्रोजन और कार्बन का एक सार्वभौमिक स्रोत - पेप्टोन - पेप्सिन या विभिन्न हाइड्रोलिसेट्स (मछली, कैसिइन, खमीर, आदि) का उपयोग करके प्रोटीन के अधूरे टूटने के उत्पाद। 2) कृत्रिम सीसटीक रासायनिक संरचनामाइकोबैक्टीरिया के लिए सोटन, कोशिकाओं के लिए 199।
3. रचना में: सरल संस्कृति मीडिया (मांस-पेप्टोन शोरबा-एमपीबी, मांस-पेप्टोन अगर-एमपीए) और साथ झूठा (केए = एमपीए + 5-10% पशु रक्त)
4. मिलने का समय निश्चित करने पर:
लेकिन) सामान्य उद्देश्य - सार्वभौमिक, किसी भी सूक्ष्मजीव की खेती के लिए अभिप्रेत है (एमपीए, केए)
बी ) विशेषबढ़ते सूक्ष्मजीवों के लिए जो सार्वभौमिक मीडिया पर नहीं उगते हैं, प्रजातियों का भेदभाव और कुछ प्रकार के सूक्ष्मजीवों के चयनात्मक अलगाव:
वैकल्पिक (चयनात्मक) कुछ प्रकार के सूक्ष्मजीवों को अलग करने और संबंधित लोगों के विकास को दबाने के लिए - (स्टैफिलोकोसी के लिए नमक अगर)।
विभेदक निदान (डीडीएस)-वातावरण जो एंजाइमी गतिविधि द्वारा बैक्टीरिया के प्रकारों के बीच अंतर करना संभव बनाता है; वे साथ अधिकारी: 1) सार्वभौमिक पोषक माध्यम (एमपीए, केए); 2) विभेदक कारक - एक रासायनिक सब्सट्रेट (उदाहरण के लिए, कार्बोहाइड्रेट), एक अलग संबंध जो किसी दिए गए सूक्ष्म जीव के लिए एक नैदानिक विशेषता है। 3) एक संकेतक जिसका रंग परिवर्तन जैव रासायनिक प्रतिक्रिया को इंगित करता है। (Endo, Ploskirev, Giss और अन्य के वातावरण)।
विभेदक चयनात्मक (डीएस) - वातावरण जो अनुमति देते हैं आवंटित एक निश्चित प्रजाति के बैक्टीरिया अपनी शारीरिक विशेषताओं के अनुसार और अन्य प्रजातियों से अलग-अलग होते हैं एंजाइमी गतिविधि उनमें शामिल हैं: 1) एमपीए 2) वैकल्पिक एक रासायनिक सब्सट्रेट जो अन्य प्रकार के जीवाणुओं के विकास को रोकता है . 3) विभेदक कारक - सब्सट्रेट जिसके लिए इस सूक्ष्म जीव के लिए एक नैदानिक विशेषता है;) 4.) एक संकेतक जिसका रंग परिवर्तन जैव रासायनिक प्रतिक्रिया को इंगित करता है। (स्टेफिलोकोसी के लिए बुधवार, साल्मोनेला के लिए आईसीए, शिगेला और साल्मोनेला के लिए प्लॉस्किरेव)।
बी) संवर्धन नैदानिक सामग्री में एक निश्चित प्रकार के बैक्टीरिया के प्रजनन और संचय के लिए मीडिया (20% पित्त शोरबा में रक्त = साल्मोनेला, 10% सीरम में गले का निर्वहन + 2% टेल्यूराइट = कोरिनेबैक्टीरिया।)
डी) परिवहन क्लिनिकल सामग्री के संग्रह और वितरण (संरक्षण) के लिए माध्यम = 48 घंटे (एमीज़ माध्यम - अर्ध-तरल अगर + सक्रिय चारकोल)।)
पोषक मीडिया(उदाहरण):
बुधवार एंडो मध्यम प्रकार एंटरोबैक्टीरिया के लिए विभेदक निदान पोषक तत्व आधार एमपीए विभेदक कारक लैक्टोज 1% सूचक मूल फुकसिन को सोडियम सल्फाइट से रंगहीन किया गया। ई.एस.ओ ओलि लैक्टोज को एसिड में विघटित करें - कॉलोनियां एक धात्विक चमक के साथ लाल होती हैं, रोगजनक रंगहीन होती हैं;
नमक अगर मध्यम प्रकार स्टेफिलोकोसी के अलगाव के लिए चयनात्मक पोषक तत्व आधार एमपीए वैकल्पिक कारक सोडियम क्लोराइड 10%
बुधवार प्लोस्किरेव मध्यम प्रकार विभेदक चयनात्मकएंटरोबैक्टीरिया के लिए
पोषक तत्व आधार एमपीए वैकल्पिक कारक पित्त नमक विभेदक कारक लैक्टोज
सूचक तटस्थ लाल
जर्दी-नमक अगर मध्यम प्रकार के लिए विभेदक चयनात्मक एस . ऑरियस _
पोषक तत्व आधार एमपीएवैकल्पिक कारक सोडियम क्लोराइड 10%
विभेदक कारक अंडे की जर्दी
सूचक नहीं
2 चरण 2जीवाणु अनुसंधान विधि (शुद्ध संस्कृति का अलगाव):
ए) लैमेलर एमपीए पर पृथक कालोनियों (एसचेरीचिया, स्टेफिलोकोकस) का अध्ययन।
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सांस्कृतिक गुणों का अध्ययन किया |
1 प्रकार की कॉलोनियां |
2 प्रकार की कॉलोनी |
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कॉलोनी आकार |
नियमित आकार, गोल |
सही स्वरूप |
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संगतता |
सजातीय |
सजातीय |
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कॉलोनी का आकार |
मध्यम (आकार 2-4 मिमी) | |
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किनारे की प्रकृति |
चिकने किनारों के साथ |
चिकने किनारों के साथ |
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सतह प्रकृति |
उत्तल |
बी) चयनित कॉलोनियों (ग्राम दाग) से स्मीयर तैयार करना।
सी) शुद्ध संस्कृति के संचय के लिए पृथक कॉलोनियों को तिरछी एमपीए में स्थानांतरित करना।
3 अवायवीय जीवाणुओं की एक शुद्ध संस्कृति का अलगाव: रोगजनक क्लोस्ट्रीडिया को अलग करने के लिए किट्टा-तारोज़ी माध्यम पर मिट्टी के निलंबन का टीकाकरण
Kitt-Tarozzi माध्यम में पोषक तत्व शोरबा, 0.5% ग्लूकोज, और माध्यम से ऑक्सीजन को अवशोषित करने के लिए यकृत या कीमा बनाया हुआ मांस के टुकड़े होते हैं। बुवाई से पहले, माध्यम से हवा निकालने के लिए माध्यम को उबलते पानी के स्नान में 20-30 मिनट तक गर्म किया जाता है। बुवाई के बाद पोषक माध्यम तुरंत एक परत से भर जाता है तेल
अवायवीयता पैदा करने के तरीके:
1.भौतिक- हवा को पंप करना, एक विशेष ऑक्सीजन मुक्त गैस मिश्रण (आमतौर पर एन .) पेश करना 2 - 85% सीओ 2 - 10%, एच 2 - 5%), पोषक तत्व मीडिया का प्रारंभिक उबलना, अगर के एक गहरे स्तंभ में टीकाकरण, ऑक्सीजन की पहुंच को कम करने के लिए मीडिया को वैसलीन तेल से भरना, एक अक्रिय गैस के साथ भली भांति बंद शीशियों और टेस्ट ट्यूब, सीरिंज और प्रयोगशाला कांच के बने पदार्थ का उपयोग, जलती हुई मोमबत्ती के साथ कसकर बंद desiccators का उपयोग
2. रसायन रासायनिक ऑक्सीजन मैला ढोने वालों का उपयोग किया जाता है।
3. जैविक - सख्त एरोबेस और एनारोबेस की संयुक्त खेती (एरोबेस ऑक्सीजन को अवशोषित करते हैं और एनारोबेस के प्रजनन के लिए स्थितियां बनाते हैं - फोर्टनर विधि)।
बुधवार किट - तारोज़्ज़िक पर्यावरण से ऑक्सीजन को अवशोषित करने के लिए पोषक तत्व शोरबा, 0.5% ग्लूकोज और यकृत या कीमा बनाया हुआ मांस के टुकड़े होते हैं। बुवाई से पहले, माध्यम से हवा निकालने के लिए माध्यम को उबलते पानी के स्नान में 20-30 मिनट तक गर्म किया जाता है। बुवाई के बाद पोषक माध्यम तुरंत एक परत से भर जाता हैतेल या वैसलीन तेल ऑक्सीजन की पहुंच से अलग करने के लिए।
4. मिश्रित - कई अलग-अलग तरीकों का इस्तेमाल करें।
एनारोबिक स्थितियां बनाने के लिए विशेष उपकरणों का उपयोग किया जाता है - एनारोस्टैट्स। एनारोबिक और माइक्रोएरोफिलिक स्थितियां बनाने के लिए वर्तमान में सबसे सरल और सबसे कुशल उपकरण एक रासायनिक विधि है वायुमंडलीय ऑक्सीजन को भली भांति बंद करके सील किए गए कंटेनरों में अवशोषित करने के सिद्धांत पर कार्य करने वाले विशेष बैग के साथ .
