FISH (fluorescencinė in situ hibridizacija) yra nepakeičiamas vėžio diagnostikos metodas. Naudojant specifinius fluorescencinius zondus, šis metodas leidžia nustatyti genomo persitvarkymus, tai yra patikslinti diagnozę, patikslinti prognozę ir pasirinkti tinkamą gydymą, atsižvelgiant į konkretų atvejį. Visų pirma, šis metodas taikomas sergant onkohematologinėmis ligomis. Anksčiau šiems tikslams buvo naudojamas įprastinis kariotipų nustatymas, tačiau jei paciento ląstelės kultūroje nepastebi ryškaus augimo, tai labai apsunkina diagnozę šiuo metodu. Tokiais atvejais FISH naudojimas žymiai išplečia laboratorinės diagnostikos galimybes. Be to, naudojant FISH lengviau interpretuoti sudėtingus chromosomų pertvarkymus.

Laboratorijoje naudojami zondai centromerams, specifiniams chromosomų regionams ir genams. Dviejų spalvų zondai parenkami ieškoti translokacijų tokiu būdu, kad jei šalia yra dviejų genų fragmentai, kurie paprastai yra skirtingose ​​genomo dalyse, du signalai įvairių spalvų- po vieną iš kiekvieno zondo, sujungti į tą, kuris skiriasi šviesa nuo originalių. Taigi, pavyzdžiui, aptinkamos BCR-ABL translokacijos, paplitusios tarp įvairių tipų leukemijų. Genai, tokie kaip MLL, TEL ir RARα, gali persitvarkyti, sudarydami chimerinius genus su skirtingomis sekomis. Šiuo atveju du zondai priartinami prie skirtingų geno galų. Jei genas nepažeistas, kiekviename preparato branduolyje bus po vieną tašką, jei jis sulaužytas, bus du skirtingų spalvų taškai. Dėl šios priežasties FISH yra lankstesnė chromosomų translokacijų nustatymo metodika nei PGR. Zondas sėdės ant chromosomos, neatsižvelgiant į tai, kaip tiksliai įvyko kitos chromosomos fragmento lūžis ir prijungimas tam tikroje srityje, priešingai nei PGR naudojami oligonukleotidai, kurie atpažįsta specifinius, nors ir įprastus, pertvarkymus.

FISH aptiktų žymenų skydelis leidžia įvertinti lėtinės limfoidinės leukemijos prognozę. 11q ir 17p delecijos yra susijusios su prasta prognoze, o 13q ištrynimas, kaip ir normalus kariotipas, yra susijęs su palankia prognoze. Esant trisomijai 12 chromosomoje, atvejį galima priskirti vidutinei rizikos grupei.

Mielomos rizikos kategorija taip pat siejama su delecijų ir translokacijų deriniu, t(4;14), t(14;16) translokacijos ir 17p delecija yra susijusios su prasta prognoze. Tokie diagnostiniai tyrimai atliekami raudonųjų kaulų čiulpų biopsijose po sodrinimo. Nedidelė inversija, kurią lydi chimerinio EML4-ALK geno susidarymas, būdinga nesmulkialąsteliniam plaučių vėžiui. Chimerinio geno produktas yra tikslinės terapijos tikslas. Tokį persitvarkymą galima nustatyti ir FISH metodu. HER2 amplifikacija dažnai vertinama pagal netiesioginį požymį – raiškos lygio padidėjimą, tam pasitelkiant imunohistochemijos metodą, tačiau kai kuriose šalyse tam rekomenduojama naudoti FISH arba bent jau patvirtinti šį metodą.

Trumpas atsakymas: Fluorescencinės in situ hibridizacijos metodas (FISH – fluorescencinė in situ hibridizacija) apima unikalių DNR nukleotidų sekų naudojimą kaip zondą, ieškant norimų DNR sekų iš paciento gautoje medžiagoje. Metodas pagrįstas DNR zondo papildomu prisijungimu prie metafazių chromosomų arba tarpfazių ląstelių DNR. DNR zondas ir tiriamoji DNR denatūruojami, kad susidarytų viengrandė DNR. DNR zondas pridedamas prie chromosomų preparato ir tam tikrą laiką inkubuojamas. Fluorochromu pažymėto zondo buvimas arba nebuvimas DNR po hibridizacijos nustatomas tiriant chromosomas naudojant fluorescencinę mikroskopiją.