विल्सन-ब्लेयर माध्यम (ट्यूब, कप):
पोषक तत्व आधार एमपीए श्वसन सब्सट्रेट शर्करा
कम करने वाला कारक सोडियम सल्फाइट और फेरिक क्लोराइड सोडियम सल्फाइटना 2 इसलिए 3 → ना 2 एस
विल्सन-ब्लेयर पर्यावरण के लिए, आधार है अगर अतिरिक्त के साथ शर्करा , क्लोस्ट्रीडिया इस माध्यम पर फार्म कालोनियों बहाली के कारण काला रंग सल्फाइट इससे पहले सल्फाइड - ऋणायन , जो से जुड़ा है फैटायनों ग्रंथि (II) काला नमक देता है। इस शिक्षा माध्यम पर आमतौर पर काला कालोनियों , अग्र स्तंभ की गहराई में दिखाई दें .
थियोग्लाइकॉल माध्यम (बाँझपन नियंत्रण के लिए माध्यम): (ट्यूब):
पोषक तत्व आधार बीसीएच श्वसन सब्सट्रेट शर्करा कम करने वाला कारक सोडियम थायोग्लाइकोलेट
सूचक रेसज़ुरिन
ज़ीस्लर रक्त ग्लूकोज अगर: (कप): पोषक तत्व आधार एमपीए, रक्त
श्वसन सब्सट्रेट शर्करा कम करने वाला कारक हीमोग्लोबिन
शब्द "एनारोबेस" पेश किया गया थालुई पास्चरजिसने 1861 में खोजा थाजीवाणुब्यूटिरिक किण्वन.
लेकिनव्याख्यान 3 सूक्ष्मजीवों का शरीर विज्ञान। बैक्टीरिया का चयापचय .
सूक्ष्मजीवों के शरीर विज्ञान में शामिल हैं :
भोजन के प्रकार;
श्वास के प्रकार;
खेती (स्थितियां, वातावरण, चरित्र और विकास दर);
जैव रासायनिक गतिविधि;
परिवर्तनशीलता;
जैविक रूप से सक्रिय पदार्थों, विषाक्त पदार्थों और अन्य रोगजनक कारकों की रिहाई;
एंटीबायोटिक दवाओं, बैक्टीरियोफेज, बैक्टीरियोसिन के प्रति संवेदनशीलता;
अन्य जैविक गुण।
बैक्टीरिया का चयापचय - भौतिक और रासायनिक प्रक्रियाओं (रासायनिक परिवर्तन और प्रतिक्रियाओं) का एक सेट जिसका उद्देश्य संरचनाओं को पुन: उत्पन्न करना और एक माइक्रोबियल सेल के महत्वपूर्ण कार्यों को सुनिश्चित करना है, जैसे:
वृद्धि और प्रजनन;
आरक्षित खाद्य सामग्री का जमाव;
माइक्रोबियल सेल में पोषक तत्वों का परिवहन;
चयापचय उत्पादों (विषाक्त पदार्थों, एंजाइम, एंटीबायोटिक्स और अन्य जैविक रूप से सक्रिय पदार्थ) की रिहाई;
ट्रैफ़िक;
बीजाणु गठन;
मेजबान कोशिकाओं के संवेदनशील रिसेप्टर्स पर आसंजन और उनमें प्रवेश;
बाहरी वातावरण में परिवर्तन के लिए विभिन्न अनुकूली प्रतिक्रियाएं।
उपचय- जैव रासायनिक प्रतिक्रियाओं का एक सेट जो सेल घटकों के संश्लेषण को अंजाम देता है।
अपचय- प्रतिक्रियाओं का एक सेट जो कोशिका को ऊर्जा प्रदान करता है।
चयापचय अध्ययन योजना - चरण:
1. प्रारंभिक (परिधीय) चयापचय - बाहर से कोशिका में पदार्थों का प्रवेश और मध्यवर्ती उत्पादों में क्षय।
2. एम्फीबोलिज्म (मध्यवर्ती चयापचय) - मध्यवर्ती चयापचय उत्पादों का गठन जो कैटोबोलिक और एनाबॉलिक मार्गों के लिए सामान्य है।
3. रचनात्मक चयापचय (कोशिका संरचनाओं के निर्माण के लिए नेतृत्व) और ऊर्जा चयापचय (एटीपी गठन) के अंतिम, कड़ाई से विशिष्ट चरण।
कोशिका में पोषक तत्वों के प्रवेश के लिए तंत्र:
सरल प्रसार (सच्चे समाधान के लिए)। ऊर्जा स्वतंत्र प्रक्रिया।
सुगम प्रसार ("स्टीम डाउनस्ट्रीम") - वाहक प्रोटीन की भागीदारी के साथ एकाग्रता ढाल की दिशा में। ऊर्जा निर्भर प्रक्रिया।
सक्रिय परिवहन परमिट (एमिनो-, हाइड्रॉक्सी-एसिड, आयनिक, आदि) की भागीदारी के साथ एकाग्रता और विद्युत रासायनिक ढाल के खिलाफ है। प्रक्रिया एटीपी ऊर्जा के व्यय के साथ चलती है, पदार्थों के प्रभार और स्थानांतरण की प्रक्रिया में उनके परिवर्तन पर निर्भर करती है।
कार्बन स्रोतों को अवशोषित करने की उनकी क्षमता के अनुसार सूक्ष्मजीवों को दो समूहों में विभाजित किया जाता है: स्वपोषी (अव्य। ऑटो - खुद, ट्रॉफी - पोषण) सीओ 2 से कोशिका के सभी कार्बन युक्त घटकों को कार्बन और हेटरोट्रॉफ़्स के एकमात्र स्रोत के रूप में संश्लेषित करते हैं (lat। हेटेरोस - दूसरा, "दूसरों की कीमत पर भोजन") विभिन्न प्रकार के कार्बनिक कार्बन युक्त यौगिकों का उपयोग करता है।
ऊर्जा स्रोतों के आधार पर, सूक्ष्मजीवों को फोटोट्रॉफ़्स (प्रकाश संश्लेषक) में भी विभाजित किया जाता है, जो सौर ऊर्जा का उपयोग करने में सक्षम होते हैं, और केमोट्रोफ़्स (रसायन संश्लेषक), रेडॉक्स प्रतिक्रियाओं के माध्यम से ऊर्जा प्राप्त करते हैं।
उपयोग किए गए इलेक्ट्रॉन दाताओं के आधार पर, बैक्टीरिया को लिथोट्रॉफ़ (अकार्बनिक इलेक्ट्रॉन दाताओं का उपयोग करके) और ऑर्गनोट्रोफ़ (कार्बनिक यौगिकों का उपयोग करके) में विभाजित किया जाता है।
प्रोटोट्रॉफ़्स- ग्लूकोज और अमोनियम लवण से आवश्यक सभी कार्बनिक यौगिकों को संश्लेषित करने में सक्षम सूक्ष्मजीव।
औक्सोट्रॉफ़्स- सूक्ष्मजीव किसी भी कार्बनिक यौगिक को संश्लेषित करने में असमर्थ होते हैं। वे इन यौगिकों को तैयार करके प्राप्त करते हैं वातावरणया मानव शरीर।
एंजाइमों(ग्रीक से। fermentum-sourdough) - सभी जीवित कोशिकाओं में मौजूद अत्यधिक विशिष्ट प्रोटीन उत्प्रेरक, जिसके बिना जीवन और प्रजनन संभव नहीं है। एंजाइम अपने संबंधित मेटाबोलाइट्स (सब्सट्रेट) को पहचानते हैं, उनके साथ बातचीत करते हैं, और रासायनिक प्रतिक्रियाओं को तेज करते हैं। एंजाइम प्रोटीन होते हैं।
सूक्ष्मजीव की एंजाइम संरचना जीनोम द्वारा निर्धारित की जाती है और यह काफी स्थिर विशेषता है। जीवाणुओं की जैव रासायनिक पहचान के लिए एंजाइमों के निर्धारण का व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है।
एंडोएंजाइम कोशिका के भीतर चयापचय को उत्प्रेरित करते हैं।
एक्सोएंजाइम कोशिका द्वारा पर्यावरण में स्रावित होते हैं।
विधानएंजाइम लगातार कुछ सांद्रता में संश्लेषित होते हैं।
प्रेरकएंजाइम एंजाइम होते हैं जिनकी सांद्रता संबंधित सब्सट्रेट के सेवन से बढ़ जाती है।
आक्रामकता के एंजाइम:हयालूरोनिडेस, फाइब्रिनोलिसिन, न्यूरोमिनिडेज़, कोलेजनेज़, लेसिथिनेज़ (लिसिटोविटेलेज़), कोगुलेज़, यूरेज़, अमीनो एसिड डिकार्बोक्सिलेज़, डीऑक्सीराइबोन्यूक्लिज़।
खेती करना- एक कृत्रिम पोषक माध्यम में सूक्ष्मजीवों की संस्कृतियों को प्राप्त करना।
खेती के लक्ष्य:
रोगजनक सूक्ष्मजीवों और उनकी पहचान की शुद्ध संस्कृतियों को प्राप्त करना;
बीएएस उत्पादकों (विटामिन, हार्मोन, अमीनो एसिड, एंटीबायोटिक्स, आदि) के बायोमास का संचय;
नैदानिक और रोगनिरोधी तैयारी (टीके, निदान) प्राप्त करना;
संदर्भ संग्रहालय संस्कृतियों का भंडारण;
सैनिटरी-सूक्ष्मजीवों को निर्धारित करने के लिए सैनिटरी माइक्रोबायोलॉजी में - पर्यावरण प्रदूषण के संकेतक।
संस्कृति- पोषक माध्यम पर उगने वाले सूक्ष्मजीवों की आबादी।
शुद्ध संस्कृति- पोषक माध्यम पर एक अलग कॉलोनी से उगाए गए एक प्रकार के सूक्ष्मजीवों की आबादी।
अधिकांश रोगजनक रोगाणुओं को पोषक माध्यम पर 37 डिग्री सेल्सियस पर 1-2 दिनों के लिए उगाया जाता है।
संस्कृति मीडिया का वर्गीकरण
संगति से:तरल, अर्ध-तरल, घना।
मूल:प्राकृतिक (दूध, आलू), कृत्रिम, अर्ध-सिंथेटिक, सिंथेटिक
रचना में:सरल (एमपीए, एमपीबी, सब्जियां, दूध), जटिल (1% ग्लूकोज, 10-20% सीरम, 20-30% जलोदर द्रव, 5-10% डिफिब्रिनेटेड रक्त)।
मिलने का समय निश्चित करने पर:
यूनिवर्सल - मीडिया जिस पर कई तरह के बैक्टीरिया अच्छी तरह पनपते हैं। इनमें मीट-पेप्टोन ब्रोथ (एमपीबी) और मीट-पेप्टोन एगर (एमपीए) शामिल हैं;
विशेष - मीडिया विशेष रूप से बैक्टीरिया के विकास को प्राप्त करने के लिए तैयार है जो सार्वभौमिक मीडिया पर नहीं बढ़ते हैं;
विभेदक निदान - वातावरण जो एंजाइमी गतिविधि द्वारा एक प्रकार के बैक्टीरिया को दूसरों से अलग करना संभव बनाता है;
चयनात्मक - मीडिया जिसमें कुछ प्रजातियों के सूक्ष्मजीवों द्वारा उपयोग किए जाने वाले पदार्थ होते हैं और अन्य सूक्ष्मजीवों के विकास को रोकते हैं। चयनात्मक मीडिया आपको अध्ययन के तहत सामग्री से कुछ प्रकार के बैक्टीरिया का चयन करने की अनुमति देता है;
विभेदक-चयनात्मक - ऐसे वातावरण जो विभेदक निदान और चयनात्मक वातावरण के गुणों को जोड़ते हैं;
परिरक्षक;
एकाग्र करना।
तरल और घने पोषक माध्यम पर बैक्टीरिया का प्रजनन।
वृद्धि एक जीवाणु कोशिका के सभी घटकों का समन्वित प्रजनन और इसके बायोमास में वृद्धि। प्रजनन- प्रजनन और कोशिकाओं की संख्या में वृद्धि, जिससे जीवाणु आबादी का निर्माण होता है।
बैक्टीरिया को प्रजनन की उच्च दर की विशेषता है। प्रजनन की दर प्रजातियों, संरचना पर निर्भर करती है तरक्की का जरिया, पीएच, तापमान, वातन।
घने पोषक माध्यम पर, बैक्टीरिया कॉलोनियों नामक कोशिकाओं के समूह बनाते हैं। विभिन्न प्रजातियों की कॉलोनियां आकार, आकार, स्थिरता, रंग, किनारों की प्रकृति, सतह की प्रकृति, पारदर्शिता में भिन्न होती हैं।
तरल पोषक माध्यम पर वृद्धि की प्रकृति: फिल्मी (पोषक माध्यम की सतह पर एक फिल्म का निर्माण), फैलाना मैलापन, निकट-नीचे (वर्षा)।
जीवाणु आबादी के विकास के चरण
प्रारंभिक स्थिर चरण (~ 1-2 घंटे)। बैक्टीरिया की संख्या नहीं बढ़ती है, कोशिकाएं नहीं बढ़ती हैं।
अंतराल चरण या प्रजनन विलंब चरण (~ 2 घंटे)।
लॉग-चरण - लघुगणक या घातीय चरण (~ 3-5h)। जनसंख्या अधिकतम गति से विभाजित हो रही है और व्यक्तियों में तेजी से वृद्धि हो रही है।
नकारात्मक त्वरण का चरण (~ 2 घंटे)। सीमित मेटाबोलाइट की कमी या विषाक्त चयापचय उत्पादों के संचय के साथ संबद्ध।
अधिकतम का स्थिर चरण। बनने और मरने वाली कोशिकाओं की संख्या समान होती है।
त्वरित मृत्यु का चरण (~ 3 घंटे)।
लघुगणक मृत्यु चरण (~5)।
मृत्यु दर घटने का चरण - शेष जीवित व्यक्ति सुप्त अवस्था में चले जाते हैं।
बैक्टीरिया का ऊर्जा चयापचय
एरोबिक्स- सूक्ष्मजीव जो सब्सट्रेट के एरोबिक (ऑक्सीडेटिव) प्रकार के जैविक ऑक्सीकरण का उपयोग करते हैं। एरोबेस का चयापचय केवल आवास में मुक्त ऑक्सीजन की उच्च सांद्रता की उपस्थिति में किया जाता है, जो सब्सट्रेट से लिए गए इलेक्ट्रॉनों के अंतिम स्वीकर्ता के रूप में कार्य करता है। वायुमंडलीय ऑक्सीजन की पूर्ण पहुंच के साथ मीडिया पर एरोबेस की खेती की जाती है।
बाध्य अवायवीय- अवायवीय प्रकार का उपयोग करने वाले सूक्ष्मजीव जैविक ऑक्सीकरण(किण्वन)। चयापचय केवल ऑक्सीजन की अनुपस्थिति में कम रेडॉक्स क्षमता वाले वातावरण में होता है।
पर्यावरण में ऑक्सीजन की मात्रा में वृद्धि से वानस्पतिक रूपों की मृत्यु हो जाती है।
किण्वन के दौरान निकाली गई ऊर्जा की मात्रा कम होती है, इसलिए बाध्यकारी अवायवीय जीवों को बड़ी मात्रा में सब्सट्रेट को किण्वित करने के लिए मजबूर किया जाता है।
एछिक अवायुजीव- जैविक ऑक्सीकरण के एरोबिक (ऑक्सीडेटिव) और एनारोबिक (किण्वक) मार्गों द्वारा सब्सट्रेट से ऊर्जा निकालने में सक्षम सूक्ष्मजीव। पर्यावरण के लिए ऑक्सीजन की पूर्ण पहुंच की शर्तों के तहत और एनारोबायोसिस की स्थितियों के तहत चयापचय किया जा सकता है।
अवायवीयता पैदा करने के तरीके
भौतिक
चीनी एमपीए के एक कॉलम में बुवाई;
तरल पोषक माध्यम का उबलना (पुनर्जनन) जिसके बाद तेल का लेप होता है;
एनारोस्टैट्स में ऑक्सीजन का यांत्रिक निष्कासन;
एक उदासीन गैस द्वारा ऑक्सीजन का प्रतिस्थापन;
वीलन-विग्नल ट्यूब।
रासायनिक
अरिस्टोव्स्की का तंत्र;
मोमबत्ती ओमेलिंस्की ( क्षारीय घोलपाइरोगॉलोल);
रासायनिक ऑक्सीजन स्वीकर्ता का उपयोग: ग्लूकोज, पाइरुविक एसिड, सोडियम फॉर्मिक एसिड, आदि।
जैविक
किट्टा-तरोज़ी बुधवार
फ़ोर्टनर विधि
अवायवीय - जीव जो पहुंच के अभाव में ऊर्जा प्राप्त करते हैं ऑक्सीजन सब्सट्रेट द्वारा फास्फारिलीकरण सब्सट्रेट के अधूरे ऑक्सीकरण के अंतिम उत्पादों को अधिक ऊर्जा के साथ ऑक्सीकरण किया जा सकता हैएटीपी जीवों द्वारा एक टर्मिनल प्रोटॉन स्वीकर्ता की उपस्थिति में .