Išsamus atsakymas: Fluorescencinės hibridizacijos metodas savo vietoje leidžia identifikuoti atskiras chromosomas arba atskiras jų sritis metafazių chromosomų preparatuose arba tarpfazių branduoliuose, remiantis papildoma DNR zondo, konjuguoto su fluorescencine etikete, ir norimos chromosomos srities sąveika. Norint vizualizuoti peptidinius-nukleininius junginius chromosomoje, naudojami PNA zondai, kurių pagrindą sudaro baltyminis produktas.
Metodas pagrįstas papildomu DNR zondo prisijungimu prie metafazių chromosomų arba tarpfazių ląstelių DNR ir apima šiuos veiksmus:
1. Denatūravimas dvigrandė zondo DNR ir tikslinė DNR į viengrandę, veikiant aukštai temperatūrai arba cheminiams veiksniams.
2. Hibridizacija DNR zondas su DNR taikiniu pagal komplementarumo principą susidarant dvigrandei hibridinei molekulei
3. Plovimas po hibridizacijos pašalinti nehibridizuotą DNR zondą
4. Analizė hibridizacijos signalus fluorescenciniu mikroskopu

Privalumai FISH molekulinės genetinės diagnostikos metodai apima greitą analizę didelis skaičius ląstelės, didelis jautrumas ir specifiškumas, gebėjimas tirti nekultivuojamas ir nesidalijančias ląsteles.
Trūkumai metodas yra nesugebėjimas gauti informacijos apie fizinė būklė Tiriama DNR arba chromosomos sritis.
FISH naudojamas prenatalinei molekulinei genetinei diagnostikai ir navikų apibūdinimui; pediatrinėje praktikoje jis paprastai naudojamas submikroskopinėms ištrynoms, susijusioms su specifiniais apsigimimais, nustatyti. Mikrodelecijomis pagrįsti sindromai anksčiau buvo laikomi nežinomos etiologijos ligomis, nes chromosomų ištrynimai ir persitvarkymai, sukeliantys šių ligų vystymąsi, dažniausiai nėra vizualizuojami. tradiciniais metodais chromosomų analizė. Tokias mažas delecijas tam tikruose chromosomų regionuose gali labai tiksliai aptikti FISH. Ligos, kurias sukelia submikroskopinės delecijos, apima Prader-Willi, Angelman, Williams, Miller-Dieker, Smith-Magenis sindromai ir velokardiofacialinis sindromas. FISH palengvina šių sindromų diagnostiką netipiniais atvejais, ypač kūdikystėje, kai daugelio diagnostiškai reikšmingų ligos požymių dar nėra. Šį molekulinės genetinės diagnostikos metodą patartina naudoti ir paauglystėje bei pilnametystėje, kai kinta tipiški vaikystėje būdingi klinikiniai ligos požymiai.

121. DNR zondai. Jų naudojimas nustatant paveldimas ligas.

Trumpa apžvalga

DNR zondas yra trumpas DNR fragmentas, konjuguotas su fluoresceinu, fermentu arba radioaktyviu izotopu, kuris naudojamas hibridizuotis su tikslinės DNR molekulės komplementaria sritimi.

Pagrindinė dalis

DNR diagnostikos sistemos

Informacija apie visą organizmo savybių įvairovę yra jo genetinėje medžiagoje. Taigi bakterijų patogeniškumą lemia konkretaus geno ar genų rinkinio buvimas jose, o paveldima genetinė liga atsiranda dėl konkretaus geno pažeidimo. DNR segmentas, lemiantis šį biologinį požymį, turi griežtai apibrėžtą nukleotidų seką ir gali tarnauti kaip diagnostinis žymeklis.

Daugelis greitų ir patikimų diagnostikos metodų yra pagrįsti hibridizacija nukleino rūgštys- dviejų vienas kitą papildančių skirtingų DNR molekulių segmentų suporavimas. Procedūra bendrais bruožais yra tokia.

1. Viengrandės DNR taikinio fiksavimas ant membraninio filtro.

2. Pažymėto vienos grandinės DNR zondo, kuris tam tikromis sąlygomis (temperatūra ir jonų stiprumas) poruojasi su tiksline DNR, panaudojimas.

3. Filtro plovimas, kad būtų pašalintas nesurišto žymėto DNR zondo perteklius.

4. Zondų/taikinių hibridinių molekulių aptikimas.

Atliekant diagnostinius tyrimus, pagrįstus nukleorūgščių hibridizacija, pagrindiniai yra trys komponentai: DNR zondas, DNR taikinys ir hibridizacijos signalo aptikimo metodas. Aptikimo sistema turi būti įjungta aukščiausias laipsnis specifinis ir labai jautrus.

* Fluoresceinas (dioksifluoranas, uranas A) - organinis junginys, fluorescenciniai dažai. AT analitinė chemija fluoresceinas naudojamas kaip fluorescencinis rūgšties ir bazės indikatorius. biochemijoje ir molekulinė biologija Fluoresceino izotiocianato dariniai kaip biologiniai dažikliai antigenams ir antikūnams nustatyti.

* Aptikimas yra kažko aptikimas, identifikavimas, radimas.

*konjugacija=konjugacija

*Jei DNR mišinys, pavyzdžiui, žmogaus ir pelės, išlydomas ir atkaitinamas viename „mėgintuvėlyje“, kai kurios pelės DNR grandinių dalys rekombinuosis su komplementariomis žmogaus DNR grandinių dalimis, kad susidarytų hibridai. Tokių vietų skaičius priklauso nuo rūšies giminingumo laipsnio. Kuo rūšys arčiau viena kitos, tuo daugiau DNR grandžių komplementarumo regionų. Šis reiškinys vadinamas DNR-DNR hibridizacija.

122. Tiesioginės DNR diagnostikos naudojimo metodai ir sąlygos.

Trumpa apžvalga:

Taikant tiesioginius metodus, nustatomi pirminės DNR nukleotidų sekos sutrikimai (mutacijos ir jų tipai). Tiesioginiai metodai pasižymi tikslumu, siekiančiu beveik 100%.

Tiesioginės diagnostikos tikslas – nustatyti mutantinius alelius (pirminės DNR nukleotidų sekos anomalijas, mutacijas ir jų tipus).

Tiesioginės DNR diagnostikos trūkumas – būtinybė žinoti tikslią geno vietą ir jo mutacijų spektrą. Tiesioginės DNR diagnostikos metodai skirti sergant tokiomis ligomis kaip fenilketonurija (R408W mutacija), cistinė fibrozė – (dažniausia delF508 mutacija), Hantingtono chorėja (trinukleotidų pasikartojimų išsiplėtimas-CTG pasikartojimai) ir kt.

Pilnas atsakymas:

Taikant tiesioginius metodus, nustatomi pirminės DNR nukleotidų sekos sutrikimai (mutacijos ir jų tipai). Tiesioginiai metodai pasižymi tikslumu, siekiančiu beveik 100%. Tačiau praktikoje šie metodai gali būti taikomi tam tikromis sąlygomis:

1) žinoma citogenetinė geno, atsakingo už paveldimos ligos vystymąsi, lokalizacija,

2) ligos genas turi būti klonuotas ir žinoma jo nukleotidų seka.

Tiesioginės diagnostikos tikslas – nustatyti mutantinius alelius (pirminės DNR nukleotidų sekos anomalijas, mutacijas ir jų tipus). Dėl didelio tiesioginio DNR diagnostikos metodo tikslumo daugeliu atvejų nereikia atlikti visų šeimos narių DNR analizės, nes atitinkamo geno mutacijos aptikimas leidžia beveik 100% tiksliai patvirtinti diagnozę ir nustatyti genotipą. visi sergančio vaiko šeimos nariai, įskaitant heterozigotinius nešiotojus.

Tiesioginės DNR diagnostikos trūkumas – būtinybė žinoti tikslią geno vietą ir jo mutacijų spektrą.

Tiesioginės DNR diagnostikos metodai skirti sergant tokiomis ligomis kaip fenilketonurija (R408W mutacija), cistinė fibrozė – (dažniausia delF508 mutacija), Hantingtono chorėja (trinukleotidų pasikartojimų išsiplėtimas-CTG pasikartojimai) ir kt.

Tačiau iki šiol daugelio ligų genai nėra kartografuoti, nežinoma jų egzonintronų organizacija, daugeliui paveldimų ligų būdingas ryškus genetinis heterogeniškumas, neleidžiantis visapusiškai panaudoti tiesioginių DNR diagnostikos metodų. Todėl tiesioginės DNR diagnostikos metodo informacinis turinys labai skiriasi. Taigi, diagnozuojant Huntingtono chorėją, achondroplaziją, ji yra 100%, su fenilketonurija, cistine acidoze, adrenogenitaliniu sindromu - nuo 70 iki 80%, o su Wilson-Konovalov liga ir Duchenne / Becker miopatija - 45-60%. Šiuo atžvilgiu naudojami netiesioginiai paveldimų ligų molekulinės genetinės diagnostikos metodai.