अवायुश्वसन- सकल जैव रासायनिक प्रतिक्रियाएं, जीवित जीवों की कोशिकाओं में होने वाले अंतिम प्रोटॉन स्वीकर्ता के रूप में उपयोग नहीं किया जाता है ऑक्सीजन, और अन्य पदार्थ (उदाहरण के लिए, नाइट्रेट) और प्रक्रियाओं को संदर्भित करता है ऊर्जा उपापचय(अपचय,भेद), जो विशेषता हैं ऑक्सीकरणकार्बोहाइड्रेट,लिपिडतथा अमीनो अम्लकम आणविक भार यौगिकों के लिए।
लेकिन 
एरोबिक और एनारोबिक बैक्टीरिया को प्रारंभिक रूप से तरल पोषक माध्यम में O2 सांद्रता प्रवणता द्वारा पहचाना जाता है:
1. एरोबिक को बाध्य करें(ऑक्सीजन की मांग करने वाले) बैक्टीरिया मुख्य रूप से ऑक्सीजन की अधिकतम मात्रा को अवशोषित करने के लिए ट्यूब के शीर्ष पर इकट्ठा होते हैं। (अपवाद: माइकोबैक्टीरिया - मोम-लिपिड झिल्ली के कारण सतह पर फिल्म की वृद्धि।)
2. बाध्य अवायवीयबैक्टीरिया ऑक्सीजन से बचने (या बढ़ने नहीं) के लिए तल पर इकट्ठा होते हैं। 3. वैकल्पिक बैक्टीरियामुख्य रूप से ऊपरी ( ऑक्सीडेटिव फास्फारिलीकरणग्लाइकोलाइसिस की तुलना में अधिक फायदेमंद है), हालांकि, वे पूरे माध्यम में पाए जा सकते हैं, क्योंकि वे ओ 2 पर निर्भर नहीं होते हैं। चार . माइक्रोएरोफाइलट्यूब के ऊपरी भाग में एकत्र किए जाते हैं, लेकिन उनका इष्टतम ऑक्सीजन की कम सांद्रता है। 5. एरोटोलेरेंटअवायवीय ऑक्सीजन सांद्रता पर प्रतिक्रिया नहीं करते हैं और समान रूप से पूरे टेस्ट ट्यूब में वितरित किए जाते हैं।
डी 
माप के लिए क्षमतावातावरण एम. क्लार्क pH20 मान का उपयोग करने का प्रस्ताव - ऋणात्मक लोगारित्मआंशिक दबावगैसीय हाइड्रोजन. रेंज हाइड्रोजन और ऑक्सीजन के साथ एक जलीय घोल की संतृप्ति की सभी डिग्री की विशेषता है। एरोबिक्स एक उच्च क्षमता पर विकसित होते हैं, वैकल्पिक अवायवीय, और सबसे कम लोगों को बाध्य करते हैं।)
अवायवीय का वर्गीकरण, अंतर करना:
एछिक अवायुजीव
Capneistic anaerobes और microaerophiles
एरोटोलरेंट एनारोबेस
मध्यम सख्त अवायवीय
बाध्य अवायवीय
यदि कोई जीव एक उपापचयी मार्ग से दूसरे उपापचयी मार्ग में जाने में सक्षम है (उदाहरण के लिए, अवायवीय श्वसन से एरोबिकऔर इसके विपरीत), तो इसे सशर्त रूप से ऐच्छिक अवायवीय के रूप में जाना जाता है .
1991 तक, माइक्रोबायोलॉजी में कैपेनिस्टिक एनारोबेस के एक वर्ग को प्रतिष्ठित किया गया था, जिसके लिए कम एकाग्रता की आवश्यकता होती है ऑक्सीजनऔर कार्बन डाइऑक्साइड की बढ़ी हुई सांद्रता (ब्रुसेला गोजातीय प्रकार - बी। गर्भपात)
सांस्कृतिक अनुसंधान विधिखेती द्वारा एक निश्चित प्रकार के बैक्टीरिया के पोषक माध्यम से अलगाव है, उनकी बाद की प्रजातियों की पहचान के साथ। बैक्टीरिया का प्रकार उनकी संरचना, सांस्कृतिक और पर्यावरणीय डेटा, साथ ही आनुवंशिक, जैव रासायनिक और जैविक संकेतकों को ध्यान में रखते हुए निर्धारित किया जाता है। बैक्टीरियोलॉजिकल डायग्नोस्टिक्स के लिए, स्वास्थ्य मंत्रालय द्वारा अनुमोदित योजनाओं का उपयोग किया जाता है।
पोषक माध्यम से व्युत्पन्न जीवाणुओं की नई प्रजातियां, जिनके गुण अभी तक निर्धारित नहीं किए गए हैं, कहलाते हैं शुद्ध संस्कृति. उनकी विशेषताओं की अंतिम पहचान के बाद, एक निश्चित स्थान से और एक निश्चित समय पर प्राप्त बैक्टीरिया को एक नाम दिया जाता है। तनाव।इस मामले में, एक प्रजाति के तनाव के गुणों, स्थान या अलगाव के समय में मामूली अंतर की अनुमति है।
विधि का उद्देश्य:
1. एटियलॉजिकल डायग्नोसिस, यानी बैक्टीरिया की शुद्ध संस्कृति का अलगाव और पहचान।
2. सूक्ष्मजीवों की संख्या और उनकी विशेष विशेषताओं का निर्धारण। उदाहरण के लिए, एंटीबायोटिक दवाओं के लिए एक विशिष्ट प्रतिक्रिया।
3. उनके महामारी विज्ञान और आनुवंशिक घटक के आधार पर सूक्ष्मजीवों के अंतर्गर्भाशयी अंतर की पहचान। विभिन्न स्थानों और विभिन्न परिस्थितियों में पृथक सूक्ष्मजीवों की समानता को निर्धारित करने के लिए यह आवश्यक है, जो महामारी विज्ञान के उद्देश्यों के लिए महत्वपूर्ण है।
इस शोध पद्धति में चरणों की एक निश्चित संख्या है, जो एरोबिक, वैकल्पिक और बाध्यकारी एरोबिक बैक्टीरिया के लिए अलग-अलग हैं।
एरोबिक और वैकल्पिक एरोबिक बैक्टीरिया के लिए शुद्ध संस्कृति का प्रजनन।
प्रथम चरण
लेकिन) तैयारी गतिविधियाँ. इस चरण में सामग्री का संग्रह, भंडारण और परिवहन शामिल है। इसके अलावा, यदि आवश्यक हो, तो अध्ययन किए गए बैक्टीरिया के गुणों के आधार पर इसे संसाधित किया जा सकता है। उदाहरण के लिए, तपेदिक के लिए सामग्री की जांच करते समय, एसिड प्रतिरोधी माइक्रोबैक्टीरिया की पहचान के लिए क्षार या एसिड समाधान का उपयोग किया जाता है।
बी) समृद्ध. यह चरण वैकल्पिक है और इसे तब किया जाता है जब परीक्षण सामग्री में बैक्टीरिया की संख्या पूर्ण अध्ययन करने के लिए पर्याप्त नहीं होती है। उदाहरण के लिए, रक्त संस्कृति को अलग करते समय, परीक्षण रक्त को 1 से 10 के अनुपात में एक माध्यम में रखा जाता है और 37 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर एक दिन के लिए संग्रहीत किया जाता है।
पर) माइक्रोस्कोपी. परीक्षण सामग्री का एक धब्बा एक माइक्रोस्कोप के तहत दाग और जांच की जाती है - माइक्रोफ्लोरा, इसके गुणों और मात्रा की जांच की जाती है। भविष्य में, प्राथमिक स्मीयर से, इसमें सभी सूक्ष्मजीवों को अलग-अलग करना आवश्यक है।
जी) अलग कॉलोनियों का निर्माण. सामग्री को एक विशेष, चयनात्मक माध्यम के साथ कप पर लगाया जाता है, इसके लिए एक लूप या एक स्पैटुला का उपयोग किया जाता है। इसके बाद, कॉलोनियों को संक्षेपण से बचाने के लिए कप को उल्टा सेट करें, और थर्मोस्टैट में लगभग 20 घंटे के लिए स्टोर करें, 37 डिग्री का तापमान बनाए रखें।
महत्वपूर्ण!यह याद रखना चाहिए कि शोध की प्रक्रिया में अलगाव के नियमों का पालन करना आवश्यक है। एक ओर, परीक्षण सामग्री और बैक्टीरिया को हटाने के लिए, और दूसरी ओर, आसपास के व्यक्तियों और बाहरी वातावरण के संदूषण को रोकने के लिए।
सशर्त रूप से रोगजनक सूक्ष्मजीवों के लिए, जब उन्हें हटा दिया जाता है, तो उनकी मात्रात्मक विशेषताएं मायने रखती हैं। इस मामले में, मात्रात्मक बीजारोपण किया जाता है, जिसमें आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड समाधान में सामग्री के कई सौ गुना पतलापन किया जाता है। उसके बाद, 50 μl के पेट्री डिश में बुवाई की जाती है।
चरण 2