Standartiniai mikroskopai neleidžia ištirti ląstelių molekuliniu lygiu. Vien galingo padidėjimo čia neužtenka. Reikalingi skaitmeniniai vaizdai, papildomi reagentai ir kitos medžiagos bei instrumentai. Šiuo metu DNR ir RNR analizei naudojamas metodas, vadinamas hibridizacija in situ. Kadangi tai apima mėginių dažymą, po kurio atliekama spinduliuotės analizė, ji taip pat vadinama fluorescencine hibridizacija arba FISH.

Fluorescencinė in situ hibridizacija plačiai naudojama genetiniuose tyrimuose, vėžio diagnostikoje, nėštumo valdyme ir daugelyje kitų mokslo sričių. Metodas, kaip rodo pavadinimas, yra pagrįstas DNR ir RNR molekulių savybe suformuoti stabilius ryšius su zondais, tai yra, sudaryti hibridines molekules. Žodžiai „in situ“ reiškia, kad visi stebėjimai atliekami „in situ“, tai yra tiesiogiai, nenaudojant papildomos terpės.

DNR zondai (zondai) papildo tiriamojo mėginio molekules. Jie apima nukleozidus, kurie yra pažymėti fluoroforais (medžiagomis, kurios suteikia molekulei fluorescencijos savybę). Šis metodas vadinamas tiesioginiu ženklinimu; jei hibridinės konjuguotos molekulės naudojamos kaip žymenys, gaunamas netiesioginis žymėjimas. Naudojant tiesioginį ženklinimą, hibridizaciją galima stebėti fluorescenciniu mikroskopu iškart po jos pabaigos. Netiesioginiam ženklinimui atliekama kita dažymo procedūra. Jis atskiria konjuguotas molekules nuo tirtų mėginių pagal spalvą.

Hibridizacijos metodas su netiesioginiu ženklinimu reikalauja daugiau laiko ir reagentų, tačiau leidžia pasiekti patikimesnių rezultatų. Signalo lygis tokiu atveju bus didesnis, be to, galimas ir laipsniškas jo stiprinimas. Klonuotos DNR sekos (PGR produktai, genomo DNR, pažymėti oligonukleotidai ir kt.) naudojamos kaip žymėjimo zondai. Zondo ženklinimas atliekamas keliais būdais. Įprasti metodai yra nikelio transliacija ir polimerazės grandininė reakcija (PGR) su pažymėtais nukleotidais.

Procedūros eiliškumas

In situ metodas prasideda nuo parengiamasis etapas- zondų projektavimas. Zondų matmenys neturėtų būti pakankamai dideli, kad trukdytų tyrimo procesui. Per maži zondai taip pat nepageidautini, nes jie negarantuoja patikimų rezultatų. Todėl tyrimams paimami iki 1 tūkstančio bp dydžio zondai. Jei zondas yra dvigrandė DNR, rūgštis denatūruojama prieš hibridizaciją. Gavus pageidaujamą rezultatą (nudažytos tam tikros chromosomų sritys arba visos chromosomos), blokuojama tolesnė DNR zondų hibridizacija su pasikartojančiomis sekomis. Tam į hibridizacijos mišinį pridedamos nepažymėtos DNR kartotinės molekulės.

Kitas tyrimo etapas – tarpfazių branduolių arba metafazių chromosomų preparatų ruošimas. Ląstelės fiksuojamos substrate ant stiklo, po to DNR denatūruojama. Siekiant sumažinti denatūravimo temperatūrą ir išsaugoti branduolių bei chromosomų morfologiją, denatūravimas atliekamas pridedant formadido. Po to į medžiagą pridedami zondai ir kelias valandas atliekama hibridizacija. Jį užbaigus, atliekamas kelių etapų plovimas, kad būtų pašalinti zondai, nesusiję su mėginio molekulėmis.

hibridizacijos metodas savo vietoje* (vietoje, lot.) yra pagrįstas DNR arba RNR gebėjimu formuoti stabilias hibridines molekules su DNR/RNR zondais tiesiai ant fiksuotų chromosomų ir tarpfazių branduolių preparatų. Naudodami šį metodą galite nustatyti tikslią beveik bet kurios DNR ar RNR sekos vietą ląstelėje, ląstelės branduolyje ar chromosomose.