लेकिन ) द स्टडी रूपात्मक गुणमीडिया में उपनिवेश और उनकी माइक्रोस्कोपी. व्यंजनों की जांच की जाती है और सूक्ष्मजीवों के गुण, उनकी संख्या, विकास दर और सबसे उपयुक्त पोषक माध्यम का उल्लेख किया जाता है। अध्ययन के लिए, केंद्र के करीब स्थित कॉलोनियों को चुनना सबसे अच्छा है, और यदि कई प्रकार की शुद्ध संस्कृतियों का निर्माण होता है, तो प्रत्येक का अलग-अलग अध्ययन करें। संस्कृति की रूपात्मक शुद्धता का अध्ययन करने के लिए, एक कॉलोनी स्मीयर का उपयोग किया जाता है, इसे दाग दिया जाता है (आमतौर पर) ग्राम विधि या किसी अन्य का उपयोग करके) और सावधानीपूर्वक सूक्ष्मदर्शी।
बी) शुद्ध संस्कृति का संचय. ऐसा करने के लिए, सभी मोर्फोटाइप की कॉलोनियों को पोषक माध्यम के साथ अलग-अलग टेस्ट ट्यूब में रखा जाता है और एक निश्चित तापमान पर थर्मोस्टैट में रखा जाता है (अधिकांश सूक्ष्मजीवों के लिए, 37 o का तापमान उपयुक्त होता है, लेकिन कुछ मामलों में यह भिन्न हो सकता है)।
क्लिगलर के माध्यम को अक्सर संचय के लिए पोषक माध्यम के रूप में प्रयोग किया जाता है। टेस्ट ट्यूबों में इसकी "तिरछी" उपस्थिति होती है, जहां इसके 2/3 हिस्से कॉलम के रूप में होते हैं, और 1/3 एक बेवल वाली सतह होती है, रंगीन हल्का लाल . मिश्रण:
· एमपीए
· 0.1% ग्लूकोज
· 1% लैक्टोज
· हाइड्रोजन सल्फाइड के लिए विशेष अभिकर्मक
· फेनोलिक लाल संकेतक।
चरण 3
लेकिन) संस्कृति की वृद्धि और शुद्धता का स्तर. सामान्य क्रम में, व्युत्पन्न शुद्ध संस्कृति में एक समान वृद्धि होती है और सूक्ष्म परीक्षा के तहत, कोशिकाओं में समान रूपात्मक और टिंक्टोरियल संरचना होती है। लेकिन स्पष्ट फुफ्फुसवाद के साथ कुछ प्रकार के बैक्टीरिया होते हैं, जबकि ऐसी कोशिकाएं होती हैं जिनकी एक अलग रूपात्मक संरचना होती है।
यदि Kligler के माध्यम को पोषक माध्यम के रूप में उपयोग किया जाता है, तो जैव रासायनिक विशेषताओं को स्तंभ के रंग और बेवल वाले भाग को बदलकर निर्धारित किया जाता है। उदाहरण के लिए, यदि लैक्टोज विघटित हो जाता है, तो बेवल वाला भाग पीला हो जाता है, यदि ग्लूकोज - स्तंभ का पीलापन; हाइड्रोजन सल्फाइड के उत्पादन के साथ, सल्फेट के लौह सल्फाइड में संक्रमण के कारण कालापन होता है।
जैसा कि आप चित्र में देख सकते हैं, Kligler माध्यम अपना रंग बदलने के लिए प्रवृत्त होता है। यह इस तथ्य के कारण है कि बैक्टीरिया द्वारा नाइट्रोजनयुक्त पदार्थों का टूटना और क्षार उत्पादों का निर्माण स्तंभ (अवायवीय स्थितियों) और ढलान वाली सतह (एरोबिक स्थितियों) दोनों में अमानवीय रूप से होता है।
एक एरोबिक वातावरण (तिरछी सतह) में अवायवीय वातावरण (स्तंभ) की तुलना में अधिक सक्रिय क्षार गठन देखा जाता है। इसलिए, जब ग्लूकोज विघटित होता है, तो ढलान वाली सतह पर एसिड आसानी से बेअसर हो जाता है। लेकिन, लैक्टोज के अपघटन के साथ, जिसकी सांद्रता बहुत अधिक है, एसिड को बेअसर नहीं किया जा सकता है।
अवायवीय वातावरण के लिए, बहुत कम क्षारीय उत्पाद उत्पन्न होते हैं, इसलिए यहां आप देख सकते हैं कि ग्लूकोज कैसे किण्वित होता है।
चावल।क्लिगलर का पोषक माध्यम:
1 - प्रारंभिक वातावरण,
2 - वृद्धि ई कोलाई
3 - वृद्धि एस. पैराटाइफी बी,
4 - वृद्धि एस टाइफी।
इ।कोलाई-गैसों के निर्माण के साथ ग्लूकोज और लैक्टोज के अपघटन को बढ़ावा देता है, हाइड्रोजन का उत्पादन नहीं करता है . असंततता के साथ पूरे माध्यम के पीलेपन का कारण बनता है।
एस. पैराटाइफी -गैसों के निर्माण के साथ ग्लूकोज के अपघटन को बढ़ावा देता है, लैक्टोज-नकारात्मक। बेवल वाला हिस्सा रंग नहीं बदलता है, कॉलम पीला हो जाता है।
एस. पैराटाइफी ए-हाइड्रोजन सल्फाइड का उत्पादन नहीं करता है।
एस. पैराटाइफी बी -हाइड्रोजन सल्फाइड का उत्पादन होता है (इंजेक्शन के दौरान एक काला रंग दिखाई देता है)।
एस टाइफी -ग्लूकोज गैस बनने के बिना विघटित हो जाता है, हाइड्रोजन सल्फाइड का उत्पादन होता है, लैक्टोज-विकर्षक। बेवल वाला हिस्सा रंग नहीं बदलता है, कॉलम पीला हो जाता है और इंजेक्शन के दौरान माध्यम काला हो जाता है।
शिगेला एसपीपी।-लैक्टोज-नकारात्मक, ग्लूकोज-पॉजिटिव, हाइड्रोजन सल्फाइड का उत्पादन नहीं होता है। स्तंभ एक पीले रंग की टिंट प्राप्त करता है, और बेवल वाला हिस्सा वही रहता है।
बी) शुद्ध संस्कृति की अंतिम पहचान और एंटीबायोटिक दवाओं के प्रति इसकी प्रतिक्रिया. पर यह अवस्थासंस्कृति के जैव रासायनिक, जैविक, सीरोलॉजिकल और आनुवंशिक गुणों का अध्ययन किया जाता है।
अनुसंधान अभ्यास में, सूक्ष्मजीवों के गुणों की पूरी श्रृंखला का अध्ययन करने की आवश्यकता नहीं है। यह निर्धारित करने के लिए कि क्या सूक्ष्मजीव किसी विशेष प्रजाति से संबंधित हैं, सरलतम परीक्षणों का उपयोग करना पर्याप्त है।
लक्ष्य:
1. बैक्टीरिया की शुद्ध संस्कृतियों को अलग करने के लिए अध्ययन के तरीके
2. संक्रामक रोगों के निदान की बैक्टीरियोलॉजिकल पद्धति में महारत हासिल करें।
सैद्धांतिक संदर्भ
बैक्टीरियोलॉजिकल विधिसंक्रामक रोगों के निदान की मुख्य विधि है। इसका सार संक्रामक एजेंट के प्रकार को निर्धारित करना है, इसलिए, बैक्टीरियोलॉजिकल विधि के परिणामों के आधार पर, एक एटियलॉजिकल (अंतिम) निदान किया जा सकता है। विधि का मुख्य नुकसान अध्ययन की अवधि है - 3 से 5 दिनों तक, और कुछ मामलों में इससे भी अधिक।
बैक्टीरियोलॉजिकल विधि की सफलता काफी हद तक प्रारंभिक चरण पर निर्भर करती है, जिसमें परीक्षण सामग्री और उसके परिवहन के नमूने और एक बैक्टीरियोलॉजिकल प्रयोगशाला के लिए एक रेफरल का डिज़ाइन शामिल है। इस मामले में, कई नियमों का पालन किया जाना चाहिए।
1. बाड़परीक्षण सामग्री को एंटीबायोटिक चिकित्सा की शुरुआत से पहले या एंटीबायोटिक की अंतिम खुराक के 8-10 घंटे बाद किया जाना चाहिए। पर्यावरण के माइक्रोफ्लोरा के साथ नमूने के संदूषण से बचने के लिए, सख्त सड़न रोकनेवाला निरीक्षण करना आवश्यक है। ऐसा करने के लिए, बाँझ सामग्री का उपयोग करें: ए) घाव से सामग्री लेने के लिए, श्लेष्म झिल्ली (आंखों, ग्रसनी, नाक) से कपास झाड़ू; बी) योनि, गुदा से सामग्री लेने के लिए एक तार का लूप; ग) रक्त, मवाद लेने के लिए एक सिरिंज; घ) इसमें मूत्र, थूक, मल के सीधे संग्रह के लिए बाँझ व्यंजन।
2. परिवहनप्राप्त सामग्री को जल्द से जल्द (2-3 घंटे) विशेष बाइक या पेंसिल केस में तैयार किया जाना चाहिए।