Dėl hibridizacijos. savo vietoje tinkami bet kokių audinių ar organų ląstelių citologiniai arba histologiniai preparatai, paruošti standartiniais metodais. Klinikinėje citogenetikos laboratorijoje naudojami kultivuotų periferinio kraujo limfocitų, chorioninio epitelio citotrofoblastinių ląstelių, vaisiaus vandenų kultivuotų ir nekultivuotų ląstelių, įvairių audinių iš abortinės medžiagos preparatai, taip pat žandinio epitelio ir kraujo ląstelių tepinėliai.

hibridizacijos metodas savo vietoje yra ypač svarbus praktinei citogenetikai dėl neizotopinio varianto, pagrįsto neradioaktyviais modifikuotais nukleotidais paženklintų zondų, sukūrimo. Neizotopiniai hibridizacijos ant preparatų variantai (ypač fluorescenciniai) turi nemažai privalumų, lyginant su izotopiniais: didelė skiriamoji geba, kuri prilygsta mikroskopo raiškai (0,1 - 0,2 μm), nereikia statistinio rezultatų apdorojimo, greitis ir saugumas sveikatos tyrėjams

Be to, įvairiai modifikuotų mėginių derinys aptiktas naudojant skirtingos sistemos aptikimas, leidžia vienu metu nustatyti dviejų ar daugiau DNR sekų vietą vienoje ląstelėje arba vienoje metafazės plokštelėje. O naudojant pasikartojančias sekas, pažymėtas fluorochromais, kaip DNR zondus, procedūros laikas sutrumpėja iki 7–9 valandų (klasikinė neizotopų hibridizacija trunka dvi dienas, izotopų variantai – nuo ​​savaitės iki mėnesio), o tai ypač svarbu prenatalinei diagnostikai. Naudojimas FISH metodas citogenetinėje diagnostikoje leidžia nustatyti struktūrinius chromosomų persitvarkymus, nustatyti žymenų chromosomų pobūdį, analizuoti skaitinius chromosomų rinkinio pažeidimus tiek metafazėse, tiek tarpfazių branduoliuose.

FISH metodo principas

Pagrinde FISH metodas yra hibridizacijos reakcija tarp dirbtinai sukurto DNR zondo ir jį papildančios branduolinės DNR nukleotidų sekos. DNR molekulė susideda iš dviejų spirališkai sujungtų nukleotidų grandinių, o hibridizacija galima tik grandinėms atsiskyrus. Norint atjungti DNR nukleotidų grandines, naudojama denatūracija (toliau hibridizacijai turi būti denatūruota ir tiriamo mėginio branduoliuose esanti DNR, ir pats DNR zondas). Po denatūravimo DNR zondas hibridizuojasi su savo komplementaria nukleotidų seka ir gali būti aptiktas naudojant fluorescencinį mikroskopą.

Šiuo būdu, bendra forma nustatymo protokolas ŽUVYS gali būti pateikta tokia forma:

1. Histologinio arba citologinio preparato paruošimas.
Histologinis preparatas ruošiamas pagal standartinę schemą: pjovimas, žymėjimas, laidų sujungimas, išpylimas, mikrotomija, pjūvio uždėjimas ant stiklelio ir deparafinavimas. Ruošiant citologinį preparatą, naudojami specialūs nusodinimo tirpalai ir centrifugavimas, todėl galima gauti koncentruotą ląstelių suspensiją.

2. Pirminis apdorojimas (jei reikia).
Preparatas apdorojamas proteazėmis, kad pašalintų hibridizaciją trukdančių baltymų buvimą.

3. DNR zondo uždėjimas preparatui ir vėlesnis denatūravimas.
Norint denatūruoti zondą ir mėginio DNR, jie apdorojami formamidu ir kaitinami iki maždaug 85-90°C temperatūros.

4. Hibridizacija.
Po denatūravimo preparatas atšaldomas iki tam tikros temperatūros (klinikinių tyrimų atveju 37°C) ir kelias valandas inkubuojamas drėgnoje kameroje (inkubavimo trukmė nurodyta kiekviename konkrečiame protokole). Šiuo metu denatūravimui ir hibridizavimui naudojami automatiniai hibridizatoriai.

5. Skalbimas.
Pasibaigus hibridizacijai, neprisirišę zondai turi būti nuplauti, nes kitaip susidarytų fonas, dėl kurio būtų sunku įvertinti FISH rezultatus. Skalavimui paprastai naudojamas tirpalas, kuriame yra citrato ir natrio chlorido (SSC).

6. Priešinis dažymas.
Fluorescencinių dažų (DAPI – 4,6-diamidin-2-fenilindolas; propidžio jodidas) pagalba nudažoma visa branduolinė DNR.

7. Rezultatų analizė naudojant fluorescencinį mikroskopą. Įprastos operacijos (vaško šalinimas, išankstinis apdorojimas, plovimas) gali būti automatizuotos.

* - Medžiaga parengta remiantis informacija iš atvirų šaltinių.

Nustatymo metodas fluorescencinė in situ hibridizacija.

Tiriama medžiaga žr. aprašymą

Galimas vizitas į namus

Tyrimas naudojamas individualiai krūties ar skrandžio vėžio adjuvantinei chemoterapijai parinkti.

Krūties vėžys (BC) užima pirmąją vietą tarp moterų onkologinių ligų. Krūties vėžio ląstelėse gali būti skirtingi tipai receptoriai, jautrūs tam tikroms medžiagoms (hormonams ar kitoms biologiškai aktyvioms molekulėms). Atsižvelgiant į hormonų receptorių (estrogeno ir progesterono) arba 2 tipo žmogaus epidermio augimo faktoriaus receptorių (2 tipo žmogaus epidermio augimo faktoriaus receptorių, HER2) buvimą naviko ląstelėse, išskiriamas hormonų receptorių teigiamas, HER2 teigiamas ir trigubai neigiamas krūties vėžys. . Į tai svarbu atsižvelgti renkantis individualų gydymą ir prognozuojant gydymo sėkmę.

HER2 yra receptorius, kuris yra audiniuose ir paprastai dalyvauja ląstelių dalijimosi ir diferenciacijos reguliavime. Jo perteklius naviko ląstelių paviršiuje (hiperekspresija) lemia greitą nekontroliuojamą naviko augimą, didelę metastazių riziką ir mažą kai kurių gydymo rūšių veiksmingumą. Kai kurių krūties vėžio potipių HER2 hiperekspresija sukelia padidėjusį proliferaciją ir angiogenezę, taip pat apoptozės (genetiškai užprogramuoto ląstelių sunaikinimo) reguliavimo sutrikimą. Šiuo metu yra vaistų, nukreiptų į HER2 receptorius. Tai visų pirma Herceptin (trastuzumabas), kuris yra monokloninis antikūnas prieš HER2/neu receptorius.

HER2 (ErbB-2) onkogeno amplifikacija ir per didelė ekspresija yra gana specifiniai krūties karcinomos reiškiniai ir praktiškai nepasireiškia kitos lokalizacijos navikuose. Skrandžio vėžys (GC) yra viena iš nedaugelio išimčių: HER2 aktyvacija pastebima maždaug 10-15% šio organo piktybinių navikų atvejų ir koreliuoja su agresyvia ligos eiga. Sergant HER2 teigiamu krūties vėžiu, auglio ląstelių paviršiuje gali būti HER2 receptorių perteklius (vadinamas kaip HER2 teigiamas arba Hercept teigiamas). Šis reiškinys stebimas 15-20% moterų, sergančių krūties vėžiu. HER2 būklės įvertinimas yra svarbus nustatant gydymo taktiką.

Pagrindiniai standartizuoti HER2/neu per didelės ekspresijos ir (arba) HER2/neu geno amplifikacijos nustatymo metodai yra imunohistocheminis (IHC) metodas ir fluorescencinė in situ hibridizacija (FISH). Abu tyrimai atliekami su histologiniais preparatais (auglio medžiagos pjūviais, įterptais į parafiną), naudojant polikloninius antikūnus (IHC), fluorescencinius zondus (FISH) ir įvairias vaizdo gavimo sistemas.