3. दिशानैदानिक नमूने के साथ संलग्न दस्तावेज के रूप में। इसमें सूक्ष्मजीवविज्ञानी अध्ययन करने के लिए आवश्यक बुनियादी जानकारी शामिल है:
उपनाम, नाम, संरक्षक, रोगी की आयु;
रोग का प्रस्तावित निदान;
पूर्व रोगाणुरोधी चिकित्सा;
सामग्री की प्रकृति;
सामग्री लेने की तिथि और समय;
अध्ययन का उद्देश्य;
चिकित्सा संस्थान का नाम, विभाग की संख्या, वार्ड;
चिकित्सक के हस्ताक्षर।
बैक्टीरियोलॉजिकल विधि दो चरणों में की जाती है (चित्र। 2.1।):
1. रोगज़नक़ की शुद्ध संस्कृति का अलगाव (1-2 दिन);
2. शुद्ध संस्कृति की पहचान (1-3 दिन)।
पहले चरण में, परीक्षण सामग्री को एक ठोस या तरल पोषक माध्यम पर बोया जाता है, सांस्कृतिक गुणों का आकलन किया जाता है, संदिग्ध कॉलोनियों का चयन किया जाता है और एक तिरछी आगर पर जांच की जाती है। पहचान चरण में पृथक शुद्ध संस्कृति के आकारिकी, जैव रासायनिक गुणों और एंटीजेनिक संरचना का अनिवार्य अध्ययन, साथ ही एंटीबायोटिक संवेदनशीलता, फेज संवेदनशीलता, फेज टाइपिंग, रोगजनकता और लगातार गुणों को निर्धारित करने के लिए अतिरिक्त अध्ययन शामिल हैं।
तैयारी के प्रश्न:
1. बैक्टीरियोलॉजिकल परीक्षा के लिए परीक्षण सामग्री के संग्रह और परिवहन के नियम।
2. बैक्टीरियोलॉजिकल परीक्षा के लिए एक रेफरल जारी करने के नियम।
3. सूक्ष्मजीवों की शुद्ध संस्कृतियों को अलग करने के तरीके।
4. बैक्टीरियोलॉजिकल डायग्नोस्टिक विधि। लक्ष्य। चरण। नैदानिक मूल्य।
स्वतंत्र कार्य योजना:
1. तालिकाओं का अध्ययन करें "बैक्टीरिया की शुद्ध संस्कृतियों के अलगाव के तरीके" और "शुद्ध संस्कृतियों का अलगाव और पहचान"।
2. बैक्टीरिया के मिश्रण से एक शुद्ध संस्कृति को अलग करें और इसकी पहचान करें - बैक्टीरियोलॉजिकल डायग्नोस्टिक विधि में महारत हासिल करें (कार्य 1)
विषय: बंध्याकरण, सड़न रोकनेवाला, सेप्सिस, कीटाणुशोधन।
सिद्धांत, सूक्ष्मजीवों की खेती के तरीके और शुद्ध संस्कृतियों का अलगाव।
जीवाणु अनुसंधान विधि। प्रथम चरण।
1. सूक्ष्म जीव विज्ञान और चिकित्सा में उपयोग किए जाने वाले कीटाणुशोधन और नसबंदी के मुख्य तरीकों से खुद को परिचित करें।
2. सूक्ष्मजीवों के चयापचय की विशेषताओं, प्रयोगशाला में उनकी खेती के सिद्धांतों को जानें।
3. संक्रामक रोगों के निदान के लिए बैक्टीरियोलॉजिकल पद्धति का मास्टर चरण 1।
1. पोषक मीडिया, प्रयोगशाला कांच के बने पदार्थ, चिकित्सा उपकरणों की नसबंदी के तरीके, उपकरण और तरीके।
2. कीटाणुनाशकों के मुख्य समूह, उनकी क्रिया का तंत्र, क्षेत्र और आवेदन की विधि।
3. सूक्ष्मजैविक पद्धति में पोषक माध्यमों की नियुक्ति।
4. संक्रामक रोगों के निदान में "स्वर्ण मानक" के रूप में सूक्ष्मजीवों की शुद्ध संस्कृतियों और बैक्टीरियोलॉजिकल विधि का सार प्राप्त करने का सिद्धांत।
5. सूक्ष्मजीवों की शुद्ध संस्कृतियों को अलग करने के लिए बैक्टीरियोलॉजिकल विधि के पहले चरण के प्रदर्शन का उद्देश्य और क्रम।
1. विशिष्ट कार्यों के अनुसार साधन, नसबंदी और कीटाणुशोधन के तरीके का चयन करें।
2. सूक्ष्मजीवविज्ञानी अभ्यास में प्रयुक्त प्रस्तावित पोषक माध्यम का वर्णन करें।
3. एरोबिक सूक्ष्मजीवों की शुद्ध संस्कृतियों को अलग करने के लिए बैक्टीरियोलॉजिकल विधि का पहला चरण पूरा करें।
1. सूक्ष्मजीवों पर कम और उच्च तापमान का बैक्टीरियोस्टेटिक और जीवाणुनाशक प्रभाव।
2. रसायनों का प्रभाव विभिन्न वर्गसूक्ष्मजीवों पर। एंटीसेप्टिक्स और कीटाणुनाशक।
3. अवधारणाएं: नसबंदी, कीटाणुशोधन, सड़न रोकनेवाला, एंटीसेप्सिस।
4. नसबंदी के तरीके, उपकरण और तरीके, उनकी पसंद निष्फल होने वाली वस्तु के गुणों पर निर्भर करती है।
5. स्वास्थ्य सुविधाओं में कीटाणुनाशकों के मुख्य समूह और उनके उपयोग की रणनीति।
6. सूक्ष्मजीवों की खेती के सिद्धांत और तरीके।
7. पोषक माध्यम: अवधारणा; उनके लिए आवश्यकताएं; वर्गीकरण।
8. एक प्रजाति, नस्ल, उपनिवेश, सूक्ष्मजीवों की शुद्ध संस्कृति की अवधारणा।
9. बैक्टीरियोलॉजिकल विधि का सार और इसके आवेदन का दायरा।
10. एरोबेस के अलगाव के लिए बैक्टीरियोलॉजिकल विधि के पहले चरण का उद्देश्य और क्रम।
पाठ के दौरान किए गए कार्य (UIRS):
1. चिकित्सा और सूक्ष्मजीवविज्ञानी अभ्यास में नसबंदी के लिए उपयोग किए जाने वाले उपकरणों से खुद को परिचित करें: स्टीम स्टेरलाइजर (आटोक्लेव), पाश्चर ओवन।
2. पोषक मीडिया, प्रयोगशाला कांच के बने पदार्थ, चिकित्सा उपकरणों के नसबंदी के उपकरणों और तरीकों का चयन करें।
3. चिकित्सा और सूक्ष्मजीवविज्ञानी अभ्यास में उपयोग किए जाने वाले कीटाणुनाशकों से खुद को परिचित करें। प्रस्तावित वस्तुओं के लिए कीटाणुनाशक और कीटाणुशोधन मोड का चयन करें।
4. सूक्ष्मजीवविज्ञानी अभ्यास में उपयोग किए जाने वाले विभिन्न पोषक माध्यमों से खुद को परिचित करें, संरचना, स्थिरता और उद्देश्य के संदर्भ में उनका वर्णन करें।
5. एरोबिक्स की शुद्ध संस्कृतियों को अलग करने के लिए बैक्टीरियोलॉजिकल विधि के चरण 1 को पूरा करें:
5.1. परीक्षण सामग्री से एक निश्चित तैयारी तैयार करें, ग्राम द्वारा दाग, सूक्ष्मदर्शी रूप से और रूपात्मक और टिंक्टोरियल गुणों द्वारा पहचाने गए सूक्ष्मजीवों की पहचान करें।
5.2. परीक्षण सामग्री को "एक मंच के साथ स्ट्रोक" विधि का उपयोग करके बोएं।
5.3. ड्रायगल्स्की विधि (प्रदर्शन) का उपयोग करके परीक्षण सामग्री की बुवाई करें।
6. रोग संबंधी सामग्रियों के संग्रह और परिवहन के लिए उपकरणों के सेट से खुद को परिचित करें।
दिशा-निर्देशअनुसंधान कार्य के लिए:
1. नसबंदी के लिए उपयोग किए जाने वाले उपकरणों से परिचित: स्टीम स्टेरलाइजर (आटोक्लेव), पाश्चर ओवन।
1.1. स्टीम स्टरलाइज़र (आटोक्लेव) - दबाव में भाप की नसबंदी।
चिकित्सा और सूक्ष्मजीवविज्ञानी अभ्यास में नसबंदी का सबसे विश्वसनीय और सार्वभौमिक तरीका दबाव भाप नसबंदी है। यह एक आटोक्लेव में निर्मित होता है, जिसमें स्टरलाइज़ की जाने वाली वस्तुओं को वायुमंडलीय से ऊपर के दबाव में संतृप्त भाप से गर्म किया जाता है। मैनोमीटर की रीडिंग और संतृप्त भाप के तापमान के बीच निम्नलिखित संबंध है:
शून्य दबाव को सामान्य वायुमंडलीय दबाव (760 मिमी एचजी) माना जाता है।