Vertinant IHC reakcijos rezultatus, raiška atsižvelgiama tik į invazinį naviko komponentą. Reakcijos rezultatai vertinami naudojant balų skalę: 0, 1+, 2+, 3+, sukurtą testo gamintojo ir patvirtintą ekspertų. Hercepto būsena, įvertinta kaip 0 ir 1+, turėtų būti laikoma neigiama – nėra per didelės baltymo ekspresijos, o tai koreliuoja su jo geno amplifikacijos nebuvimu. Hercepto būsena, įvertinta 3+, yra teigiama, ty yra baltymų perteklius, atitinkantis geno amplifikacijos buvimą. Hercepto statusas 2+ laikomas neapibrėžtu, t.y., baltymų ekspresija, nustatyta remiantis imunohistochemine reakcija, negali būti patikimai vertinama pagal genų amplifikaciją, todėl reikalingas tyrimas, kuris tiesiogiai atskleistų amplifikacijos buvimą ar nebuvimą. FISH metodas naudojamas pjūviams iš to paties mėginio (bloko), kuriame buvo atliktas imunohistocheminis tyrimas. Atliekant FISH hibridizaciją, HER2 geno amplifikacijos buvimas vertinamas skaičiuojant raudonai fluorescencinių (atitinkančių pažymėtus HER2 genus) ir žalios spalvos fluorescencinius signalus, žyminčius 17-osios chromosomos centromerinę sritį. Didesnis nei 2 santykis rodo, kad yra HER2 amplifikacija. FISH metodas yra jautresnis nei IHC, nes leidžia tiesiogiai įvertinti amplifikacijos buvimą ar nebuvimą.

Medžiaga tyrimams: parafino blokas su naviko biopsija.

Dėmesio! BŪTINAI:

• stiklelis su IHC dažymu su antikūnais prieš HER2/neu
• gydytojo siuntimas arba išrašas su histologinio ir IHC tyrimo su antikūnais prieš Her-2/neu rezultatais

Literatūra

• Zavalishina L.E., Frankas G.A. Morfologinis HER2 būklės tyrimas. Metodika ir atlasas. - M.: Red. Media Medica. 2006:98.
• Piktybinės ligos Rusijoje 2011 m. (sergamumas ir mirtingumas). Red. Į IR. Chissova, V.V. Starinskis, G.V. Petrova. - M.: FGBU "MNIOI juos. P.A. Herzenas“ iš Rusijos sveikatos apsaugos ministerijos. 2013: 289.
• Onkologija. Klinikinės gairės. Rusijos onkologų asociacija. Red. Į IR. Chissova, S.L. Darjalova. - M.: Red. „GEOTAR-Media“. 2008:702.
• Bang Y.J., Van Cutsemas E., Feyereislova A., Chung H.C., Shen L., Sawaki A. ir kt. Trastuzumabas kartu su chemoterapija, palyginti su vien chemoterapija HER2 teigiamo pažengusio skrandžio arba skrandžio ir stemplės jungties vėžio (ToGA) gydymui: 3 fazės, atviras, atsitiktinių imčių kontroliuojamas tyrimas. Lancetas. 2010; 376: 687-697.
• Dabbsas D.J. Diagnostinė imunohistochemija: teranostinės ir genominės programos. Elsevier, 4-asis leidimas. 2013:960.
• Ferlay J., Shin H.R., Bray F., Forman D., Mathers C., Parkin D.M. GLOBOCAN 2008, Vėžio dažnis ir mirtingumas visame pasaulyje: IARC vėžio bazė Nr. 10. Lionas, Prancūzija: Tarptautinė vėžio tyrimų agentūra; 2010. Galima rasti adresu: http://globocan.iarc.fr.
• Goldhirsch A., Glick J.H., Gelber R.D., Coates A.S., Thurlimann B., Senn H.J. Susitikimo akcentai: Tarptautinis ekspertų sutarimas dėl pirminės ankstyvojo krūties vėžio terapijos 2005 m. Onkologijos metraštis. 2005;16(10):1569-1583.
• Kurman R.J., Carcangiu M.L., Herrington C.S., Young R.H. PSO moterų reprodukcinių organų navikų klasifikacija. WHO Press, 4-asis leidimas. 2014; 4:316.
• NordiQC. http://www.nordiqc.org.
• Park D.I., Yun J.W., Park J.H. ir kt. Her2 / neu amplifikacija yra nepriklausomas skrandžio vėžio prognozinis veiksnys. Virškinimo trakto ligos ir mokslai. 2006;51(8):1371-1379.
• Slamon D. ir kt. Adjuvantas trastuzumabas sergant HER2 teigiamu krūties vėžiu. Naujosios Anglijos medicinos žurnalas. 2011; 365: 1273-1283.