नसबंदी तभी हासिल की जा सकती है जब आटोक्लेव पूरी तरह से चालू हो और विशेष रूप से प्रशिक्षित कर्मियों द्वारा ठीक से संचालित हो। इसलिए, नसबंदी शासन की लगातार निगरानी करना आवश्यक है, जो भौतिक (अधिकतम थर्मामीटर, आदि), जैविक (सूक्ष्मजीवों के परीक्षण संस्कृतियों के बीजाणुओं के साथ बायोटेस्ट) और रासायनिक (रासायनिक परीक्षण, संकेतक जैसे आईएस) विधियों द्वारा किया जाता है।
आटोक्लेव की नसबंदी के तरीके का नियंत्रण किया जाता है रासायनिक माध्यम सेहर बार आटोक्लेव लोड होता है। रासायनिक परीक्षण - ग्लास ट्यूब के साथ रासायनिकएक निश्चित गलनांक होने पर: एंटीपायरिन, रेसोरिसिनॉल - 110 ° 1 °, बेंजोइक एसिड - 120 ± 2 °, बेंजामाइड - 126 ± 1 °, यूरिया, निकोटीनैमाइड, डी (+) - मैननोज - 132 ± 2 °। भाग रासायनिक परीक्षणएक एनिलिन डाई (मैजेंटा, जेंटियन वायलेट, आदि) पेश की जाती है, जो पिघलने पर पदार्थ को समान रूप से रंग देती है। वर्तमान में, आईएस प्रकार (विनार, रूस) के संकेतक अधिक बार उपयोग किए जाते हैं, जो उस पर लागू संकेतक मिश्रण की एक परत के साथ कागज की एक पट्टी का प्रतिनिधित्व करते हैं और न केवल तापमान के परिचालन दृश्य नियंत्रण के लिए डिज़ाइन किया गया है, बल्कि नसबंदी समय (आईएस-) 120, आईएस-132)। परीक्षण संस्कृति के बीजाणुओं के साथ बायोसे का उपयोग करके नसबंदी आहार की त्रैमासिक निगरानी की जाती है बैसिलस स्टीयरोटर्मोफिलसबीकेएम बी-718।
1.2. पाश्चर ओवन - सूखी गर्मी नसबंदी।
पाश्चर ओवन में, सिलिकॉन रबर पर आधारित कांच, धातु और घिसने से बने उत्पादों को निष्फल किया जाता है। नसबंदी मोड: 160 डिग्री सेल्सियस - 150 मिनट; 180°С - 60 मिनट। प्रत्येक चक्र पर नसबंदी मोड नियंत्रण नसबंदी संकेतक आईएस-160, आईएस-180 की मदद से किया जाता है; त्रैमासिक - टेस्ट कल्चर बीजाणुओं के साथ बायोटेस्ट का उपयोग करना बेसिलस लाइकेनिफॉर्मिसपीसीएस। जी बीकेएम बी-1711 डी.
2. भरें घर परटेबल नंबर 1.
तालिका एक।
बंध्याकरण
3. कीटाणुनाशक से खुद को परिचित करें और भरें कक्षा मेंतालिका संख्या 2, आवेदन संख्या 1, 2 का उपयोग करते हुए।
तालिका 2।
कीटाणुशोधन
4. पोषक माध्यम से खुद को परिचित करें और भरें कक्षा मेंतालिका संख्या 3 "पोषक मीडिया"।
टेबल तीन
5. चिकित्सा सूक्ष्म जीव विज्ञान की एक शाखा के रूप में नैदानिक सूक्ष्म जीव विज्ञान दो मुख्य कार्यों को हल करता है: एक संक्रामक रोग का एटियलॉजिकल निदान और एटियोट्रोपिक चिकित्सा का तर्कसंगत विकल्प।
सूक्ष्मजीवविज्ञानी निदान की मुख्य विधिइन समस्याओं को हल करने के लिए है बैक्टीरियोलॉजिकल विधि. बैक्टीरियोलॉजिकल विधि का सार रोगज़नक़ की शुद्ध संस्कृति को अलग करना है, इसके प्रकार और रोगाणुरोधी दवाओं के प्रति संवेदनशीलता का निर्धारण करना है।
अध्ययनाधीन सामग्री का चयनरोग के प्रकार और इसके विकास (रोगजनन) के एक निश्चित चरण में रोगज़नक़ के प्रमुख स्थानीयकरण पर निर्भर करता है। सामग्री रक्त, मस्तिष्कमेरु द्रव, घाव का निर्वहन, थूक, मल, मूत्र आदि हो सकती है। सामग्री नमूनाकरण तकनीक है बहुत महत्वविश्वसनीय परिणाम प्राप्त करने में।
एक शुद्ध संस्कृति को अलग करने की सफलता शुद्धता से निर्धारित होती है पोषक माध्यम और खेती की स्थिति का चुनाव. कोई सार्वभौमिक पोषक माध्यम नहीं है, जिसके उपयोग से किसी भी सूक्ष्मजीव को किसी भी परीक्षण सामग्री से अलग करना संभव हो जाएगा। इसलिए, संभावित रोगजनकों की शारीरिक विशेषताओं को ध्यान में रखते हुए, सामग्री को एक विशिष्ट पोषक माध्यम या पोषक तत्व मीडिया (विशेष, वैकल्पिक, विभेदक निदान) के एक जटिल पर बोया जाता है। कुछ सूक्ष्मजीवों को विशेष खेती की स्थिति (एनारोबिक, माइक्रोएरोफिलिक, कार्बन डाइऑक्साइड की उच्च सामग्री के साथ) की भी आवश्यकता होती है।
रोगी की पैथोलॉजिकल सामग्री अक्सर सूक्ष्मजीवों का मिश्रण होती है। इस संबंध में, कार्य उन्हें अलग करना है और पृथक कॉलोनियां प्राप्त करना. एक माइक्रोबियल सेल के प्रजनन और एक प्रकार के सेल से मिलकर एक पृथक कॉलोनी, एक शुद्ध संस्कृति प्राप्त करने का आधार है। सूक्ष्मजीवविज्ञानी अभ्यास में, पृथक कालोनियों को प्राप्त करने के लिए विभिन्न विधियों का उपयोग किया जाता है। निम्नलिखित का सबसे अधिक उपयोग किया जाता है:
1. परीक्षण सामग्री की बुवाई "पैड के साथ स्ट्रोक" विधि- परीक्षण सामग्री को एक सीमित क्षेत्र में घने पोषक माध्यम की सतह पर लगाया जाता है, और फिर लगातार समानांतर स्ट्रोक के साथ बुवाई द्वारा वितरित किया जाता है।
2. ड्राईगल्स्की विधि- एक पोषक माध्यम के साथ पहले कप पर लगाई गई सामग्री और एक स्पैटुला के साथ बोई गई सामग्री को क्रमिक रूप से उसी रंग के साथ, इसे स्टरलाइज़ किए बिना, एक और 1-2 कप के लिए टीका लगाया जाता है।
3. क्षेत्र फसल विधि- अध्ययन की गई सामग्री को कई क्षेत्रों में एक लूप के साथ क्रमिक रूप से बोया जाता है। उसी समय, एक निश्चित बुवाई तकनीक (विधि .) गोल्ड) न केवल पृथक कालोनियों को प्राप्त करने की अनुमति देता है, बल्कि परीक्षण सामग्री के 1 मिलीलीटर (जी) में सूक्ष्मजीवों की संख्या भी निर्धारित करता है, जो अवसरवादी सूक्ष्मजीवों (ओपीएम) की एटियलॉजिकल भूमिका का आकलन करने में महत्वपूर्ण है।
5.1. एरोबेस के अलगाव के लिए बैक्टीरियोलॉजिकल विधि के पहले चरण को पूरा करना:
परीक्षण सामग्री से एक निश्चित तैयारी तैयार करें, ग्राम विधि के अनुसार दाग, सूक्ष्म रूप से, मॉर्फो-टिंकोरियल गुणों द्वारा पता लगाए गए सूक्ष्मजीवों की पहचान करें; सूक्ष्मजीवों की संख्या पर ध्यान दें। प्रोटोकॉल में परिणाम रिकॉर्ड करें और निष्कर्ष निकालें;
परीक्षण सामग्री को "एक मंच के साथ स्ट्रोक" विधि का उपयोग करके घने पोषक माध्यम के साथ आधा कप पर बोएं;
· परीक्षण सामग्री को ड्रायगल्स्की विधि (प्रदर्शन) का उपयोग करके पोषक माध्यम के साथ तीन प्लेटों पर बोना;
बर्तनों को टीका लगाने की तिथि के साथ लेबल करें और उन्हें 18-24 घंटों के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर थर्मोस्टेट में उल्टा रख दें।
6. रोग संबंधी सामग्री के संग्रह और वितरण के लिए साधन
नोट: * - प्रयोग किया जाता है यदि सामग्री की प्राप्ति के बाद प्रयोगशाला में डिलीवरी का समय 1.5-2 घंटे से अधिक हो।
आत्म-नियंत्रण के लिए प्रश्न:
1. सूक्ष्मजीवों की खेती के सिद्धांतों का नाम और औचित्य बताइए।
2. रोग संबंधी सामग्री की बुवाई के लिए वैकल्पिक, विभेदक निदान और संचय मीडिया का उपयोग क्यों किया जाता है?
3. सूक्ष्मजीवों की शुद्ध संवर्धन प्राप्त करने के सिद्धांत की पुष्टि कीजिए।
4. संक्रामक रोगों के सूक्ष्मजीवविज्ञानी निदान में बैक्टीरियोलॉजिकल विधि "स्वर्ण मानक" क्यों है?
5. सूक्ष्मजीवों की शुद्ध कल्चर प्राप्त करने की रासायनिक और जैविक विधियाँ किस पर आधारित हैं?
6. नसबंदी और कीटाणुशोधन में क्या अंतर है?
7. सूक्ष्मजीवविज्ञानी और चिकित्सा पद्धति में नसबंदी और कीटाणुशोधन के उद्देश्य को सही ठहराएं।
8. नसबंदी व्यवस्था की निगरानी के लिए थर्मल इंडिकेटर सिस्टम का उपयोग करने के लाभ का औचित्य साबित करें (विनार, रूस से आईएस संकेतक के उदाहरण पर)।
साहित्य:
ट्यूटोरियल:
1. बोरिसोव एल.बी. मेडिकल माइक्रोबायोलॉजी, वायरोलॉजी, इम्यूनोलॉजी। - एम .: एमआईए एलएलसी, 2002. - एस। 26-29, 63-66, 150-159।
2. पॉज़्देव ओ. के. मेडिकल माइक्रोबायोलॉजी / एड। अकाद RAMS V. I. Pokrovsky। - एम .: जियोटार मेडिसिन, 2001. - एस। 76-77, 126-130, 253-265।
अतिरिक्त साहित्य:
1. रोगजनकता और कृमि के III - IV समूहों के सूक्ष्मजीवों के साथ काम की सुरक्षा: स्वच्छता नियम। - एम।: संघीय केंद्ररूस के स्वास्थ्य मंत्रालय के राज्य स्वच्छता और महामारी विज्ञान पर्यवेक्षण, 1999. - 107p।
सूक्ष्म जीव विज्ञान पर व्याख्यान।
परीक्षण।
जीवाणु अनुसंधान विधि। एरोबिक बैक्टीरिया की शुद्ध संस्कृति का अलगाव (1-2 चरण)
1. बैक्टीरियोलॉजिकल विधि का सार
3. पृथक कालोनियों को प्राप्त करने के तरीके
4. शुद्ध संस्कृति प्राप्त करने के तरीके
1. कोच और ड्रायगल्स्की विधि द्वारा प्राथमिक बीजाई करें
2. शुद्ध संस्कृति को अलग करें
कार्य योजना:
1. बैक्टीरियोलॉजिकल शोध विधि
2. बैक्टीरियोलॉजिकल विधि के चरण
3. अवधारणा: शुद्ध संस्कृति, तनाव, उपनिवेश
4. पृथक कालोनियों को प्राप्त करने के तरीके
5. एरोबिक बैक्टीरिया की शुद्ध संस्कृति प्राप्त करने के तरीके
संक्रामक रोगों के प्रयोगशाला निदान की मुख्य विधि बैक्टीरियोलॉजिकल विधि है। बैक्टीरियोलॉजिकल विधि का सार अध्ययन के तहत सामग्री और इसकी पहचान (जीनस, प्रजातियों, किस्मों की परिभाषा) से रोगजनकों का अलगाव है।
बैक्टीरियोलॉजिकल विधि आपको यह निर्धारित करने की अनुमति देती है:
1. रोगज़नक़ का प्रकार और रोग का निदान करना
2. एंटीबायोटिक्स जो रोगज़नक़ को मारते हैं और उचित उपचार निर्धारित करते हैं
3. संक्रमण के स्रोत की पहचान करने के लिए रोगज़नक़ के फागोवर और सेरोवर
पहला चरण पृथक कालोनियों को प्राप्त करने के लिए परीक्षण सामग्री का प्राथमिक टीकाकरण है। प्राथमिक बुवाई स्टोरेज मीडिया और डीडीएस (कप मीडिया) पर की जाती है।
दूसरा चरण अलग-अलग कालोनियों का लक्षण वर्णन है और मुख्य माध्यम के एक झुके हुए स्तंभ पर फिर से लगाकर उनसे शुद्ध संस्कृति प्राप्त करना है।
तीसरा चरण एक शुद्ध संस्कृति की पहचान है - जीनस, प्रजातियों, रोगज़नक़ों की किस्मों का निर्धारण, एंटीबायोटिक संवेदनशीलता का निर्धारण, फागोवर का निर्धारण।
सूक्ष्मजीवों की संस्कृति पोषक मीडिया पर उगाए गए बैक्टीरिया हैं। एक शुद्ध संस्कृति पोषक मीडिया पर उगाए जाने वाले बैक्टीरिया की एक प्रजाति है। एक प्रजाति के भीतर, ऐसी किस्में होती हैं जो एक विशेषता में भिन्न होती हैं:
1. Morphovars - आकृति विज्ञान में भिन्न
2. केमोवर - जैव रासायनिक गुणों में भिन्न
3. सेरोवर - एंटीजेनिक गुणों में भिन्न
4. फागोवर - फेज के प्रति संवेदनशीलता में भिन्नता
पहचान, सेरोवर के निर्धारण, फागोवर, एंटीबायोटिक दवाओं के प्रति संवेदनशीलता के लिए एक शुद्ध संस्कृति आवश्यक है। एक विशेष स्रोत (वोल्गा नदी, बीमार इवानोव, आदि) से पृथक बैक्टीरिया की एक प्रजाति है। कॉलोनी - घने पोषक माध्यम पर एक जीवाणु कोशिका के प्रजनन के दौरान गठित एक ही प्रजाति के जीवाणुओं का एक दृश्य संचय।
अध्ययन का पहला चरण पृथक कालोनियों को प्राप्त करने के लिए परीक्षण सामग्री का प्राथमिक टीकाकरण है। प्रारंभिक टीकाकरण से पहले, परीक्षण सामग्री की माइक्रोस्कोपी की जाती है। परीक्षण सामग्री में आमतौर पर रोगजनकों सहित विभिन्न जीवाणुओं का मिश्रण होता है। रोगज़नक़ को अलग करने के लिए, पोषक माध्यम का चयन करके और विशेष बोने की विधियों का उपयोग करके पृथक कॉलोनियों (एक ही प्रजाति के बैक्टीरिया) को प्राप्त करना आवश्यक है।
पृथक कालोनियों को प्राप्त करने की दो विधियाँ हैं:
1. ड्राईगल्स्की विधि
